朱红栓菌中两个吩噁嗪酮类生物碱的分离与鉴定

朱 峰，卢卫红，陈 忻，吴静姝

1佛山科学技术学院化学与化工系，佛山528000;2佛山科学技术学院动物医学系，佛山528231

朱红栓菌 Trametes cinnabarina(Jacq．)Franeh是一种野生高等真菌，在分类上属于多孔菌科(Polyporaceae)，生于栎、桦、锻、榉等阔叶树的腐木上，偶尔生于松木上。分布于华北、西北及黑龙江、吉林、江苏、安徽、浙江、江西、河南、湖南、广东、广西等省区。在香菇、木耳栽培的段木上，常出现此菌，属食菌段木上常见的“杂菌”。它具有多种药用价值，具有祛风除湿，清热解毒，行气，止血，止痒等功效。其提取物对小白鼠肉瘤S180和艾氏腹水瘤的抑制率达90%，能明显增加小鼠免疫器官胸腺和脾脏的重量，提高巨噬细胞的吞噬活力，促进T细胞体外增殖及接触性皮炎反应，提高小鼠血清凝集素滴度，具有很高的开发利用价值［1，2］。

本文首次对采自广东省上川岛的野生朱红栓菌化学成分进行了研究，发现其甲醇粗提物对大肠杆菌、沙门氏菌、链球菌和金黄葡萄球菌表现出有意义的抗菌活性，从该粗提物分离获得两个吩噁嗪酮类生物碱，通过波谱分析分别鉴定为朱红菌素(1)和朱红栓菌素(2)，结构式见图1。

图1 朱红菌素(1)和朱红栓菌素(2)的结构式ig.1 The structures of cinnabarin(1)and tramesanguin(2)

1 材料与方法

1．1 仪器与材料

1．1．1 仪器

INOVA 500 NB超导核磁共振谱仪(美国Varian公司);ZAB-HS双聚焦磁质谱仪(英国VG公司);X4型显微熔点测定仪(上海荆和分析仪器有限公司)。

1．1．2 材料

野生朱红栓菌(2009年6月3日采自广东省上川岛，根据文献［1，2］鉴定为朱红栓菌 Trametes cinna-barina(Jacq．)Franeh);微晶纤维素薄层色谱板。

1．2 方法

1．2．1 甲醇粗提物的制备

137 g风干野生朱红栓菌子实体粉碎后用1 L甲醇室温浸泡提取3次，每次7 d，提取液合并减压浓缩至一半体积，析出红色沉淀，抽滤，得甲醇粗提物。

1．2．2 甲醇粗提物的抗菌活性

甲醇粗提物用DMSO配成1和5 mg/mL浓度样品液。采用K-B纸片扩散法［3］，将试验微生物菌株用无菌生理盐水配置成为0．5麦氏单位的悬液，接种于M-H琼脂平皿上，分别贴上1和5 mg/mL甲醇粗提物药敏纸片，于35℃孵育24 h，测定抑菌圈大小。

1．2．3 化合物分离纯化

甲醇粗提物用吡啶重结晶，得红色物质(120 mg)。微晶纤维素薄层色谱分析表明，该红色物质由两个主要成分组成。因此取20 mg红色物质用少量混合溶剂(吡啶∶正丁醇∶水 v/v/v 6∶2∶2)溶解，进一步通过制备微晶纤维素薄层色谱分离纯化(展开溶剂系统为吡啶∶正丁醇∶水v/v/v 6∶2∶2)，先后得到两个红色组分，这两个红色组分进一步通过吡啶重结晶，分别得到红色晶体1(5mg)和红色晶体2(9 mg)。

2 结果与讨论

2．1 甲醇粗提物及其抗菌活性

甲醇提取液在浓缩到一半体积时便析出大量红色固体，发现该固体很难再次溶解于甲醇，并且难溶于一般的有机溶剂和水，在吡啶和乙酸中溶解性能有所增加。采用K-B纸片扩散法［3］，以链霉素为参照，测定该甲醇粗提物对大肠杆菌、沙门氏菌、链球菌和金黄葡萄球菌等4种试验微生物的体外抗菌活性，试验结果见表1。

表1 朱红栓菌甲醇粗提物的体外抗菌活性Table 1 Antibacterial activities in vitro of themethanol crude extract of Trametes cinnabarina(Jacq．)Franeh

