乳腺癌易感基因相互作用蛋白1基因功能区单核苷酸多态性与宫颈癌的相关性研究

周史思 陈丽平 周海仙 浙江省温州市中西医结合医院 温州 325000

乳腺癌易感基因相互作用蛋白1基因功能区单核苷酸多态性与宫颈癌的相关性研究

周史思 陈丽平 周海仙 浙江省温州市中西医结合医院 温州 325000

目的 探讨乳腺癌易感基因相互作用蛋白1基因（BRIP1）功能区5个单核苷酸多态性（SNP）位点与宫颈癌的相关性。方法 严格按照诊断标准，采集无亲缘关系宫颈癌患者309例（病例组）及健康体检者（对照组）315名静脉血，提取基因组DNA，采用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱技术检测5个SNP的基因型，采用SPSS11.5及Haploview4.2软件分析各基因型、等位基因及单倍型频率在两组中的差异。结果 宫颈癌组与正常对照组的BRIP1基因rs4986764（外显子18）及rs7213430（3'非翻译区）位点基因型及等位基因频率分布差异有统计学意义（P＜0.05）。宫颈癌组rs4986764位点C等位基因频率显著高于对照组（P=0.036，OR=1.294，95%=1.017～1.647）；宫颈癌组rs7213430位点A等位基因频率显著高于对照组（P=0.003，OR=1.435，95%CI=1.133～1.818）。连锁不平衡分析发现一个单倍型（rs11079454-rs7213430-rs4986763）高度连锁（D'＞0.9），宫颈癌组T-A-C单倍型频率显著高于对照组（P=0.018）。结论 BRIP1基因功能区rs4986764及rs7213430 SNP位点可能与宫颈癌有关，携带有rs4986764 C等位基因及rs7213430 A等位的个体可能更容易患宫颈癌。

宫颈癌；乳腺癌易感基因相互作用蛋白1基因；单核苷酸多态性

宫颈癌是全球妇女中最常见的恶性肿瘤之一，仅次于乳腺癌而居于第二位，在发展中国家尤为常见，位居各种恶性肿瘤之首[1]。宫颈癌受遗传与环境因素共同作用。家系、双生子及寄养子研究表明宫颈癌的遗传度为30%～50%[2]。最近研究发现宫颈癌与乳腺癌易感基因相互作用蛋白1（BRCA1-interacting protein 1，BRIP1）基因关系密切[3-4]。为了系统研究BRIP1基因与中国汉族群体宫颈癌的相关性，笔者收集了309名宫颈癌患者及315名健康对照样本，对BRIP1基因功能区5个单核苷酸多态性（single nucleotide polymorphism，SNP）位点进行系统研究。现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 2010年3月—2013年12月于我院收集宫颈癌患者309例，均为汉族，年龄35～61岁，平均（42.16±5.38）岁。符合宫颈癌诊断标准：所有患者均经活检或切除组织病理检查确诊为宫颈癌。同期从我院体检中心收集无亲缘关系的健康女性体检者315名作为对照组，均为汉族，年龄32～62岁，平均（43.57±4.74）岁。两组均有正常生育史，排除习惯性流产、其他躯体疾病、遗传病及可能影响血液系统疾病者。所有参与者签署知情同意书，并经我院伦理委员会批准。

1.2 方 法 EDTA抗凝真空采血管收集外周静脉血3～5mL，采用TIANamp Blood DNA Kit全血基因组DNA提取试剂盒（天根，中国北京）提取基因组DNA，-20℃储存备用。SNP分型是由上海邃志生物科技有限公司利用美国Sequenom公司的MassARRAY系统完成，该系统是基于基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱技术（MALDI-TOF）。PCR反应条件：94°C 15min；94°C 20s，56°C30秒，72°C 1min，共45个循环；最终72°C 3min。PCR扩增后，剩余的dNTP将被去磷酸消化掉，反应体系包括 1.53μL水、0.17μLSAP缓冲液、0.3单位碱性磷酸酶（Sequenom）。37°C 40min，后85°C 5min使酶失活。单碱基延伸反应在下列条件下进行：94°C 30s；94°C 5s，52°C 5s，80°C 5s 5个循环，共40个循环；最后72°C延伸 3min。使用 MassARRAY Nanodispenser（Sequenom）将最终的分型产物点样到一块384孔的spectroCHIP（Sequenom）上，并用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱进行分析。

1.3 统计学方法 应用GENEPOP v4.0行两组基因型哈迪温伯格（Hard-Weinberg）平衡检验。SPSS13.0软件计算两组等位基因频率和基因型频率；确切概率法（fisher exact test，FET）或Pearson's卡方检验两组间等位基因频率和基因型频率分布差异。block根据D'＞0.9以及r2＞0.8进行定义。单倍型构建应用Haploview 4.0软件进行构建。频率＜5%单倍型被排除不再进行统计学检验。Pearson's卡方检验两组间单倍型频率及群体间差异分布。

2 结果

BRIP1基因5个多态性位点的基因型及等位基因频率分布均符合Hard-Weinberg平衡定律。连锁不平衡分析发现一个单倍型（rs11079454-rs7213430 -rs4986763）高度连锁（D'＞0.9），见图1。两组基因型及等位基因频率分布及统计学结果见表1。两组单倍型频率分布及统计学结果见表2。

