复方风柜斗草提取工艺的研究

陈美惠，刘文雅，李 黎

风柜斗草又名肉穗草、风鼓斗草，来源于野牡丹科植物肉穗草属楮头红(Sarcopyramis nepalensis Wall)的全草，主要分布于我国福建、广东、台湾等地［1］，其性平、味甘，具有凉热解毒、凉血利水、去肝火、清肺热的功效，用于急性肝炎、肺热咳嗽、风湿痹痛、耳鸣耳聋及目雾羞明等治疗［2］。现代药理研究表明，风柜斗草全草含黄酮类成分［3］，其提取物具有清除自由基、抗小鼠肝脂质过氧化、抗小鼠肝损伤及抑菌作用［4-5］。向天盏(Scutellaria indica L.)又名韩信草、大力草、耳挖草［《生草药性备要》］、金茶匙［《本草求原》］、顺经草(贵州)、大叶半枝莲(广西)、虎咬癀(福建)，为唇形科植物向天盏的全草，入药首见于《生草药性备要》。原植物为多年生草本，主要分布于江南各省区，北达河南及陕西，其味辛、微苦、性凉，归肺、肝经，药材地上部分含有黄酮类成分［6］。本实验以总黄酮含量为指标，通过单因素试验比较水煎法、回流法和渗漉法对复方风柜斗草中有效成分含量的影响，筛选最佳提取方法，并通过正交试验优选该制剂的提取工艺。

1 材料与仪器

1.1 材料 风柜斗草(福建南靖，批号1207270)，向天盏(福建南靖，批号130901)，以上两药购于福建省漳州片仔癀国药堂医药连锁有限公司;芦丁对照品(中国药品生物制品检定所，批号10080-200707)、槲皮素对照品(南京景竹生物科技有限公司，批号100080-200809)，均购于中国药品生物制品检定所;95%乙醇、正丁醇、甲醇、硝酸铝、氢氧化钠等试剂均为分析纯级。

1.2 仪器 电子天平FA2004N(上海精密科学仪器有限公司)，紫外分光光度计(棱光)UN754N(上海精密科学仪器有限公司)，旋转蒸发仪GG17(上海申生科技有限公司)。

2 方法

2.1 化学成分的确定 文献报道风柜斗草和向天盏均有黄酮类成分，经薄层层析试验也证明确有黄酮类成分。风柜斗草、向天盏及两者混合物分别用70%乙醇提取，提取液加热回收乙醇，浓缩液加适量水用正丁醇萃取，正丁醇液挥去溶剂，残渣甲醇溶解供点样用。以芦丁、槲皮素作对照，用硅胶CMCNa板，正丁醇-醋酸-水(4∶1∶1)为展开剂，UV365nm 紫外灯下显黄色萤光斑点，样品中有与对照品相应的斑点，见图1。

图1 薄层层析图谱

2.2 提取方法的确定 根据处方比例称取风柜斗草和向天盏药材粗粉混合均匀分为三份，分别用水煎法、回流法和渗漉法提取，并测定总黄酮含量。

2.2.1 水煎法 药材加水煎煮2次，每次2 h，水煎液浓缩至药液比为1∶1时，加2倍量乙醇搅拌放置过夜，滤过，滤液回收乙醇，浓缩液加适量水用正丁醇萃取，萃取液回收溶剂，残渣用60%乙醇溶解制成供试液。

2.2.2 回流法 药材以70%乙醇为溶剂，回流提取2次，每次2 h，提取液合并，回收乙醇，浓缩液同2.2.1法用正丁醇萃取，制备供试液。

2.2.3 渗漉法 药材以70%乙醇为溶剂，用渗漉法提取，收集提取液为药材的18倍量，回收乙醇浓缩液同2.2.1法用正丁醇萃取，制备供试液。

2.2.4 总黄酮测定 精密称取干燥的芦丁对照品5 mg于10 mL量瓶中，用60%的乙醇溶解，定容至刻度，摇匀，制成0.5 mg/mL的芦丁对照液。精取对照液和供试液各2 mL，置25 mL容量瓶中，各加水6 mL，加5%亚硝酸钠溶液1 mL，摇匀，放置6 min，加10%硝酸铝溶液1 mL摇匀，放置6 min，加4%氢氧化钠试液10 mL摇匀，加水至刻度，放置15 min，以相应试剂作空白，500 nm波长处测定吸光度。

