气相色谱法测定复方丹参滴丸给药制剂中异龙脑和龙脑含量

刘彦莉，王 萍， 张 磊，孙 巍，米晓兰

(1.天津天士力制药股份有限公司，天津 300402)

气相色谱法测定复方丹参滴丸给药制剂中异龙脑和龙脑含量

刘彦莉，王 萍， 张 磊，孙 巍，米晓兰

(1.天津天士力制药股份有限公司，天津 300402)

目的：使用气相法测定复方丹参滴丸给药制剂中异龙脑、龙脑含量。方法：采用气相色谱法测定, 乙酸乙酯为溶剂, 水杨酸甲酯为内标。色谱柱为HP-5型5%PHMEsiloxana石英毛细管柱(30 m× 0.32 mm，0.25 μm)，载气为氮气，分流比10∶1。FID检测器，检测器温度：250 ℃；进样口温度：200 ℃；柱温：100 ℃保持12 min。进样体积1 μl。结果：异龙脑在0.010～0.30 mg/ml(r=0.999 9)、龙脑在0.020～0.60 mg/ml范围内呈良好线性关系, 异龙脑平均回收率为98.51%，RSD为0.67%；龙脑平均回收率为98.54%，RSD为0.95%。结论：方法快速、准确、可靠，可用于复方丹参滴丸给药制剂中异龙脑、龙脑含量的检测。

石英毛细管气相色谱，复方丹参滴丸给药制剂，异龙脑，龙脑

本文中复方丹参滴丸给药制剂是复方丹参滴丸水溶液。复方丹参滴丸是由丹参、三七和冰片组成，具有活血化瘀、理气止痛之功效，用于气滞血瘀所致的胸痹,症见胸闷、心前区刺痛[1]。为深入研究处方中冰片的药理药效、科学阐述临床效果，建立了气相色谱法测定给药制剂中异龙脑、龙脑含量，二者加和即为冰片含量。

1 仪器与试药

Agilent 7890A 气相色谱仪，FID检测器。龙脑对照品(批号BCBM2364V，供含量测定用)、异龙脑对照品(批号MKBJ9230V，供含量测定用)、水杨酸甲酯对照品(批号MKBL3283V，供含量测定用)，均来源于Sigam。乙酸乙酯为色谱纯。复方丹参滴丸给药制剂(批号CV-13、CV-14、CV-15，由天士力毒理所提供)。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 色谱柱为Hp-5型5%PHMEsiloxana石英毛细管柱(30 m× 0.32 mm，0.25 μm)，柱温：100 ℃保持12 min，总程序12 min；FID氢火焰离子化检测器，检测器温度：250 ℃；载气：氮气；流速：1.0 ml/min；进样口温度：200 ℃；分流比：10∶1。

2.2 溶液的制备

2.2.1 内标溶液制备 精密称取水杨酸甲酯对照品适量于量瓶中，加乙酸乙酯制成8 mg/ml的内标溶液。

2.2.2 对照品溶液制备 取龙脑对照品，分别精密称定16、20和24 mg于100 ml量瓶中，分别精密加入内标溶液4 ml，加乙酸乙酯制成3种浓度的龙脑对照品溶液。取异龙脑对照品，分别精密称定8、10和12 mg于100 ml量瓶中，分别精密加入内标溶液4 ml，加乙酸乙酯制成3种浓度的异龙脑对照品溶液。

2.2.3 供试品溶液制备 移取给药制剂10 ml于50 ml塑料离心管中，加25 ml乙酸乙酯剧烈振摇萃取，若乳化可加0.25 g NaCl 破乳，离心5 min，用吸管吸取萃取液置50 ml量瓶中。依法用乙酸乙酯分别萃取两次，每次10 ml(后两次萃取时若仍有乳化，还可加0.25 g NaCl 破乳)，合并萃取液，精密加入内标液2 ml，最后用乙酸乙酯定容至刻度，摇匀，作为供试品溶液。

2.2.4 阴性溶液制备 依据处方，取丹参、三七加水煎煮，煎液滤过，滤液浓缩，加入乙醇，静置使沉淀，取上清液，回收乙醇，浓缩成稠膏备用。取聚乙二醇适量，加热使熔融，加入上述稠膏混匀，滴入冷却的液体石蜡中制成包薄膜衣滴丸，即得阴性样品[2]。称取阴性样品0.2 g于50 ml塑料离心管中，之后按照“2.2.3”项下方法制备得阴性溶液。

2.3 专属性试验 分别精密吸取空白溶剂、阴性对照溶液、对照品溶液和供试品溶液各1 μl 注入气相色谱仪，测定，用内标法计算含量即得。在选定色谱条件下，空白溶剂、阴性样品对给药制剂中龙脑和异龙脑含量测定均无影响。见图1。

1.异龙脑 2.龙脑 3.水杨酸甲酯

2.4 标准曲线制备 取龙脑对照品约100 mg精密称定，于50 ml量瓶中，加乙酸乙酯定容制成2 mg/ml龙脑对照品母液。分别精密吸取上述溶液15、10、5、2、1和0.5 ml，于50 ml量瓶中，精密加入内标液2 ml，配制成6个浓度龙脑对照品溶液。以龙脑浓度为横坐标(X)，以K龙脑峰面积/水杨酸甲酯峰面积为纵坐标(Y)，绘制标准曲线。取异龙脑对照品约50 mg精密称定，于50 ml量瓶中，加乙酸乙酯制成1 mg/ml异龙脑对照品母液。分别精密吸取上述溶液15、10、5、2、1和0.5 ml，于50 ml量瓶中，精密加入内标液2 ml，配制成6个浓度异龙脑对照品溶液。以异龙脑浓度为横坐标(X)，以K异龙脑峰面积/水杨酸甲酯峰面积为纵坐标(Y)，绘制标准曲线。龙脑回归方程为：Y=4.781 66X+0.002 75(r=0.999 9)；异龙脑回归方程为：Y= 4.691 27X+ 0.001 08(r=0.999 9)。龙脑在0.020～0.60 mg/ml范围内呈良好线性关系，异龙脑在0.010～0.30 mg/ml范围内呈良好线性关系。

