遵义市规模养猪场大肠杆菌的耐药性检测

冉江华等

摘要 [目的] 掌握遵义市规模养猪场大肠杆菌的耐药情况， 为贵州省动物源性细菌监测提供数据。[方法]采集遵义市规模养猪场猪肛门拭子和总排污池新鲜粪便（或污水棉拭子）样品335份， 分离出阳性大肠杆菌。采用微量肉汤稀释法对分离的大肠杆菌进行耐药性检测。[结果] 分离并鉴定到334株阳性大肠杆菌，分离的大肠杆菌对7种抗菌药物的耐药率依次为：磺胺间甲氧嘧啶钠>土霉素>恩诺沙星>头孢噻呋>氟苯尼考>环丙沙星>庆大霉素，多重耐药性主要集中在4耐、5耐、6耐和7耐。[结论] 遵义市规模养猪场大肠杆菌的耐药性严重及多重耐药性正在恶化，且猪场总排污池大肠杆菌对各药物的耐药性皆高于猪肛门拭子。

关键词大肠杆菌；耐药性；微量肉汤稀释法；MIC

中图分类号S852.65+1文献标识码

A文章编号0517-6611（2014）06-01714-02

Abstract [Objective]The research aimed to master the drug sensitivity of Escherichia coli in largescale farms in Zhunyi City and provide data for monitoring animalderived bacteria in Guizhou Province. [Method] 335 samples of pig anal swab and fresh manure from total sewage pool were collected largescale pig farms in Zhunyi City to isolate positive E. coli. The drug sensitivity of the isolated E. coli was detected by using broth microdilution method. [Result] 334 strains of positive E.coli were identified. The drug sensitivity rates of the isolated E.coli to 7 kinds of antibacterial drugs were as follows： sulfamonomethoxine Sodium>terramycin>enrofloxacin>ceftiofur>florfenicol>ciprofloxacin>gentamicin. Multiple drug resistance was mainly concentrated in 4、5、6 and 7 resistant. [Conclusion] The drug sensitivity of E.coli was serious in largescale pig farms in Zhunyi City and the multiple drug sensitivity was worse. The drug sensitivity of E.coli from total sewage pool was higher than that of swine anal swab.

Key words Escherichia coli； Drug resistance； Broth microdilution method； MIC

隨着抗菌药物在畜禽养殖业中的广泛使用，其不合理使用导致细菌耐药水平不断地升高，出现许多高度耐药和多重耐药的菌株甚至发展为“超级细菌”[1]，严重降低动物抗感染治疗的效果，提高养殖成本。大肠杆菌是人类及动物肠道行在的正常寄殖菌群[2] ，作为条件性致病菌，在环境中也广泛存在，其具有接受、储备和传播耐药遗传因子的能力，是潜在的耐药基因储存库或中介站[3] 。因此，大肠杆菌已成为地区区域耐药性水平和研究的标示菌。

近年来，遵义市养猪业已从传统的自繁自养模式升级为规模化、标准化养殖模式，养殖数量不断增加，细菌性疾病的发生也变得复杂化，导致抗菌药物的使用及使用效果变得盲目和低效甚至无效。为此，笔者对遵义市5个地区（县）25个规模养猪场分离的334株大肠杆菌进行了生化鉴定和药敏试验，旨在掌握遵义市规模养猪场大肠杆菌的耐药现状，为遵义市规模化养猪场合理、科学、有效用药提供参考，为贵州省动物源性细菌监测提供数据。

1材料与方法

1.1材料

1.1.1器材。电子天平、高压灭菌锅、紫外分光光度计、超净工作台、恒温培养箱、96孔培养板等。

1.1.2试剂。CarryBlair运输培养基、LB肉汤、伊红美蓝琼脂培养基、营养琼脂、米勒-海顿肉汤（MHB）和肠杆菌科生化编码鉴定管等。

1.1.3药物。磺胺间甲氧嘧啶钠、土霉素、恩若沙星、头孢噻呋、氟苯尼考、环丙沙星、庆大霉素。

1.1.4质控菌株。大肠埃希氏菌质控菌株ATCC25922，购自中国菌种资源保藏中心。

1.2方法

1.2.1样品的采集。按照“五点分布”原则并兼顾遵义地区的养殖特点，选取遵义市桐梓县、汇川区、红花岗区、遵义县、绥阳县5个县区的25个规模化养猪场，采集猪肛门拭子及总排污池处的新鲜粪便或污水共335份样品。

