复方血栓通胶囊改善小鼠脑缺血与耐缺氧作用

邵梦茹,文思,刘静,朱厚曦

(1.广州中医药大学中药学院,广州 510006;2.广东众生药业股份有限公司,东莞 523325)

复方血栓通胶囊改善小鼠脑缺血与耐缺氧作用

邵梦茹1,文思1,刘静1,朱厚曦2

(1.广州中医药大学中药学院,广州 510006;2.广东众生药业股份有限公司,东莞 523325)

目的 观察复方血栓通胶囊改善脑缺血与耐缺氧的作用。方法将昆明小鼠随机分为假手术组(正常对照组),模型对照组,复方血栓通胶囊低、中、高(0.75,1.50,2.25 g·kg-1)剂量组,尼莫地平片组和脑安胶囊组,均连续灌胃给药7 d。结扎单侧颈总动脉制备小鼠实验性脑缺血模型,观察其脑含水量、脑卒中指数;耐缺氧实验观察小鼠常压耐缺氧、亚硝酸钠中毒、急性脑缺氧存活时间。结果复方血栓通胶囊低、中、高剂量组均能不同程度地降低单侧颈总动脉结扎小鼠脑含水量,减小脑卒中指数(P＜0.05,P＜0.01);均能不同程度地延长小鼠常压耐缺氧、亚硝酸钠中毒、急性脑缺氧存活时间(P＜0.05,P＜0.01)。结论复方血栓通胶囊具有改善小鼠脑缺血和耐缺氧的作用。

血栓通胶囊,复方;缺血,脑;耐缺氧;小鼠

复方血栓通胶囊由三七、黄芪、丹参、玄参组成,具有活血化瘀、益气养阴的功效,临床适用于血瘀兼气阴两虚引起的视网膜静脉阻塞和稳定性劳累型心绞痛。笔者在本实验中对复方血栓通胶囊防治缺血性脑卒中的药效学进行研究,通过制备小鼠脑缺血、缺氧模型,观察其抗脑缺血、缺氧的作用,以增加其适应证。

1 材料

1.1 动物 昆明小鼠,SPF级,雌雄各半,体质量18～22 g,购自广州中医药大学实验动物中心,生产许可证号:SCXK(粤)2008-0020,实验许可证号:SYXK(粤) 2008-0001,饲养在广州中医药大学实验动物中心,SPF级实验动物房,室温(25±1)℃,自由饮水,采用12 h∶12 h昼夜间断照明,每周换水3次,换垫料2次。

1.2 试药 复方血栓通胶囊,广东众生药业股份有限公司,批号:111219。尼莫地平片,广东华南药业集团有限公司,批号:120202。脑安胶囊,辽源誉隆亚东药业有限责任公司,批号:111264。水合氯醛,天津市科密欧化学试剂有限公司,批号:20111114;硫酸庆大霉素,天津药业焦作有限公司,批号:10092022;盐酸异丙肾上腺素注射液,上海禾丰制药有限公司,批号:110204;亚硝酸钠,天津市大茂化学试剂厂,批号:2011092;钠石灰,天津市福晨化学试剂厂,批号:20110712。

1.3 仪器 DGX-924513-2烘箱,上海福玛实验设备有限公司,J0020037;EL204电子天平,梅特勒-托利多仪器(上海)有限公司,20082163。

1.4 统计学方法 实验数据采用SPSS17.0版统计软件处理。计量资料求均数±标准差(±s),在方差齐性基础上,多组间均数比较采用ANOVA,组间两两比较采用最小显著差法。

