高效液相色谱梯度洗脱法同时测定沉香理气丸中4种内酯含量

唐英玲

(1.江西省医药学校,南昌 330200;2.江西省医药技师学院,南昌 330200)

高效液相色谱梯度洗脱法同时测定沉香理气丸中4种内酯含量

唐英玲1,2

(1.江西省医药学校,南昌 330200;2.江西省医药技师学院,南昌 330200)

目的 采用高效液相色谱梯度洗脱法测定沉香理气丸中白术内酯Ⅰ、白术内酯Ⅲ、木香烃内酯和去氢木香内酯的含量。方法Hypersil C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5 μm);流动相A为甲醇-乙腈(2∶1),流动相B为水;体积流量:0.7 mL·min-1;检测波长222 nm。结果白术内酯Ⅰ、白术内酯Ⅲ、木香烃内酯和去氢木香内酯分别在0.013 5～0.270 0 μg(r=0.999 2)、0.010 3～0.206 0 μg(r=0.999 4)、0.181 6～3.632 0 μg(r=0.999 9)、0.120 2～2.404 0 μg(r= 0.999 8)范围内进样量与峰面积呈良好的线性关系,平均加样回收率分别为97.98%,96.82%,98.56%,98.57%,RSD (n=6)分别为1.41%,1.37%,1.01%,0.59%。结论该方法简便、准确、灵敏、重复性好,可作为沉香理气丸中白术内酯Ⅰ、白术内酯Ⅲ、木香烃内酯和去氢木香内酯的含量控制方法。

沉香理气丸;白术内酯Ⅰ;白术内酯Ⅲ;木香烃内酯;去氢木香内酯

笔者采用高效液相梯度洗脱法对沉香理气丸中白术内酯Ⅰ、白术内酯Ⅲ和木香烃内酯、去氢木香内酯进行含量测定方法研究,以期为完善该制剂质量标准提供依据。

1 仪器与试药

1.1 仪器 Agilent 1200高效液相色谱仪(G1315B可变波长检测器,安捷伦科技公司)。

1.2 试药 白术内酯Ⅰ对照品(含量:98.0%,批号: 73069-13-3)、白术内酯Ⅲ对照品(含量:98.0%,批号: 73030-71-4)购于上海同田生物技术股份有限公司;木香烃内酯对照品(含量:99.5%,批号:111524-201208,用前置五氧化二磷干燥器中减压干燥12 h)和去氢木香内酯对照品(含量:99.8%,批号:111525-201209,用前置五氧化二磷干燥器中减压干燥12 h)均来源于中国食品药品检定研究院,沉香理气丸(批号:131203, 131206,131209,规格:每瓶装60 g)购于成都九芝堂金鼎药业有限公司;磷酸(广州化学试剂二厂,分析纯,批号:130521),甲醇(天津市康科德科技有限公司,色谱纯,批号:20130714)。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 Hypersil C18色谱柱(4.6 mm× 250 mm,5 μm);体积流量:0.7 mL·min-1;流动相A为甲醇-乙腈(2∶1),流动相B为水,梯度洗脱(0～15 min,75.0%A;～25 min,75.0%→50.0%A;～40 min,50.0%A);检测波长222 nm[1-4];体积流量0.7 mL·min-1。此系统条件下所测4个组分与其他组分分离效果良好,理论板数按白术内酯Ⅰ、白术内酯Ⅲ、木香烃内酯和去氢木香内酯计均不低于3 000,分离度均>2。

2.2 溶液的制备

2.2.1 混合对照品溶液的制备 取白术内酯Ⅰ、白术内酯Ⅲ、木香烃内酯和去氢木香内酯对照品各适量,精密称定,分别加85%甲醇制成混合对照品溶液(白术内酯Ⅰ为0.013 5 mg·mL-1,白术内酯Ⅲ为0.010 3 mg·mL-1,木香烃内酯为0.181 6 mg·mL-1,去氢木香内酯为0.120 2 mg·mL-1)。

2.2.2 供试品溶液的配制 取本品适量,研细,取约4.0 g,精密称定,置具塞锥形瓶,加85%甲醇50 mL,称定质量,超声波(功率300 W,频率50 kHz)超声处理50 min,放冷,再称定质量,用85%甲醇补足减失的质量,摇匀,过滤,取续滤液作为供试品溶液。

2.2.3 阴性对照实验 按沉香理气丸处方比例称取除白术的其余药味和除木香的其余药味各1份,按沉香理气丸的生产工艺分别制成缺白术的阴性样品和缺木香的阴性样品,按照上述供试品溶液的配制方法制成缺白术的阴性对照溶液和缺木香的阴性对照溶液。分别精密吸取供试品溶液、混合对照品溶液、缺白术的阴性对照溶液及缺木香的阴性对照溶液10 μL,按上述方法测定,结果为:在与白术内酯Ⅰ、白术内酯Ⅲ、木香烃内酯和去氢木香内酯对照品色谱图相应的保留时间处,供试品溶液色谱图中有吸收峰,而阴性对照色谱图中未显吸收峰。见图1。