2.3 提取方法的优化［7-8］对渗漉法提取条件进行优化，选择最佳工艺，采用四因素三水平的正交试验法设计，四因素分别是乙醇的浓度、药材的粗细度、渗漉法的流速和接收液的量，各设三个水平见表1。试验分9组，按L9(34)正交设计表条件进行9次渗漉法提取，每组按照2∶1投料，取风柜斗草10 g、向天盏20 g，各组提取液，分别回收乙醇，浓缩液加适量水，用正丁醇萃取，萃取液回收溶剂，残渣用60%乙醇溶解并定容至100 mL，取2 mL按2.2.4法测定总黄酮含量。

表1 正交试验因素水平表

2.4 数据处理方法 以正交试验的方差分析表分析所得数据。

3 结果

3.1 不同提取方法对有效成分回收率的影响 水煎法、回流法、渗漉法考察不同提取方法测得复方风柜斗草中总黄酮成分的回收率分别是2.04%、2.68%、3.44%。

3.2 渗漉法提取工艺正交试验结果 见表2、表3。

表2 正交试验结果

表3 总黄酮正交试验方差分析表

4 讨论

通过水煎法、回流法、渗漉法考察不同提取方法对复方风柜斗草中总黄酮成分回收率的影响，结果表明以渗漉法的回收率较高，故选用此法。渗漉法提取属于动态浸出方法，有效成分浸出完全，溶剂利用率高，适用于贵重药材、毒性药材的提取。与水煎法、回流法提取相比，渗漉法提取不需要加热，可以有效地防止加热过程对活性成分的破坏［9-10］。

采用四因素三水平的正交试验法对渗漉法提取条件进行优化，从表2、表3可知，影响总黄酮提取因素的大小顺序为药材粗细度＞接收渗漉液量＞渗漉液流速＞乙醇浓度。其中，药材粗细度对提取工艺的影响差异显著，最佳渗漉提取工艺为A2B3C3D3，即用 70%乙醇、细粉、流速 4.5 mL/min，接收18倍渗漉液体积为最佳渗漉提取条件。此法合理、可行，可为提取复方风柜斗草的有效成分提供参考。

［1］卢 伟，曾橹炜.楮头红的性状及显微鉴别［J］.福建中医学院学报，2008，18(5):36-38.

［2］陈桂菲，叶淑玲.风柜斗草药用探讨［J］.时珍国医国药，2000，11(2):129-130.

［3］吴水华，陈文娟.风柜斗草中总黄酮超声提取工艺的研究［J］.海峡药学杂志，2010，22(6):32-33.

［4］李清禄，陈 强，何海斌，等.楮头红提取物的生物活性研究［J］.中国药学杂志，2007，42(17):1292-1295.

［5］万春鹏，郑 啸，陈海峰，等.东方肉穗草黄酮类化学成分研究［J］.中国中药杂志，2009，34(2):172-174.

［6］宋立人，洪 恂，丁绪亮，等.现代中药学大辞典上册［M］.北京:人民卫生出版社，2001:867.

［7］谢彦兵，肖红兵.正交设计法对大豆中提取异黄酮的工艺研究［J］.东南国防医药，2011，13(1):54-56.

［8］陈 艳，许 茜，许景峰，等.正交设计优化姜香脐贴中木香醇提工艺［J］.东南国防医药，2010，12(1):39-41.

［9］秦 婷，李 平，郭金甲，等.正交试验法优选马钱子渗漉提取工艺［J］.中国实验方剂学杂志，2013，19(22):44-46.

［10］刘绍华，覃青云，方 堃，等.渗漉法提取两面针活性成分工艺的研究［J］.中草药，2006，37(3):373-375.