2 方法与结果

2.1 对小鼠脑缺血的影响 取昆明小鼠82只,按随机数字表法分为假手术组,模型对照组,脑安胶囊组,尼莫地平片组,复方血栓通胶囊低、中、高剂量组。灌胃给药,每天1次,连续7 d,于末次给药后1 h,乙醚麻醉,从颈部正中切口,分离并用丝线结扎右侧颈总动脉,假手术组只穿线不结扎。造模后分别于2,12 h给药,连续动态观察缺血不同时间点(1,3,6,9,12 h)的脑卒中指数,并测定计算脑含水量,脑含水量(%)= (湿脑质量-干脑质量)/湿脑质量×100%。脑卒中指数判断标准:毛蓬乱竖起计为1分,动作缓慢或活动减少计为1分,触耳反应加强计为1分,眼睑下垂计为1分,头翘起计为3分,不闭眼计为3分,后肢向外向后伸展计为3分,转圈计为3分,抽搐或阵挛计为3分,四肢无力计为6分,总分25分[1-2]。结果见表1,2。

由表1可知,与假手术组比较,模型对照组小鼠脑含水量显著增加(P＜0.05);与模型对照组比较,尼莫地平片组、脑安胶囊组和复方血栓通胶囊低、中、高剂量组小鼠脑含水量均显著减少(P＜0.05或P＜0.01)。

由表2可知,与假手术组比较,模型对照组小鼠脑卒中指数在缺血1,3,6,9,12 h均显著增加(P＜0.01);与模型对照组比较,给药组缺血后脑卒中指数,复方血栓通胶囊低剂量组在9 h,复方血栓通胶囊高剂量组在1,3,6,9 h,尼莫地平片组在3,6,9,12 h,脑安胶囊组在3,9 h显著降低(P＜0.05,P＜0.01)。

2.2 耐缺氧实验

2.2.1 常压耐缺氧实验 昆明小鼠70只,按随机数字表法分为正常对照组,模型对照组,脑安胶囊组,尼莫地平组,复方血栓通低、中、高剂量组。灌胃级药,每天1次,连续7 d。最后一次给药前禁食不禁水12 h,给药30 min后,除正常对照组外其余各组按15 mg·kg-1剂量腹腔注射盐酸异丙肾上腺素,换算注射量为0.1 mL·(10 g)-1,注射后30 min,将小鼠放入盛有8 g钠石灰的容积为250 mL的广口瓶内,每次1只,将瓶口用塞子封住,立即计时,以停止呼吸为指标观察小鼠存活时间[1-2]。结果见表3。

表1 7组小鼠脑含水量测定结果Tab.1 Results of cerebral water content in seven groups of mice ±s

表1 7组小鼠脑含水量测定结果Tab.1 Results of cerebral water content in seven groups of mice ±s

与假手术组比较,*1P＜0.05;与模型对照组比较,*2P＜0.01,*3P＜0.05Compared with shamoperation group,*1P＜0.05;compared with model control group,*2P＜0.01,*3P＜0.05

组别小鼠/只剂量/ (g·kg-1)脑含水量/ %假手术组10…77.97±0.23模型对照组12…78.37±0.40*1尼莫地平片组120.0477.83±0.24*2脑安胶囊组110.5377.97±0.37*3复方血栓通低剂量组120.7577.87±0.13*2中剂量组121.5078.08±0.17*3高剂量组122.2577.90±0.29*2

表3显示,与正常对照组比较,模型对照组小鼠存活时间显著缩短(P＜0.01);与模型对照组比较,尼莫地平片组、脑安胶囊组、复方血栓通胶囊中剂量组小鼠存活时间显著延长(P＜0.05,P＜0.01)。

2.2.2 亚硝酸钠中毒实验 昆明小鼠60只,按随机数字表法分为正常对照组,脑安胶囊组,尼莫地平组,复方血栓通低、中、高剂量组。灌胃给药,每天1次,连续7 d。最后一次给药前禁食不禁水12 h,给药30 min后,每只小鼠按240 mg·kg-1腹腔注射亚硝酸钠,注射量为0.1 mL·(10 g)-1,注射完毕立即计时,记录小鼠从注射完毕至死亡的时间。结果见表4。由表4可知,与正常对照组比较,尼莫地平片组、复方血栓通中剂量组小鼠存活时间显著延长(P＜0.01)。

