烧伤愈合膏龙脑与异龙脑的含量测定*

邹吉利,徐彬,吴金虎,陈永刚,黄丹丹

(1.武汉市第三医院药学部,武汉 430060;2.湖北省食品药品监督检验研究院,武汉 430064)

烧伤愈合膏龙脑与异龙脑的含量测定*

邹吉利1,徐彬1,吴金虎1,陈永刚1,黄丹丹2

(1.武汉市第三医院药学部,武汉 430060;2.湖北省食品药品监督检验研究院,武汉 430064)

目的 建立烧伤愈合膏中龙脑、异龙脑的含量测定方法。方法采用毛细管气相色谱法,以聚乙二醇20000为固定液,涂布浓度为100%,氮气为载气,氢火焰离子化(FID)检测器,用ZB-WAX毛细管柱(30 m×0.25 mm, 0.25 μm),程序升温80℃(5 min)→5℃·min-1→180℃(10 min),分流进样,分流比为10∶1。结果龙脑在0.487 5～31.25 ng(r=0.999 6,n=6),异龙脑在0.487 5～31.25 ng(r=0.999 7,n=6)线性关系良好,平均加样回收率分别为95.95%和96.44%。结论所建立的方法可同时对龙脑、异龙脑的含量进行测定,准确度高,灵敏性好,可用于烧伤愈合膏的质量控制。

龙脑;异龙脑;烧伤愈合膏;色谱法,毛细管气相

烧伤愈合膏系武汉市第三医院自主研制的系列烧伤制剂之一。根据烧伤病的特点,遵循中医对烧伤“火毒内攻”的认识[1-2],按照清热解毒、化腐生肌、祛瘀生新、活血止痛的原则[3]设计制备的软膏剂。处方中含有黄连、冰片、乳香等,其中冰片作为使药,具有开窍醒神、清热解毒止痛、促进其他药物透皮吸收的作用[4]。冰片主要含龙脑和异龙脑,其含量的高低影响着烧伤愈合膏的吸收和疗效,因此龙脑、异龙脑含量测定对烧伤愈合膏的质量控制尤为重要。笔者在本实验参考相关文献[5-7],采用毛细管气相色谱法同时测定烧伤愈合膏中龙脑、异龙脑的含量,为其质量控制奠定基础。

1 仪器与试药

1.1 仪器 Agilent GC6890N气相色谱仪,FID检测仪,QL-200型氢气发生器,CA型静音无油空气泵,电子分析天平,毛细管色谱柱,KQ-300E型超声仪, Sartorius十万分之一分析天平。

1.2 试药 龙脑对照品(中国食品药品检定研究院,批号:110881-201107,供含量测定用),异龙脑对照品(中国食品药品检定研究院,批号:1512-200201,供含量测定用),水为超纯水,乙酸乙酯为分析纯,烧伤愈合膏[医院制剂批准文号:鄂药制字(2001)第BZ02-047号,批号:20120720,20120730,20120810]。

2 方法与结果

2.1 溶液的制备

2.1.1 对照品溶液的制备 取龙脑、异龙脑对照品,精密称定,分别加乙酸乙酯配制成0.250 mg·mL-1对照品溶液。取等体积的龙脑、异龙脑对照品溶液混合均匀,得到浓度均为0.125 mg·mL-1混合对照品溶液。

2.1.2 烧伤愈合膏供试品溶液和阴性样品溶液的制备 取烧伤愈合膏0.5 g,精密称定,加乙酸乙酯100 mL,精密称定,超声30 min,放冷后用乙酸乙酯补足损失的质量,滤过,取续滤液,即得烧伤愈合膏供试品溶液。按处方比例将不含冰片的其他药材按相关工艺制成膏剂,得到阴性样品,再按上述方法制备得到烧伤愈合膏阴性样品溶液。

2.2 色谱条件和系统适应性实验 以聚乙二醇20000为固定相,ZB-WAX毛细管柱(30 m×0.25 mm, 0.25 μm),涂布浓度为100%,柱流量为1.0 mL·min-1,氮气为载气,流速30 mL·min-1。柱温:程序升温,初始温度80℃,保留5 min,以5℃·min-1的速率升至180℃,终温保持10 min,进样口温度200℃,检测器温度220℃,分流进样,分流比10∶1。在该条件下将对照品溶液、供试品溶液、阴性样品溶液分别进样1 μL,保留时间为20 min,结果显示分离良好,阴性无干扰,结果见图1。

A.阴性样品;B.混合对照品;C.烧伤愈合膏样品;1.异龙脑;2.龙脑图1 烧伤愈合膏气相图谱A.Negative controls;B.mixed control;C.shaoshang yuhe gao sample;1.isoborneol;2.campholFig.1 Gas chromatograms of shaoshang yuhe gao

2.3 线性关系考察 以浓度均为0.125 mg·mL-1的龙脑、异龙脑混合对照品溶液为母液,精密吸取母液0.039,0.078,0.156,0.312,0.625,1.250,2.50 mL,分别加乙酸乙酯定容到10 mL量瓶,得到龙脑、异龙脑系列浓度分别为0.487 5,0.975 0,1.950 0,3.900 0, 7.812 5,15.625,31.250 μg·mL-1溶液,分别精密吸取1 μL,注入气相色谱仪测量,分别以龙脑、异龙脑含量为横坐标(X),峰面积为纵坐标(Y)进行线性回归处理,得到龙脑回归方程:Y=457.5X+0.433 3,r= 0.999 6(n=6),线性范围:0.487 5～31.25 ng;异龙脑回归方程:Y=536.7X+0.487 5,r=0.999 7(n=6),线性范围:0.487 5～31.25 ng。

