干眼症结膜印迹细胞学检查的临床研究

郭建军，陈则云，田学武，王 敏

(东莞市常平医院眼科，广东 东莞 523000)

干眼症结膜印迹细胞学检查的临床研究

郭建军，陈则云，田学武，王 敏

(东莞市常平医院眼科，广东 东莞 523000)

目的探讨结膜印迹细胞学检查(CIC)在干眼症诊断中的作用。方法选择2011年1月至2013年6在我院就诊的干眼症患者180例为观察组，按干眼症的分级，轻度65例，中度58例，重度57例；另选择180例健康者作为对照组。所有研究对象均进行泪液分泌实验(S-I-T)、泪膜破裂时间(BUT)、荧光素染色(FLS)检查；同时重点进行CIC检查。结果S-I-T、BUT、FLS检查指标结果，观察组与对照组差异均有统计学意义(P＜0.01)。观察组杯状细胞数量明显少于对照组(P＜0.01)；观察组轻、中、重度患者的杯状细胞数均少于对照组(P＜0.05或P＜0.01)。对照组CIC分级主要集中于0级和1级；干眼症患者则多集中于1、2、3级；其中轻、中度多集中于1、2级，重度主要为3级。观察组与对照组CIC分级有明显不同，差异均有统计学意义(P＜0.05)。观察组轻、中、重度患者CIC分级分别与对照组比较差异均有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01)。结论CIC检查能够反映泪膜黏液层的病理变化情况，可用于区分正常人与干眼症患者并可了解干眼的病程变化。

结膜印迹细胞学(CIC)；杯状细胞；临床研究

干眼症是一种常见的慢性眼表疾病，其发病率随年龄增长而逐渐提高[1]。临床常用的诊断干眼症的检查方法包括角膜荧光染色(Corneal fluorescein staining，FLS)、泪膜破裂时间(Break up time，BUT)、泪液分泌试验(Schirmer test，S-I-T)等。上述方法特异性均不高[2]。眼部印迹细胞检查(Conjunctival impression cytology，CIC)是一种采用醋酸纤维素滤纸或生物孔膜获取结、角膜表层细胞标本的一种检查法。对于传统的三项试验结果可以进行再检验，以减少假阴性及假阳性[3]。本研究观察了CIC检查情况，现总结如下：

1 资料与方法

1.1 一般资料 选择2011年1月至2013年6在我院就诊的干眼症患者180例为观察组；另选择180例健康者作为对照组。观察组中男性98例，女性82例；年龄32～65岁，平均(53.24±8.36)岁；经检查均符合干眼症诊断标准；按干眼症的分级，轻度65例，中度58例，重度57例。对照组中男性95例，女性85例；年龄32～65岁，平均(54.76±8.74)岁；对照组健康者均符合以下条件：①经裂隙灯仔细检查，排除干眼、睑缘炎及眼过敏症；②无眼睑及眼表异常；③无角膜接触镜配戴史；④无影响泪液分泌的全身与局部用药史；⑤无眼部手术史；⑥无胶原血管病或其他全身疾病史。

1.2 干眼症的诊断标准 ①主观症状：如干涩、视疲劳等；②BUT结果异常；③S-I-T结果＜10 mm；④FL：观察眼表面损害情况。在排除眼表其他疾病后，BUT≤5 s时，①+②可确诊为干眼；或BUT≤10 s时，①+②+③或①+②+④可确诊为干眼症。干眼症的分级见表1。

表1 干眼症的轻、中、重度的分级

1.3 方法

1.3.1 症状及病史询问 详细询问患者主要症状，如眼睛干涩、烧灼感等；以及生活工作环境、曾患疾病，如长期空调环境工作、驾车、使用电脑、眼表化学伤、热灼伤等等。

1.3.2 常用泪液检查方法 ①裂隙灯检查：泪河线宽度(＜0.3 mm)；睑缘充血，不规整；腺口出现黏稠分泌物；结膜充血，乳头增生；角膜上皮角化、水泡、变性、溃疡、白斑、血管翳。②S-I-T：室内普通光线下采用标准泪液分泌量测试条(SHOWA YAKUHIN KAKOCO，LTD)检测，折线处折起，置于下睑中外1/3结膜囊内，5 min取下从折起处记湿长。③BUT：1%荧光素钠10µ1滴入，测BUT。④FLS：1%荧光素钠10µ1滴入，观察角膜上、中、下三部分着染情况。每部分按0～3计分。0=无着染，1=散在点染，2=中等量斑点染色，3=密集斑点状染色。

1.3.3 CIC检查

1.3.3.1 方法 患者平卧于检查床上，0.5%的卡因点眼两次，开睑器开睑。用滤纸吸去下穹隆部泪液。用小颞子夹醋酸纤维滤纸，印取角膜颞侧球结膜上皮细胞；然后置入10%福尔马林中；行PAS染色，脱水干燥后光学显微镜下观察。