表2 7组小鼠不同时间脑卒中指数测定结果Tab.2 Results of stroke index in seven groups of mice at different time points ±s

表2 7组小鼠不同时间脑卒中指数测定结果Tab.2 Results of stroke index in seven groups of mice at different time points ±s

与正常对照组比较,*1P＜0.01;与模型对照组比较,*2P＜0.01,*3P＜0.05Compared with normal control group,*1P＜0.01;compared with model control group,*2P＜0.01,*3P＜0.05

组别剂量/ (g·kg-1)1 h3 h6 h9 h12 h正常对照组…0.00±0.000.00±0.000.00±0.000.00±0.000.00±0.00模型对照组…13.08±1.98*113.58±1.68*113.08±1.83*112.83±1.85*110.27±1.79*1尼莫地平片组0.0412.83±2.2511.17±1.59*210.92±2.23*310.00±1.13*28.75±1.71*3脑安胶囊组0.5312.45±1.8611.64±2.46*311.36±2.429.27±2.69*29.36±2.66复方血栓通低剂量组0.7513.00±2.1312.67±1.8311.50±2.0711.08±2.15*38.67±2.81中剂量组1.5012.83±1.9512.83±1.8511.58±1.9812.00±1.769.67±2.02高剂量组2.2511.25±2.18*310.67±1.67*210.25±2.22*29.83±1.95*28.33±2.64

表3 7组小鼠存活时间测定结果Tab.3 Results of survival time in seven groups of mice ±s

表3 7组小鼠存活时间测定结果Tab.3 Results of survival time in seven groups of mice ±s

与正常对照组比较,*1P＜0.01;与模型对照组比较,*2P＜0.01,*3P＜0.05Compared with normal control group,*1P＜0.01;compared with model control group,*2P＜0.01,*3P＜0.05

组别小鼠/只剂量/ (g·kg-1)存活时间/ min正常对照组10…11.01±1.08模型对照组10…7.28±0.52*1尼莫地平片组100.049.11±1.36*2脑安胶囊组100.538.36±1.64*3复方血栓通低剂量组100.757.81±0.92中剂量组101.508.36±0.47*2高剂量组102.257.98±0.85

表4 6组小鼠存活时间测定结果Tab.4 Results of survival time in six groups of mice ±s

表4 6组小鼠存活时间测定结果Tab.4 Results of survival time in six groups of mice ±s

与正常对照组比较,*1P＜0.01Compared with normal control group,*1P＜0.01

组别小鼠/只剂量/ (g·kg-1)存活时间/ min正常对照组10…16.58±1.75尼莫地平片组100.0421.07±1.80*1脑安胶囊组100.5317.67±2.07复方血栓通低剂量组100.7516.96±1.49中剂量组101.5019.15±1.62*1高剂量组102.2517.29±1.37

2.2.3 急性脑缺氧实验 昆明小鼠60只,分组和给药方法同“2.2.2项。最后一次给药前禁食不禁水12 h,给药30 min后,各组动物快速自颈部断头,记录小鼠断头后至张口喘气停止时间[1-2]。结果见表5。

表5显示,与正常对照组比较,尼莫地平片组、脑安胶囊组、复方血栓通胶囊低、中、高剂量组小鼠喘息时间均显著延长(P＜0.05,P＜0.01)。

3 讨论

缺血性脑卒中发病机制多为动脉血栓形成及脑梗死[3]。脑动脉一旦栓塞,脑组织得不到足够的血液灌注而发生缺血、缺氧,即开始了缺血性脑卒中的病理、生理演变过程[4]。

表5 6组小鼠喘息时间测定结果Tab.5 Results of gasping time in six groups of mice ±s

表5 6组小鼠喘息时间测定结果Tab.5 Results of gasping time in six groups of mice ±s

与正常对照组比较,*1P＜0.01,*2P＜0.05Compared with normal control group,*1P＜0.01,*2P＜0.05

组别剂量/ (g·kg-1)小鼠数喘息时间/ s正常对照组…1021.00±2.31尼莫地平片组0.041025.10±2.13*1脑安胶囊组0.531024.30±3.34*2复方血栓通低剂量组0.751025.70±2.06*1中剂量组1.51026.10±2.47*1高剂量组2.251027.00±3.33*1