2.3 方法学考察

2.3.1 线性关系考察 精密吸取混合对照品溶液1.0,5.0,10.0,15.0,20.0 μL,注入色谱仪中,按上述色谱条件进行测定,以峰面积(Y)与进样量(X),得回归方程,白术内酯Ⅰ:Y=1.648 3×106X+210.6,r=0.999 2;白术内酯Ⅲ:Y=1.197 6×106X-153.4,r=0.999 4;木香烃内酯:Y= 3.214 8×106X+621.7,r=0.999 9;去氢木香内酯:Y= 2.682 4×106X+394.1,r=0.999 8。白术内酯Ⅰ、白术内酯Ⅲ、木香烃内酯和去氢木香内酯分别在0.013 5～0.270 0 μg、0.010 3～0.206 0 μg、0.181 6～3.632 0 μg、0.120 2～2.404 0 μg范围内进样量与峰面积线性关系良好。

2.3.2 精密度实验 取“2.2.1”项混合对照品溶液,按“2.1”项色谱条件重复进样6次,测定,记录白术内酯Ⅰ、白术内酯Ⅲ、木香烃内酯和去氢木香内酯峰面积,白术内酯Ⅰ、白术内酯Ⅲ、木香烃内酯和去氢木香内酯的RSD分别为0.83%,0.91%,0.29%和0.43%。结果表明,仪器具有良好精密度。

2.3.3 重复性实验 称取同一批样品6份,按“2.2.2”项供试品溶液制备方法制备6份供试品溶液,依法进样测定,计算含量,求得白术内酯Ⅰ、白术内酯Ⅲ、木香烃内酯和去氢木香内酯的RSD分别为0.73%,0.84%,0.33%和0.39%。结果表明,本法测定重复性良好。

2.3.4 稳定性实验 精密吸取同一供试品溶液,在室温下放置0,2,4,8,12,24 h后,每次进样10 μL,测定其峰面积值,求得白术内酯Ⅰ、白术内酯Ⅲ、木香烃内酯和去氢木香内酯的RSD分别为0.95%,0.68%,0.32%和0.47%。结果表明,供试品溶液24 h内基本稳定。

2.3.5 加样回收率实验 精密量取已知含量的同一批沉香理气丸(白术内酯Ⅰ为0.176 mg·g-1,白术内酯Ⅲ为0.132 mg·g-1,木香烃内酯为2.26 mg·g-1,去氢木香内酯为1.52 mg·g-1)适量,研细,取约2.0 g,精密称定,置具塞锥形瓶,分别精密加入混合对照品溶液25 mL、85%甲醇25 mL,按“2.2.2”项供试品溶液的配制方法制备加样供试品试液。按上述实验方法进样测定,计算各组分回收率,结果见表1。

2.4 样品测定 取3批样品,按“2.2.2”项供试品制备方法,按“2.1”项色谱条件测定本品中白术内酯Ⅰ、白术内酯Ⅲ、木香烃内酯和去氢木香内酯含量,结果见表2。

A.对照品;B.样品;C.缺白术阴性对照品;D.缺木香阴性对照品;1.白术内酯Ⅰ;2.白术内酯Ⅲ;3.木香烃内酯;4.去氢木香内酯图1 白术内酯Ⅰ、白术内酯Ⅲ、木香烃内酯和去氢木香内酯的HPLC图

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表1 4种内酯加样回收率实验结果

续表1

表2 3批样品中4种成分含量测定结果 mg·g-1,±s,n=3

表2 3批样品中4种成分含量测定结果 mg·g-1,±s,n=3

批号白术内酯Ⅰ白术内酯Ⅲ木香烃内酯去氢木香内酯1312030.176±0.0020.132±0.0012.26±0.0171.520 0±0.010 0 1312060.189±0.0030.145±0.0012.35±0.0211.590 0±0.015 3 1312090.173±0.0020.135±0.0012.25±0.0021.480 0±0.005 8

3 讨论

3.1 流动相的选择 分别以乙腈-水、甲醇-0.02%磷酸水溶液、甲醇-水、甲醇-乙腈(2∶1)与水为流动相不同比例进行梯度洗脱[5-10],结果以乙腈-水、甲醇-0.02%磷酸水溶液为流动相梯度洗脱时白术内酯Ⅰ和白术内酯Ⅲ分离效果良好,而木香烃内酯和去氢木香内酯未达到基线分离;以甲醇-水为流动相梯度洗脱时木香烃内酯和去氢木香内酯与其他色谱峰能达到基线分离,但白术内酯Ⅰ和白术内酯Ⅲ拖尾现象严重。而甲醇-乙腈(2∶1)与水为流动相按照文中比例梯度洗脱时四组分均能达到基线分离。故选用甲醇-乙腈(2∶1)与水按照本文中比例为流动相进行梯度洗脱。

3.2 供试品提取时间的选择 供试品制备分别采用超声(300 W,50 kHz)40,50,60 min进行处理,以确定最佳提取时间。结果供试品超声40 min明显低于超声50和60 min,而超声60和50 min差异不大,故选择超声波(300 W,50 kHz)超声50 min作为供试品制备的提取时间。

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DOI 10.3870/yydb.2014.11.032

R286;R927.1

B

1004-0781(2014)11-1517-03

2014-01-10

2014-02-21

唐英玲(1964-),女,江西南昌人,副教授,硕士,主要从事医药学教学、教育管理及思想教育工作。电话: 0791-85984007,E-mail:tangyinglinglunwen@163.com。