1.2.2大肠杆菌的分离与鉴定。

按照GB/T 4789.62003食品卫生微生物学检验—致泻大肠埃希氏菌检验进行分离与鉴定。

1.2.3最低抑菌浓度（MIC）测定。按照美国临床实验室标准化委员会（CLSI）2009 版推荐的微量肉汤稀释法测定各菌株对磺胺间甲氧嘧啶钠、庆大霉素、环丙沙星、恩诺沙星、土霉素、头孢噻呋、氟苯尼考的最低抑菌浓度（MIC）。按照美国临床实验室标准化委员会（CLSI）2009 版推荐的判定标准及中国兽医药品监察所标准（表1）进行耐药性分析。

为此，各地区规模养猪场应根据该地区实际情况按照相关标准合理规范用药，且相关职能部门应加强对养殖场用药的宣传、培训和监督工作，定期对管辖区域的养殖场耐药情况进行监测和分析，保障人畜健康，推动生态畜牧业持续健康发展。

（3）该试验中73株猪场总排污池的大肠杆菌对各药物耐药性皆高于261株猪肛门拭子大肠杆菌对各药物耐药性和猪场总体耐药性水平，除对环丙沙星的耐药性高出9%以外，对其他药物的耐药性均在3.5%以内。今后可利用猪场总排污池新鲜粪便（或污水棉拭子）中的大肠杆菌通过药敏试验来评估猪场总体耐药性水平，以避免在进行耐药性监测工作时对猪的应激反应和各养猪场疫病的交叉感染。外界环境中大肠杆菌耐药性比猪体内大肠杆菌耐药性微高的原因，是因为外界环境更适应于细菌间耐药性的转移。

参考文献

[1]

KAIKAINEN V，IKAHEIMO R，KATILA M L.Fimbriation of Escherichia coli stains from patients with urosepsis demonstrated by a commercialag glulinations test[J].Clinical Microbiology，1991，29：221.

[2] WHITE P A，MCLVER C J，RAWLINSON W D.Integrons and gene cassettes in the enterobacteriaceae[J].Antimicrob Agents Chenmother，2001，45（9）：2658-2661.

[3] STUART B LEVY.The challenge of antibiotic resistance [J].Scientific American，1998，278：46-53.

[4] 王冠玉，譚艾娟，吕世明，等.贵州鸡源大肠杆菌的分离鉴定及耐药性测定[J].天津农业科学，2013（2）：26-38.

[5] 夏利宁，赵红琼，苏艳，等.新疆某猪场分离的大肠杆菌对抗生素耐药性调查[J].新疆农业科学，2013（12）：2299-2303.

[6] 王红宁.猪、禽安全生产中主要病原菌耐药性检测及控制技术研究进展[J].四川畜牧兽医，2003（S1）：59-60.

[7] SABERFAR E，POURAKBARI B，CHABOKDAVAN K，et al.Antimi-crobial susceptibility of Escherichia coli isolated from iranian broiler chicken flocks，2005-2006[J].Appl Poult Res，2008，17：302-304.

[8] 覃开权.湖南省规模化猪场猪源大肠杆菌的耐药性调查[J].中国动物检疫，2011（3）：59-62.

[9] 马全朝，顾欣，程增青，等.上海市猪源大肠杆菌耐药性监测[J].中国动物检疫，2009（4）：54-56.

[10] 林居纯，卓家珍，蒋红霞，等.不同地区猪源和禽源大肠杆菌耐药性监测[J].华南农业大学学报，2009（1）：86-88，93.

[11] 杜向党，焦显芹，陈玉霞，等.河南地区鸡猪源大肠杆菌的耐药性监测[J].江西农业大学学报，2008（6）：956-959.

[12] 魏雅静，林居纯，毕师诚，等.四川省不同地区猪源大肠杆菌耐药性调查[J].安徽农业科学，2011（1）：273-274，276.