2.5 精密度试验 取同批号给药制剂(批号CV13)制备6份供试品溶液(上、中、下层各取样品2份)，在选定色谱条件下进行检测。测得样品中冰片平均含量为0.356 mg/ml，RSD为0.86%。表明精密度良好。

2.6 均一性 从给药制剂上、中、下层各取样品2份，制备6份供试品溶液，在选定色谱条件下进行检测。测定样品中冰片平均含量为0.356 mg/ml，RSD为0.86%。

2.7 加样回收率试验 移取给药制剂5 ml于50 ml塑料离心管中，共9份，分别精密加入浓度为0.6 mg/ml的异龙脑标准液0.5、1.0和1.5 ml，平行做3份，按“2.2.3”项下方法制备供异龙脑回收率试验溶液。移取给药制剂5 ml于50 ml塑料离心管中，共9份，分别精密加入浓度为1.2 mg/ml的龙脑标准液0.5、1.0和1.5 ml，平行做3份，按“2.2.3”项下方法制备供龙脑回收率试验溶液。在选定色谱条件下进行检测。结果异龙脑的平均回收率为98.51%，RSD为0.67%；龙脑的平均回收率为98.54%，RSD为0.95%。见表1、表2。

2.8 稳定性试验 分别取3个浓度的异龙脑和龙脑对照品溶液，密闭室温下放置，于0、24、36和48 h，在选定色谱条件下检测，以K异龙脑峰面积/水杨酸甲酯峰面积和K龙脑峰面积/水杨酸甲酯峰面积进行稳定性评价。龙脑对照品溶液K龙脑峰面积/水杨酸甲酯峰面积RSD分别为0.98%、0.70%和0.59%；异龙脑对照品溶液K异龙脑峰面积/水杨酸甲酯峰面积RSD分别为0.49%、0.48%和0.43%。取同一份供试品溶液，密闭室温放置，分别于0、24、36和48 h，在选定色谱条件下检测，计算冰片含量RSD为0.98%。表明48 h内异龙脑和龙脑对照品溶液及供试品溶液稳定。

表1 异龙脑加样回收率试验结果(n=9)

表2 龙脑加样回收率试验结果(n=9)

2.9 样品测定 取3批给药制剂，按“2.2.3”项下方法制备供试品溶液，在选定色谱条件下进行检测。结果见表3。

表3 含量测定结果

3 讨论

3.1 溶剂的选择 选择溶解性能好且干扰小的乙酸乙酯作为溶剂，既能很好溶解样品又能避免空白溶剂干扰。

3.2 内标物的选择 理想内标物应满足下列要求：完全溶解于样品中，且不与待测组分发生化学作用；尽可能与待测组分峰位靠近，但能与待测组分完全分开(R≥1.5)；在其周围不应有过多干扰峰存在。水杨酸甲酯出峰位置无干扰，峰形较好，与异龙脑、龙脑峰分离度高，是很好的内标物。本文所建立的异龙脑、龙脑含量检测方法，经方法学验证准确可靠，完全符合非临床含量方法验证[3]要求，可用于复方丹参滴丸给药制剂中异龙脑、龙脑含量检测。

1 孙国祥，宋宇晴. 复方丹参滴丸HPLC数字化指纹图谱研究[J]. 中成药，2009，31(8)：1152-1155

2 中国药典[S].一部.2015：1219

3 Monica Lee Whitmire,Peter Bryan,Teresa R Henry,etal. NonClinical dose formulation analysis method validation and sample analysis[J].The AAPS Journal,2010,12(4)：628-634

Determination of Iso-borneol and borneol in compound danshen dripping pill by capillary gas chromatography

Liuyanli1，Wangping1，Zhanglei1，Sunwei1，Mixiaolan1

(1. Tasly Pharmaceutical Co.Ltd., Tianjin, 300402)

Objectives： To establish a method of a capillary gas chromatography for determination of iso-borneol and borneol contents in compound Danshen dripping pill. Methods： a gas chormatographic method was developed with HP-5 capillary column (30 m×0.32 mm, 0.25 μm) as stationary phase and nitrogen as carrier gas. The compounds were determined with FID. The temperature of the injector and detector were set at 200℃ and 250 ℃, respectively. Column temperature was at 100 ℃ for 12 minutes. The injection volume was 1 μl. Results： The calibration curves showed a good linear relationship within the range of 0.010～0.30 mg/ml of iso-borneol and 0.020～0.60 mg/ml of borneol with good precision and accuracy,respectively. 98.51% of isoborneol and 98.54% of borneol was recovered from the samples, respectively. Conclusions： With excellent accuaracy, high sensitivity and reliability, the method can be applied to determine the contents of iso- and borneol in compound Danshen dripping pill.

capillary gas chromatography, FID detector, compound Danshen dripping pill, iso-borneol,borneol

2016-01-14

R927.2

A

1006-5687(2016)02-0013-03