天龙茶中黄芩苷含量测定的研究

叶颖霞 王振华 曾令清 田军 梁家龙 马国辉

天龙茶为广州医科大学附属第一医院院内制剂, 由黄芩、青天葵、防风、紫苏子等十三味中药配伍组成, 具有化痰止咳, 健脾和胃的功效。目前, 该制剂尚无含量测定部分,黄芩为本制剂的君药, 本文将建立天龙茶中黄芩苷的含量测定方法。

1 仪器与试药

1.1 仪器 岛津高效液相色谱仪, 紫外检测器, Labsolutions数据处理软件系统, 超声波清洗器, 电子天平。

1.2 试药 黄芩苷；甲醇, 磷酸, 水为超纯水, 其他试剂均为分析纯；制剂天龙茶为实验室自制。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 色谱柱：YMC-Pack ODS-AM (250 mm×4.6 mm, 5 μm), 流动相：甲醇-0.2%磷酸溶液(40:60)；流速：1.0 ml/min；检测波长277 nm；进样量：10 μl。

2.2 溶液的制备

2.2.1 对照品溶液的制备 取黄芩苷对照品适量, 加甲醇制成每1 ml含22 μg的溶液, 即得。

2.2.2 供试品溶液的制备 取天龙茶粉末约0.15 g, 置于具塞三角瓶中, 加入70%乙醇25 ml, 超声处理15 min, 放冷,再称定重量, 用70%乙醇补足减失重量, 摇匀, 过滤, 量取滤液2 ml, 置10 ml量瓶中, 加70%乙醇稀释至刻度, 摇匀,即得。

2.2.3 阴性样品溶液的制备 照供试品溶液的制备方法制得阴性样品溶液。

2.3 专属性试验 吸取对照品溶液、供试品溶液、阴性样品溶液各10 μl, 分别注入高效液相色谱仪中, 依法测定, 记录色谱图(结果见图1), 对照品黄芩苷保留时间约为25.7 min, 供试品溶液有对应峰显示, 阴性样品无对应峰, 结果表明阴性样品溶液在此条件下对黄芩苷测定无干扰。

图1 专属性试验结果

2.4 线性及范围考察 取黄芩苷对照品适量, 加甲醇溶解并稀释, 制成每1 ml约含0.6 mg的对照品溶液, 移取对照品溶液3 ml, 置于25 ml量瓶中, 加甲醇稀释定容得对照品线性储备液。吸取线性储备液0.25、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 ml,分别置于10 ml量瓶中, 加甲醇稀释定容, 得1～6号线性溶液。取线性溶液, 按照上述色谱条件进样测定, 记录峰面积, 绘制标准曲线, 得到回归方程为Y=37346X-5806.2, r=0.9999, 结果表明, 黄芩苷在1.81～36.27 μg/ml范围内线性关系良好。

2.5 仪器精密度试验 在该色谱条件下, 精密吸取21.76 μg/ml黄芩苷对照品溶液10 μl注入HPLC, 连续进样6次, 记录峰面积。结果黄芩苷峰面积RSD为0.23%, 说明仪器精密度良好。

2.6 稳定性试验 取室温条件下的同一供试品溶液, 分别于0、3、6、9、12、18、24 h进样测定黄芩苷峰面积, 结果测得黄芩苷峰面积RSD为0.44%, 结果表明, 在室温条件下,供试品溶液中黄芩苷在24 h内稳定。

2.7 重复性试验 取样品粉末6份, 依法测定供试品中黄芩苷含量。结果样品中黄芩苷平均质量分数为2.01%, RSD为1.50%, 表明本分析方法重复性良好。

2.8 加样回收率试验

取已知含量的天龙茶粉末6份, 每份约75 mg, 分别加入黄芩苷对照品溶液(713.43 μg/ml)2 ml, 加入70%乙醇23 ml,按照供试品溶液制备方法操作, 依法进样测定, 结果见表1。

表1 黄芩苷回收率试验结果

2.9 含量测定 取本品粉末, 分别吸取供试品溶液、对照品溶液各10 μl, 按上述色谱条件测定, 计算含量, 结果见表2。

表2 样品测定结果

3 讨论

本研究通过紫外全波长扫描黄芩苷对照品甲醇溶液, 其在277 nm和316 nm有最大吸收, 参考《中国药典》2010版一部黄芩药材项的含量测定, 确定检测波长定为277 nm。黄芩苷为多羟基黄酮类化合物, 当以甲醇-水或乙腈-水为流动相时, 普通ODS柱对其吸附性差、选择性较小, 无法达到有效分离。参考文献及2010版《中国药典》一部, 在流动相中添加磷酸, 可有效提高色谱柱分离效果, 最终确定甲醇-0.2%磷酸(40:60)为流动相。

本研究采用HPLC法测定天龙茶中黄芩苷含量, 方法学验证表明, 其精密度、线性、稳定性、重复性、回收率、耐用性等均能满足定量分析要求, 可用于天龙咳喘灵胶囊的质量控制。

［1］ 国家药典委员会, 中华人民共和国药典(一部).中国医药科技出版, 2010:282.

［2］ 郝晶晶, 甄会贤, 赵正保.鼻炎灵片中黄芩苷含量测定方法的研究.山西中医学院学报, 2013, 14(1):28-30.