1.3.3.2 分级 据Nelson's分级[4]标准进行分级：0级，结膜上皮细胞形态、大小正常，胞浆蓝绿色，N/C为1:2，杯状细胞密集，平均1个低倍视野下见12.1个杯状细胞；1级，结膜上皮细胞轻扩大，胞浆蓝绿色，N/C为1:3，杯状细胞密度下降，平均1个低倍视野下见7.4个杯状细胞；2级，所有结膜上皮细胞均扩大，变扁平，胞浆兰绿或粉红色，N/C为1:4～1:5，轻度角化，平均1个低倍视野下见2.7个杯状细胞；3级，结膜上皮细胞胞浆内出现颗粒状物，核固缩崩解，胞浆成粉红色，N/C为1:6～1:8，出现不同程度的角化，杯状细胞完全丧失。

1.4 统计学方法 使用SPSS17.0统计软件，计量资料以均数±标准差()表示，其组间比较采用t检验，率的比较采用χ2检验，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 各项检查结果比较 S-I-T、BUT、FLS检查指标结果，观察组与对照组比较差异有显著统计学意义(P＜0.01)。观察组中轻度、中度、重度患者S-I-T、BUT、FLS检查指标分别与对照组比较，差异均有显著统计学意义(P＜0.05或P＜0.01)，见表2。

表2 S-I-T、BUT、FLS检查指标比较()

表2 S-I-T、BUT、FLS检查指标比较()

注：与对照组比较，aP＜0.05；与对照组比较，bP＜0.01。

观察组轻度中度重度对照组180(360) 65(130) 58(116) 57(114) 180(360) 3.63±2.52b8.03±0.64a5.16±0.53b1.83±0.62b11.63±3.53 4.13±2.14b8.14±0.73a5.32±0.62b1.74±0.64b10.93±3.32 5.93±2.63b2.73±0.53a6.02±0.46b10.83±1.64b0.16±0.11

2.2 结膜杯状细胞数量 观察组杯状细胞数量明显少于对照组(P＜0.01)；轻、中、重度患者的杯状细胞个数均少于对照组(P＜0.05或P＜0.01)，见表3。

表3 结膜杯状细胞数量()

表3 结膜杯状细胞数量()

注：与对照组比较，aP＜0.05；与对照组比较，bP＜0.01。

观察组轻度中度重度对照组180(360) 65(130) 58(116) 57(114) 180(360) 58.74±8.94b126.32±12.43a56.23±7.34b 11.64±3.46b 237.64±14.57

2.3 CIC分级情况 正常对照组CIC分级主要集中于0级和1级，干眼症患者分级多集中于1、2、3级，其中轻度、中度患者多集中于1、2级，N/C主要为1:3、1:4、1:5，杯状细胞明显减少，上皮细胞核变长、梭形；重度患者主要为3级，N/C主要为1:6或1:7，明显角化，核固缩、崩解，几无杯状细胞。观察组与对照组CIC分级明显不同(P＜0.05)。轻、中、重度患者CIC分级与健康者均不同(P＜0.05或P＜0.01)。

3 讨论

干眼症是一种常见的眼表疾病。近年来，尽管已有大量动物模型及临床试验研究干眼病，但其确切发病机制仍不明确。研究表明引起泪膜不稳定的原因均可导致干眼症。泪膜是眼表结构的重要组成部分，由外向内分为三层，最内层为粘液层，黏液层粘附于角膜微绒毛、微皱壁上，使泪膜能均匀地覆盖于眼表，并可降低眼表面张力。黏液主要由结膜杯状细胞产生，因此通过观察杯状细胞数变化可了解眼表黏液层的情况。20世纪70年代，Egbert等首次提出CIC方法，该方法对眼部细胞无损伤，同时又能观察到不同细胞之间的比例特点。因此，被广泛应用于多种眼表研究。对于干眼症的诊断，传统的3项诊断性试验结果(S-I-T、BUT、FLS)由于受到个体差异、检查者操作及主观判断等诸多因素影响。文献报道上述三项诊断客观性和可重复性分歧较大[5]。CIC检查是通过一种带有微孔，具有较强吸附力的滤膜在结膜面贴覆片刻后能够得到杯状细胞分泌的黏蛋白印记，通过PAS联合苏木素染色可以显示黏蛋白及所有细胞核的分布，间接反映杯状细胞及结膜上皮细胞的形态和数量。CIC检查属于病理形态学诊断，通过观察患者结膜上皮细胞形态及杯状细胞的变异情况提供诊断依据，因此，可作为杯状细胞缺乏型干眼症的诊断金标准。

