芩术四物汤中单体化合物的镇痛抗炎作用Δ

黄道秋，李风，秦旭华，彭腾，李柏群，郑祥本，杨红兵（.重庆三峡中心医院，重庆 404000；.成都中医药大学药学院，成都 6007）

痛经发病率高，给妇女的身心健康和工作、学习带来了严重的影响。现代医学常采用非甾体抗炎药治疗痛经[1-3]，但非甾体抗炎药物只是对症止痛，不能从根本上解决问题。祖国医学在治疗本病方面积累了丰富的经验。芩术四物汤是古方芩术丸和四物汤裁减方，由黄芩、白术、当归、川芎、白芍等构成。其药味精简，药物配伍平和而巧妙，养血活血，行气利水，寓意深刻，凡证见血虚、血瘀、湿阻、肝郁、脾虚等虚实夹杂者，均可用之。该方在重庆三峡中心医院应用，总有效率在85%以上。该方的乙酸乙酯萃取部位通过鉴定得到14个化合物，其中大部分化合物来源于黄芩[4]。有研究表明，该方中当归、白芍两药对子宫平滑肌的收缩频率及平均肌张力有抑制作用，且两药合用其作用增强[5]。开展该方有效成分的实验研究，不仅有可能揭示临床验方芩术四物汤治疗痛经的现代机制，并通过现代的分离和提取技术，有可能从传统验方中寻找并开发出新型安全治疗痛经的有效药物，从而为进一步开发应用芩术四物汤奠定理论基础。

1 材料

1.1 仪器

小鼠自主活动记录仪（成都泰盟科技有限公司）；DSY-1-2孔型电热恒温水浴锅（北京国华医疗器械厂）；FA2004N型电子天平（上海民怡仪器有限公司）。

1.2 药品与试剂

没食子酸、黄芩苷由成都中医药大学中药化学教研室彭腾副教授提供（纯度＞98%），实验前用蒸馏水（含0.5%吐温80，助溶）配成所需浓度的混悬液备用；曲马多（批号:012100901）、布洛芬软胶囊（批号:168120701）购自石药集团恩必普药业有限公司；艾司唑仑片（常州四药制药有限公司，批号:20080227）；0.6%冰醋酸（分析纯，重庆茂业化学试剂有限公司，批号:20120320）；甲醛溶液（成都市科龙化工试剂厂，批号:20120320）。

1.3 动物

清洁级KM小鼠，♀，体质量18～22 g，由成都中医药大学动物实验中心提供[实验动物使用许可证号:SCXK（川）2008-11]。

2 方法

2.1 芩术四物汤中单体化合物的镇痛作用研究

2.1.1 芩术四物汤中单体化合物对热板所致小鼠疼痛反应的影响 将小鼠放入温度（55±0.5℃）已控制好的热板上，立即触摸“计时”按钮开始计时，并盖上有机玻璃罩避免小鼠跃出，仔细观察，待小鼠舔后足时马上再次触摸“计时”按钮而锁定时间，该时间为小鼠的痛阈值（凡是在5 s内出现舔后足及超过60 s不舔后足，或逃避跳跃的小鼠弃置不用）。80只KM小鼠随机均分为8组，即模型（等容蒸馏水，含0.5%吐温80）组，曲马多（40mg/kg）组，没食子酸高、中、低剂量（68.6、34.3、17.2mg/kg）组，黄芩苷高、中、低剂量（120、60、30mg/kg）组，ig给药。分别测定ig给药前，给药后5、30、60、90、120min时小鼠的痛阈值。若小鼠放入热板仪中60 s仍无反应，应将小鼠取出，痛阈值按60 s计。

2.1.2 芩术四物汤中单体化合物对醋酸所致小鼠疼痛反应的影响 80只KM小鼠随机均分为8组，即模型（等容蒸馏水，含0.5%吐温80）组，布洛芬（40mg/kg）组，没食子酸高、中、低剂量（68.6、34.3、17.2mg/kg）组，黄芩苷高、中、低剂量（120、60、30mg/kg）组。于末次给药30min后，每只小鼠ip 0.5%冰醋酸0.2ml/20 g，立即将小鼠单只放入小鼠笼内，观察15min内各鼠出现扭体反应的潜伏期（ip醋酸后至第1次扭体反应出现的时间）和扭体次数。

2.1.3 芩术四物汤中单体化合物对甲醛所致小鼠疼痛反应的影响 分组与给药同“2.1.1”项下方法。于末次给药30min后，每只小鼠左侧足趾处注射1%甲醛25µl/只，立即观察小鼠0～5min、15～30min内的舔足次数。