体外抗菌试验结果表明，甲醇粗提物对4种试验菌株显示出有意义的抑菌活性，其中对大肠杆菌的抑菌活性最强。

2．2 化合物结构鉴定

化合物1 红色晶体(吡啶)，mp．温度大于300℃时逐渐分解。1H NMR(500 MHz，DMSO-d6)δ:9.56(br s，1H，2-NHα)，8．69(br s，1H，2-NHβ)，7.55(m，1H，H-7)，7．53(m，1H，H-8)，7．46(d，J=7．5 Hz，1H，H-6)，6．58(s，1H，H-4)，4．86(s，2H，H-12);13C NMR(125 MHz，DMSO-d6)δ:177．6(s，C-3)，169．0(s，C-11)，152．0(s，C-2)，151．1(s，C-10')，146．1(s，C-4')，142．0(s，C-5')，138．2(s，C-9)，129．2(d，C-7)，126．6(s，C-9')，123．6(d，C-8)，114．5(d，C-6)，105．0(d，C-4)，92．2(s，C-1)，58．7(s，C-12);FABMS:m/z 287 ［M+H］+。NMR谱表明这是一个吩噁嗪酮类生物碱，其波谱数据与文献［4］报道的朱红菌素一致，因此鉴定为朱红菌素，结构式见图1。

化合物2 红色晶体(吡啶)，mp．温度大于250℃逐渐分解;1H NMR(500 MHz，DMSO-d6)δ:10．33(s，1H，H-12)，9．78(br s，1H，2-NHα)，8．90(br s，1H，2-NHβ)，7．98(d，J=7．5 Hz，1H，H-8)，7．85(d，J=7．8 Hz，1H，H-6)，7．72(dd，J=7．5，7．8 Hz，1H，H-7)，6．63(s，1H，H-4);13C NMR(125 MHz，DMSO-d6)δ:191．4(d，C-12)，168．7(s，C-11)，177．8(s，C-3)，152．6(s，C-2)，150．4(s，C-10')，148．6(s，C-4')，142．0(s，C-5')，131．2(d，C-8)，128．9(d，C-7)，128．7(s，C-9')，128．4(s，C-9)，121．6(d，C-6)，105．0(d，C-4)，92．1(s，C-1);FABMS:m/z285［M+H］+。化合物2的NMR谱与化合物1的NMR谱非常相似，也是一个吩噁嗪酮类生物碱，其波谱数据与文献［4］报道的朱红栓菌素一致，因此鉴定为朱红栓菌素，结构式见图1。

2．3 讨论

生物碱广泛存在于药用植物中［5，6］，并且是许多微生物代谢产物的主要成分［7，8］，具有各种各样的生物活性。吩噁嗪酮类生物碱也发现存在于其它多孔菌科高等真菌之中，比如Pycnoporus cinnabari-nus［4］、Trametes cinnabarina var．sanguinea(L．)Pilat［9］、T．cinnabarina Jacq．［10］和 Coriolus sanguineus(Polystictus cinnabarinus)［11］，并且被认为是这些真菌呈现鲜艳的红色的主要原因［4，9-12］。近年来，发现海洋放线菌ACMA006也能产生吩噁嗪酮类生物碱［13］，其中放线菌素 D还具有显著的抗肿瘤活性［14］。因而吩噁嗪酮类生物碱引起了人们的重视。

由于吩噁嗪酮类生物碱难溶于大多数有机溶剂和水溶液，因此人们一直致力于研究这类化合物的有效提取分离方法。早期对这类化合物的结构分析手段主要是运用红外和拉曼光谱、紫外光谱并结合化学合成与修饰方法［9-12，15-19］。近年来才开始逐渐应用NMR手段对这类化合物进行表征，并导致发现了一些新的吩噁嗪酮类生物碱［4，20，21］。

本文从广东省上川岛采集的野生朱红栓菌分离获得2个吩噁嗪酮类生物碱，经NMR谱鉴定为朱红菌素(1)和朱红栓菌素(2)。由于这2个化合物难溶于一般有机溶剂，因而其生物活性还未得到有效研究。对其结构进行修饰以增强其溶解性，从而深入研究其生物活性，开发其潜在的药用价值，这些工作正在进一步研究之中。

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