复方血栓通胶囊主要成分三七、丹参活血化瘀,黄芪益气,玄参养阴、清热凉血。有研究表明复方血栓通可以降低血小板活性,抑制血小板聚集,提高纤维蛋白溶解酶的活性,增强血管舒缩调节功能,减少缺血血管的进一步损伤[5],此外复方血栓通胶囊还具有调整血脂水平、降低血液黏滞度及钙通道阻断作用,并加速神经功能的恢复。上述研究成果提示复方血栓通胶囊防治缺血性脑卒中的可行性。

研究表明,与模型对照组相比,复方血栓通胶囊能显著降低单侧颈总动脉结扎小鼠脑含水量,减小脑卒中指数(P＜0.01);能显著延长小鼠常压耐缺氧、亚硝酸钠中毒、急性脑缺氧存活时间(P＜0.01)。结果提示,复方血栓通胶囊具有改善小鼠脑缺血、耐缺氧的作用,为其进一步防治缺血性脑卒中的研究提供了一定的依据。

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[2] 徐叔云,卞如濂,陈修.药理实验方法学[M].3版.北京:人民卫生出版社,2003:1060-1068.

[3] 汪钟,郑植荃.现代血栓病学[M].北京:北京医科大学中国协和医科大学联合出版社,1997:3,385.

[4] 邢成名.缺血性脑血管病[M].北京:人民卫生出版社, 2003:110.

[5] 徐国海,吴照华.三七总苷片与洛丁新治疗早期糖尿病肾病的对比研究[J].现代中西医结合杂志,2000,23(29): 2330.

DOI 10.3870/yydb.2014.07.007

Effects of Compound Xueshuantong Capsule Against Cerebral Ischemia and Hypoxia in Mice

SHAO Meng-ru1,WEN Si1,LIU Jing1,ZHU Hou-xi2
(1.School of Chinese Medicine,Guangzhou University of Chinese Medicine,Guangzhou 510006,China;2.Guangdong Zhongsheng Pharmaceutical Co.,Ltd.Dongguan 523325,China)

ObjectiveTo study the effects of the compoundxueshuantongcapsule(FXC)against cerebral ischemia and hypoxia in mice.MethodsKMmice were randomly divided into the shamoperation group(normal control group),model control group,positive control group and FXC at high-,medium-and low-dose(0.75,1.50,and 2.25 g·kg-1)groups.After intragastric administration for 7consecutive days,cerebral ischemia model was established by unilateral carotid arteries ligation. The cerebral water content and stroke index were recorded.The viability of the mice was determined by testing atmospheric hypoxia,sodiumnitrite poisoning and acute cerebral anoxia.ResultsFXC decreased water content and stroke index of the mice suffered fromunilateral carotid artery ligation dose-dependently(P＜0.05,P＜0.01).It also prolonged the survival of mice by tolerating absence of oxygen,sodiumnitrite poisoning and acute cerebral anoxia(P＜0.05,P＜0.01).ConclusionFXC has a protective effect on cerebral ischemia and hypoxia in mice.

Xueshuantongcapsule,compound;Ischemia,cerebral;Tolerating absence of oxygen;Mice

R286;R965

A

1004-0781(2014)07-0866-03

2013-08-18

2013-09-15

邵梦茹(1989-),女,浙江温州人,在读硕士,研究方向:中药新药与保健品开发。E-mail:shaomengrukiking@ 163.com。

朱厚曦,男,工程师,研究方向:新药研究与开发。E-mail:zhuhouxi@126.com。