2.2 芩术四物汤中单体化合物的抗炎作用研究

2.2.1 芩术四物汤中单体化合物对二甲苯所致炎症模型小鼠的影响 80只KM小鼠随机均分为8组，即模型（等容蒸馏水，含0.5%吐温80）组，地塞米松（2.0mg/kg）组，没食子酸高、中、低剂量（68.6、34.3、17.2mg/kg）组，黄芩苷高、中、低剂量（120、60、30mg/kg）组。ig给药30min后将30µl二甲苯均匀涂抹于每只小鼠的右耳两面。致炎60min后，小鼠脱颈处死，分别剪下左右耳片，打孔器取相同部位打孔，电子天平称质量。耳肿胀度的计算公式:肿胀度（mg）＝肿胀耳片质量－未肿胀耳片质量；肿胀抑制率计算公式:肿胀抑制率＝（模型组平均肿胀度－用药组平均肿胀度）/模型组平均肿胀度×100%。

2.2.2 芩术四物汤中单体化合物对模型小鼠棉球肉芽肿的影响 分组与给药同“2.2.1”项下方法。小鼠于右腹部消毒后剪开1 cm长小口，以血管钳扩松皮下组织，用镊子将质量为10mg的灭菌干棉球植入腋部皮下，切口涂红霉素软膏，术后2 d每天注射硫酸庆大霉素0.05ml/只，以防感染。由手术当天起ig给药，每天1次，连续7 d。末次给药24h后处死小鼠，打开原切口，将棉球连同周围结缔组织一起取出，剔除脂肪组织，放烘箱60℃6h烘干后称质量，减去原棉球质量即为肉芽肿干质量。

2.3 统计学方法

3 结果

3.1 芩术四物汤中单体化合物对热板刺激致小鼠疼痛反应的影响

与模型组比较，没食子酸高、中、低剂量组与黄芩苷高、中、低剂量组ig给药5、30、60、90、120min后痛阈值无明显改变（P＞0.05）。芩术四物汤中单体化合物对热板刺激致小鼠疼痛反应的影响见表1。

表1 芩术四物汤中单体化合物对热板刺激致小鼠疼痛反应的影响（，n＝10）Tab 1 Effects of monomeric compound in Qinshu siwu decoction on pain response of mice induced by hot plate（，n＝10）

表1 芩术四物汤中单体化合物对热板刺激致小鼠疼痛反应的影响（，n＝10）Tab 1 Effects of monomeric compound in Qinshu siwu decoction on pain response of mice induced by hot plate（，n＝10）

与模型组比较:＊P＜0.01vs.model group:＊P＜0.01

组别模型组曲马多组没食子酸高剂量组没食子酸中剂量组没食子酸低剂量组黄芩苷高剂量组黄芩苷中剂量组黄芩苷低剂量组剂量，mg/kg给药后痛阈值，s 4068.634.317.21206030给药前痛阈值，s 14.50±4.7815.78±3.9512.55±3.0113.46±3.9513.08±4.5514.20±3.3013.20±3.4014.50±3.305min 10.79±3.4731.46±9.96＊12.42±3.4714.68±6.4213.07±4.1718.50±8.6019.10±11.5021.20±12.5030min 10.61±3.6339.06±11.23＊12.33±3.5612.58±4.5910.63±2.0625.90±12.5014.40±12.3019.80±11.6060min 12.93±4.7912.61±4.0510.72±3.5110.95±3.3311.35±2.5514.30±8.3010.60±60.4023.00±13.2090min 14.53±5.4511.78±2.8111.88±3.0810.08±2.6912.23±2.3413.80±5.908.40±4.4010.10±5.20120min 15.76±7.4412.39±3.8012.01±3.4814.10±3.1016.81±8.5118.90±14.609.80±4.9017.80±16.30

3.2 芩术四物汤中单体化合物对醋酸致小鼠疼痛反应的影响

与模型组比较，黄芩苷高剂量组小鼠扭体反应潜伏期延长，差异有统计学意义（P＜0.01）；没食子酸高、中剂量组与黄芩苷高、中剂量组小鼠扭体次数减少，差异有统计学意义（P＜0.01或P＜0.05）。芩术四物汤中单体化合物对醋酸致小鼠疼痛反应的影响见表2。

3.3 芩术四物汤中单体化合物对甲醛致小鼠疼痛反应的影响

与模型组比较，给药0～5min时，没食子酸高剂量组小鼠舔后足次数减少，差异有统计学意义（P＜0.05）；给药15～30min时，没食子酸高、中、低剂量组与黄芩苷高剂量组小鼠舔后足次数减少，差异有统计学意义（P＜0.01或P＜0.05）。芩术四物汤中单体化合物对甲醛致小鼠疼痛反应的影响见表3。

3.4 芩术四物汤中单体化合物对二甲苯致小鼠耳肿胀和模型小鼠棉球肉芽肿的影响

与模型组比较，没食子酸高、中、低剂量组与黄芩苷高、中、低剂量组小鼠耳肿胀度减少，差异有统计学意义（P＜0.05）；没食子酸高剂量组与黄芩苷高、中剂量组小鼠棉球肉芽肿干质量减轻，差异有统计学意义（P＜0.05）。芩术四物汤中单体化合物对二甲苯致小鼠耳肿胀和模型小鼠棉球肉芽肿的影响见表4。