两组 BRIP1基因 rs4986764（外显子 18）及rs7213430（3'非翻译区）位点基因型及等位基因频率分布差异有统计学意义（P＜0.05）。病例组rs4986764位点C等位基因频率显著高于对照组（P=0.036，OR=1.294，95%CI=1.017～1.647）；病例组rs7213430位点A等位基因频率显著高于对照组（P=0.003，OR=1.435，95%CI=1.133～1.818）。

表1 BRIP1基因功能区5个SNPs位点基因型及等位基因频率分布 例（%）

连锁不平衡分析发现有rs11079454-rs7213430-rs4986763构建的T-A-C单倍型频率显著高于正常对照组（P=0.018）。病例组中未发现T-G-T单倍型。

表2 BRIP1基因功能区5个SNPs位点单倍型频率分布

图1 BRIP1基因5个SNP位点连锁不平衡结果

3 讨论

BRIP1为一种DNA解旋酶，与乳腺癌易感基因1（breast cancer 1，BRCA1）相互作用，从而调节DNA修复和基因组稳定性[5]。BRIP1基因位于染色体17q22，编码1249个氨基酸。含19个外显子及18个内含子，基因长度为184-kb[6]。研究表明，BRIP1基因SNP与多种癌症的发病相关[3-4，7]。然而，BRIP1基因对宫颈癌易感性的研究鲜有报道。

尽管本结果确切的分子机制尚不清楚，可能的解释为BRIP1基因多态性可能会导致子宫颈BRIP1基因表达发生改变。我们推测基因变异可能在数量、性状和疾病易感性两个方面造成个体差异[8]。先前报道Arg173Cys（rs4988345）位点影响了BRIP1蛋白从细胞质向细胞核转移及胞核定位，并且有可能改变乳腺癌的易感性，表明BRIP1遗传变异可能造成的BRIP1基因潜在功能性变化[9-10]。本研究中，编码区rs4986764（外显子18中）也许会改变BRIP1的基因表达，导致宫颈癌的遗传易感性增强。rs4986764及rs7213430功能性SNPs可能的具体作用尚待进一步探究。BRIP1基因的遗传变异与多种癌症的发病有关。根据报道[11-13]，rs4986764位点C等位基因与乳腺癌的风险增加相关。本研究发现 3’UTR中的rs7213430与宫颈癌的遗传易感性相关，而与乳腺癌的遗传易感性不相关[14]。越来越多的证据表明，3’UTR中的SNPs可能会改变与3’UTR结合的miRNA，从而对mRNA的表达进行调控[15]。BRIP1基因的3’UTR中的SNPs可能会影响mRNA的稳定性，并调控mRNA的表达[16]，从而影响宫颈癌的遗传易感性。宫颈癌与乳腺癌的遗传易感性中rs7213430的不一致性亟待更深入的研究。本研究表明，BRIP1基因功能区rs4986764及rs7213430 SNP位点可能与宫颈癌有关，携带有 rs4986764 C等位基因及rs7213430 A等位的个体可能更容易患宫颈癌。

我们进一步深入研究了功能区这5个多态性之间的相互关系。连锁不平衡分析发现有rs11079454-rs7213430-rs4986763构建的单倍型存在强连锁不平衡。单倍型分析显示，宫颈癌病例组T-A-C单倍型频率显著高于正常对照组，进一步支持了先前报道的宫颈癌患者T-A-C-A单倍型频率显著增加[4]这一结果。这些结果表明，携带BRIP1基因的T-A-C单倍型的患者更容易罹患宫颈癌。

遗传学研究有助于更好地理解宫颈癌的潜在发病机制。本研究表明BRIP1基因SNPs及其相关的单倍型在宫颈癌的遗传易感性中可能发挥潜在作用。但这些SNPs如何影响BRIP1/FANCJ的功能尚待进一步的探讨研究。

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修回日期：2014-06-16

Association of the Single Nucleotide Polymorphism in Functional Region of BRCA1-interacting Protein 1(BRIP1)with Cervical Cancer

ZHOU Shisi,CHEN Liping,ZHOU Haixian. Integrative Medicine Hospital of Wenzhou,Wenzhou(325000),China

Objective To investigate the association between 5 single nucleotide polymorphisms（SNP）of the BRCA1-interacting protein 1（BRIP1）and the risk of cervical cancer.Methods The participants enrolled in this study included 309 patients with cervical cancer and 315 healthy women as healthy controls.Blood samples were drawn from theseparticipants tocollect BRIP1 gene DNA;then 5 SNPs（rs2048718,rs4986764,rs4986763, rs11079454,rs7213430）of the BRIP1 gene was analyzed by using the MassARRAY system and compared by SPSS11.5 and Haploview 4.2 software.Results The genotype and allele frequency of rs4986764（exon 18）and rs7213430（3'UTR）were significantly different between patients with cervical cancer and healthy controls（P＜0.05）. Compared with healthy controls,patients with cervical cancer had higher frequency of rs4986764 C allele（P=0.036, OR=1.294,95%CI:1.017-1.647）and rs7213430 A allele（P=0.003,OR=1.435,95%CI:1.133-1.818）.Strong linkage disequilibrium was observed in one block（D'＞0.9）,and more T-A-C haplotypes（block 1）were found in patients with cervicalcancer（P=0.018）.Conclusion ThesefindingsindicatesthattheBRIP1 genepolymorphisms（rs4986764 and rs7213430）may be related to cervical cancer.The rs4986764 C allele and rs7213430 A allele may be the risk factor for cervical cancer.

cervical cancer；BRCA1-interacting protein 1；single nucleotide polymorphisms

2014-03-30