2.4 精密度实验 精密吸取混合对照品溶液1 μL,连续进样6次,记录其峰面积,计算得龙脑、异龙脑峰面积RSD分别为1.30%和0.9%。

2.5 稳定性实验 取烧伤愈合膏供试品溶液1 μL,分别在第2,4,6,8,10,12小时进样,记录其峰面积,计算得龙脑、异龙脑峰面积RSD分别为1.4%和1.2%。

2.6 重复性实验 精密吸取同一批号的6份烧伤愈合膏样品溶液,分别进样,每次1 μL,记录其峰面积,计算得龙脑、异龙脑的含量RSD分别为0.98%和1.32%。

2.7 加样回收率实验 取烧伤愈合膏样品6份,各约0.25 g,含龙脑约4.904 mg·g-1,异龙脑约4.032 mg·g-1,精密称定,分别精密加入龙脑对照品1.10 mg和异龙脑对照品0.95 mg,制备成供试品溶液,测定样品中龙脑和异龙脑的含量,计算加样回收率,结果得到龙脑的平均加样回收率为95.95%,RSD为1.1%,异龙脑的平均加样回收率为96.44%,RSD为1.96%,见表1。

表1 龙脑和异龙脑的加样回收率实验结果Tab.1 Results of recovery of camphol and isoborneol

2.8 样品含量测定 取本品约0.5 g,精密称定,制备成烧伤愈合膏供试品溶液,取1 μL注入气相色谱仪进行色谱分析,测定峰面积并计算含量。结果龙脑含量分别为4.850,4.972,4.892 mg·g-1,平均4.905 mg·g-1;异龙脑含量分别为3.982,4.124,3.988 mg·g-1,平均4.031 mg·g-1。

3 讨论

龙脑和异龙脑作为冰片的主要成分,在本法的实验条件下,两峰理论板数高,峰形好,分离效果好,可作为烧伤愈合膏质量控制中冰片含量的测定方法。

本实验利用气相色谱法确定了烧伤愈合膏中冰片的主要化学成分的含量,这为后期的指纹图谱研究奠定了基础。还考察了气相色谱法测定龙脑、异龙脑含量的方法学,对其含量进行了测定,这对制剂的质量控制提供了支持,为提高该制剂的质量标准和后期体内药效物质基础研究奠定了基础[8-11]。

[1] 谷达法.火毒论[J].中医临床研究,2012,4(15):47-49.

[2] 艾红利.浅谈“火毒”与炎症的内在联系[J].内蒙古中医药,2011,15:122-123.

[3] 袁汀,周瑜妹.外用中药治疗烧烫伤的研究进展[J].光明中医,2010,25(11):2151-2153.

[4] 李超英,李春雨,杨辛欣,等.复方珍珠滴眼液凝胶中冰片的含量测定方法研究[J].中国药事,2008,22(10): 884-886.

[5] 国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[M].北京:中国医药科技出版社,2010:136-137.

[6] 刘峰,马太久.GC法同时测定冠心舒通胶囊中丁香酚、龙脑和异龙脑[J].中国实验方剂学杂志,2011,17 (18):56-59.

[7] 方颖,赵希贤.气相色谱法同时测定醒脑静注射液中麝香酮、龙脑、樟脑、异龙脑的含量[J].中国实验方剂学杂志,2012,18(8):96-98.

[8] 王晓雯,骆晶,贾璞,等.HS-GC联用法测定速效救心丸和华佗再造丸中冰片[J].中成药,2012,34(3):503-505.

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[11] 陈建南,曾惠芳,李耿,等.龙脑樟挥发油及天然冰片成分分析[J].中药材,2005,28(9):781-782.

DOI 10.3870/yydb.2014.07.029

Determination of Camphol and Isoborneol in Shaoshang Yuhe Gao

ZOU Ji-li1,XU Bin1,WU Jin-hu1,CHEN Yong-gang1,HUANG Dan-dan2
(1.Department of Pharmacy,the Third Hospital of Wuhan,Wuhan 430060,China;2.Hubei Provincial Institute for Food and Drug Control, Wuhan 430064,China)

ObjectiveTo establish a capillary gas chromatography method for determination of camphol and isoborneol inShaoshang yuhe gao(burn healing cream).MethodsThe capillary gas chromatography was adopted under the following conditions:use PEG-2000 as the stationary liquid,nitrogen as carrier gas,ZB-WAX(30 m×0.25 mm,0.25 μm)as the chromatographic column,and the flame ionization detector.The column temperature was programmed at 80℃for 5 min as the initial temperature,then raised to 180℃at the rate of 5℃·min-1and kept for 10 min.The shunt ratio was 10∶1.ResultsThe liner range for camphol was 0.487 5-31.25 μg(r=0.999 6),and the average recovery was 95.95%(n=6).The liner range for isoborneol was 0.487 5-31.25 μg(r=0.999 7),and the average recovery was 96.44%(n=6).ConclusionThe method is accurate,sensitive,and can be applied to quality control ofshaoshang yuhe gao.

Camphol;Isoborneol;Shaoshang yuhe gao;Chromatography,capillary gas

T286;TQ460.1

A

1004-0781(2014)07-0944-03

2013-06-17

2013-07-15

*湖北省科技计划自然科学基金资助项目(2011CDB298)

邹吉利(1986-),女,四川资阳人,药师,硕士,主要研究方向:药物分析。E-mail:zjlily86@163.com。

吴金虎(1962-),男,湖北十堰人,主任药师,博士,主要从事临床药学及药理学研究。E-mail:75301082@qq. com。