表2 芩术四物汤中单体化合物对醋酸致小鼠疼痛反应的影响（，n＝10）Tab 2 Effects of monomeric compound in Qinshu siwu decoction on pain response of mice induced by acetic acid（，n＝10）

表2 芩术四物汤中单体化合物对醋酸致小鼠疼痛反应的影响（，n＝10）Tab 2 Effects of monomeric compound in Qinshu siwu decoction on pain response of mice induced by acetic acid（，n＝10）

与模型组比较:＊P＜0.05，＊＊P＜0.01vs.model group:＊P＜0.05，＊＊P＜0.01

组别模型组布洛芬组没食子酸高剂量组没食子酸中剂量组没食子酸低剂量组黄芩苷高剂量组黄芩苷中剂量组黄芩苷低剂量组扭体次数30.5±12.212.4±8.9＊＊18.9±10.2＊20.4±9.5＊31.0±10.614.8±11.2＊＊16.3±7.7＊＊22.7±6.9剂量，mg/kg 4068.634.317.21206030扭体反应潜伏期，s 8.8±5.316.9±4.6＊＊11.3±7.59.8±4.27.9±4.417.1±7.2＊＊11.4±3.19.1±3.5

表3 芩术四物汤中单体化合物对甲醛致小鼠疼痛反应的影响（，n＝10）Tab 3 Effects of monomeric compound in Qinshu siwu decoction on pain response of mice induced by formaldehyde（，n＝10）

表3 芩术四物汤中单体化合物对甲醛致小鼠疼痛反应的影响（，n＝10）Tab 3 Effects of monomeric compound in Qinshu siwu decoction on pain response of mice induced by formaldehyde（，n＝10）

与模型组比较:＊P＜0.05，＊＊P＜0.01vs.model group:＊P＜0.05，＊＊P＜0.01

组别模型组曲马多组没食子酸高剂量组没食子酸中剂量组没食子酸低剂量组黄芩苷高剂量组黄芩苷中剂量组黄芩苷低剂量组舔后足次数（15～30min），次205.8±128.7128.2±59.5＊49.7±26.1＊＊113.1±85.1＊96.1±48.2＊＊102.7±77.2＊150.3±56.1164.9±64.6剂量，mg/kg 4068.634.317.21206030舔后足次数（0～5min），次69.9±21.537.1±17.3＊46.5±17.9＊63.8±28.058.8±27.764.2±24.457.1±8.263.3±42.5

表4 芩术四物汤中单体化合物对二甲苯致小鼠耳肿胀和模型小鼠棉球肉芽肿的影响（，n＝10）Tab 4 Effects of monomeric compound in Qinshu siwu decoction on ear edema induced by dimethyl-benzen and tampon granuloma（，n＝10）

表4 芩术四物汤中单体化合物对二甲苯致小鼠耳肿胀和模型小鼠棉球肉芽肿的影响（，n＝10）Tab 4 Effects of monomeric compound in Qinshu siwu decoction on ear edema induced by dimethyl-benzen and tampon granuloma（，n＝10）

与模型组比较:＊P＜0.05，＊＊P＜0.01vs.model group:＊P＜0.05，＊＊P＜0.01

组别模型组地塞米松组没食子酸高剂量组没食子酸中剂量组没食子酸低剂量组黄芩苷高剂量组黄芩苷中剂量组黄芩苷低剂量组棉球肉芽肿干质量，mg 18.5±3.579.6±2.55＊＊13.2±5.81＊14.5±5.0816.4±6.5511.8±5.01＊12.8±3.05＊15.8±4.37剂量，mg/kg 耳肿胀抑制率，%2.068.634.317.21206030耳肿胀度，mg 5.1±1.93.5±1.8＊2.4±1.3＊3.8±1.6＊3.2±1.3＊2.7±2.3＊2.5±2.3＊3.2±1.7＊31.3753.3132.2937.9447.0650.9837.25

4 讨论

现代药理研究表明，没食子酸是白芍的活性成分，有止痛、抗炎、抗氧化、护心和抗血管生成等作用[6-11]。黄芩苷是黄芩中的有效成分之一，具有降压、镇静、保肝、消炎、抗肿瘤等多种药理作用[12]。本研究表明，芩术四物汤的单体化合物没食子酸、黄芩苷对醋酸及甲醛所致小鼠疼痛反应具有明显抑制作用（P＜0.01或P＜0.05）；能明显减轻二甲苯所致小鼠耳肿胀和减轻小鼠棉球肉芽肿干质量（P＜0.05）；且没食子酸作用较黄芩苷明显。这可能与临床验方芩术四物汤治疗痛经的作用机制密切相关，值得进一步研究。

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