本研究结果显示，干眼症患者上皮细胞呈现各种不同形态的变化，出现扩大、扁平等形状；杯状细胞的数量明显减少以至完全消失。随着CIC分级的升高，患者的临床症状更加严重，泪液分泌明显减少。其中轻、中度患者大多数为1、2级，重度患者主要为3级。说明结膜印迹细胞学检查在早期干眼症的诊断中具有特异性，与临床患者的症状、体征相符。临床可通过CIC分级进行干眼症的诊断。通过CIC还可观察炎细胞的情况：正常眼CIC中很少见炎细胞，而在KCS患者CIC中炎细胞常出现，说明干眼的发病中伴有炎症。由于泪液中的IgA等免疫球蛋白具有抑制微生物的作用，干眼症的炎症可能由泪液减少、防御力降低所致[6]。已有研究表明T细胞介导的炎症反应可能是干眼病发生的核心机制[7-9]，这与本研究的推论相符。临床研究亦发现，局部抗炎药物治疗可以改善干眼患者的眼部不适症状，明显提高患者生活质量[10-11]。此外还应注意，眼部分泌物会干扰检查的准确性，导致出现假阳性。因此，在检查的过程中，如果发现患者分泌物较多，应先清理或冲洗结膜囊后，再进行检查操作。

综上所述，CIC检查安全、实用，可对KCS的早期诊断及疗效评估提供帮助，且操作简便，值得临床推广应用。

[1]黄林英,晏晓明,荣 蓓.不同浓度人血清滴眼液治疗重症干眼大鼠的实验研究[J].眼科,2010,19(3):174-178.

[2]吴 兵,杨 建,马 平.结膜印迹细胞学检查在干眼症诊断中的特异性研究[J].国际眼科杂志,2012,12(9):1788-1789.

[3]刘 妍.结膜印迹细胞学检查在干眼症诊断中的应用[J].国际眼科杂志,2010,10(8):1574-1576.

[4]Nelson JD.Impression cytology[J].Cornea,1988,17(1):71-81.

[5]黄冠南,王丽聪.结缔组织病患者干眼发病特点的临床研究[J].山西医科大学学报,2009,40(2):177-180.

[6]Stern ME,Schaumburg CS,Dana R,et al.Autoimmunity at the ocular surface:pathogenesis and regulation[J].Mucosal Immunol, 2010,3(5):425-442.

[7]Vakaloglou KM,Mavraqani CP.Activation of the typeⅠinterferon pathway in primary Sjögren's syndrome:an update[J].Curr Opin Rheumatol,2011,23(5):459-464.

[8]Stevenson W,Chauhan SK,Dana R.Dry eye disease:an immune-mediated ocular surface disorder[J].Arch Ophthalmol,2012, 130(1):90-100.

[9]Yoon KC,Ahn KY,Choi W,et al.Tear production and ocular surface changes in experimental dry eye after elimination of desiccating stress[J].Invest Opthalmol Vis,2011,52(10):7267-7273.

[10]Hoehn ME,Kelly SR,Wilson MW,et al.Cyclosporine 0.05%ophthalmic emulsion for the treatment of radiation-associated dry eye in children[J].Pediatr Blood Cancer,2013,doi:10.1002/pbc. 24461.

[11]Urzua CA,Vasquez DH,Huidobro A,et al.Randomized double-blind clinical trial of autologous serum versus artificial tears in dry eye syndrome[J].Curr Eye Res,2012,37(8):684-688.

Clinical study of conjunctival impression cytology for dry eye.

GUO Jian-jun,CHEN Ze-yun,TIAN Xue-wu, WANG Min.Department of Ophthalmology,the Hospital of Changping,Dongguan 523000,Guangdong,CHINA

ObjectiveTo evaluate the applicability of Conjunctival impression cytology(CIC)in the diagnosis of dry eye.MethodsA total of 180 patients with dry eye in our hospital from Jan.2011 to Jun.2013 were assigned into observation group and another 180 healthy physical examinees were selected as control group.Both groups were tested by CIC in addition to Schirmer Test(S-I-T),Tear Break-Up Time(BUT),and Corneal Fluorescein Staining(FLS).And then the results were compared.ResultsThere was a significantly difference in indexes of S-I-T,BUT,FLS and CIC between the observation group and the control group(P＜0.01).The number of goblet cells in the observation group was less than that in the control group(P＜0.01).Furthermore,the number of goblet cells of the mild,moderate and severe patients in the observation group were all less than those in the control group(P＜0.05 or P＜0.01).The controls were mostly graded to 0 or 1 revealed by CIC,while patients in the observation group were graded as 1,2 or 3 with the same method.In the observation group,mild and moderate patients were revealed to be grade 1 or grade 2,while severe patients were grade 3.There was a significant difference in CIC grade between the observation group and the control group(P＜0.01).The CIC Grades of mild,moderate,and severe patients in the observation group were all significantly different from those in the control group(P＜0.05 or P＜0.01).Conclusion CIC grading and goblet cell density can be used to distinguish dry eye patients and track the progression of dry eye as well.

Conjunctival impression cytology;Goblet cells;Clinical study

R777.34

A

1003—6350（2014）14—2072—03

10.3969/j.issn.1003-6350.2014.14.0804

2014-02-14)

东莞市科技（卫生）计划项目（编号：201110515035192）

郭建军。E-mail：1577590959@qq.com