双龙保心方对大鼠急性心肌梗死的影响

张金艳 ，李贻奎 ，黄 颖 ，赵 乐 ，伍 军 ，周劲松

(1．中国中医科学院西苑医院基础医学研究所·北京市中药药理重点实验室，北京 100091； 2．中国中医科学院医学实验中心，北京 100700； 3．广州市香雪制药股份有限公司，广东 广州 510663）

双龙保心方来源于临床经验方中的双龙方，双龙方由人参和丹参两味中药组方，丹参活血化瘀，人参补气养血，两者协同共奏益气活血之功效，主治胸痹（气虚血瘀型），适用于心绞痛和心肌梗死等冠状动脉粥样硬化性心脏病(简称冠心病)[1]。从20世纪80年代起，开始对原双龙方组方、配伍比例和提取工艺的优化进行研究[2－5]。经长期、大量对比精选，最终确定了仍由丹参和人参组方，采用最佳配伍比例和最佳制备工艺的双龙保心方，即原双龙方的精制方。本研究中通过试验验证双龙保心方对大鼠急性心肌梗死的治疗作用，并明确其药物配伍优势，为其后续的新药开发提供试验依据。

1 材料与方法

1．1 动物、试药及仪器

动物：健康 Wistar大鼠，雄性，体重 200～220 g，由北京华阜康科技股份有限公司提供，许可证编号为SCXK京2009－0007。

试药：双龙保心方，黄褐色粉末，每1 g折合人参和丹参生药共2．741 g，批号为201007003。盐酸地尔硫 （天津田边制药有限公司，批号为 1102006）；氯化硝基四氮唑蓝（N－BT，国药集团化学试剂有限公司，批号为F20050421）；水合氯醛（国药集团化学试剂有限公司，批号为 T20050609）；肌酸激酶（CK）试剂盒（中生北控生物科技股份有限公司，批号为 1107401），乳酸脱氢酶（LDH）试剂盒（中生北控生物科技股份有限公司，批号为100311），超氧化物歧化酶（SOD）试剂盒（南京建成生物工程研究所，批号为20110524）；丙二醛（MDA）试剂盒（南京建成生物工程研究所，批号为20110523）。

仪器：纷腾V7扫描仪（中晶科技）；DT－2000型电子天平（美国双杰兄弟有限公司）；MPIDS－500型多媒体彩色病理图像分析系统（北京空海公司）；RT－9600型半自动生化仪（雷杜生命科学股份有限公司）。

1．2 方法

动物模型制备：大鼠按10 mL／kg腹腔注射3．5%水合氯醛麻醉，仰卧固定。于大鼠左侧第4，5肋间切口，打开胸腔，撕开心包，轻压胸廓挤出心脏，用0号手术线于左心耳下2 mm处结扎冠状动脉左前降支，立即将心脏放回胸腔，关闭切口，缝合皮肤。假手术动物只穿线不结扎，其余操作均同模型动物。

分组及给药：造模成功大鼠，按体重分层随机分为6组，每组11～15只，即假手术组、模型组、盐酸地尔硫 8．1 mg／kg组、双龙保心方生药 5．0 g／kg组、双龙保心方生药2．5 g／kg组、双龙保心方生药 1．25 g／kg组。动物于造模后 10 min，按 10 mL／kg十二指肠一次性给药，假手术组和模型组给予等体积的蒸馏水。

指标检测：大鼠处死前腹主动脉取血2 mL，常温静置大约30 min，以3 000 r／m的速率常温离心 10 min，制得血清。按试剂盒说明书分别用半自动生化分析仪测定CK和LDH水平，用酶标仪测定并计算 MDA和SOD水平。造模后4 h，立即取出心脏，用生理盐水冲洗心腔残留的血液，用滤纸吸干多余液体后称重；自结扎线下平行冠状动脉沟均匀地将心室部分切成等厚5片，分别称重后置 0．2%硝基四氮唑蓝染液（N－BT）中，常温避光染色2～3 min；用扫描仪分别扫描5片心肌的正、反面，获得扫描图像，用多媒体彩色病理图像分析系统测量每片心肌双侧的梗死区（N－BT非染色区）和非梗死区（N－BT染色区）面积，计算心室肌总面积、梗死区总面积及梗死区面积占心室面积和全心面积的百分比。

1．3 统计学处理

2 结果

结果见表 1。可见，与假手术组比较，模型组血清 SOD和MDA无明显变化，血清CK和LDH水平有明显升高趋势，但差异无统计学意义；与模型组比较，双龙保心方高、中、低剂量组的血清LDH水平有明显降低趋势，但差异无统计学意义；各给药组血清CK，SOD，MDA水平与模型组比较，差异也无统计学意义。与假手术组比较，模型组心肌梗死面积显著增大（P＜0．01）；与模型组比较，地尔硫 组及双龙保心方高、中剂量组的心肌梗死面积显著降低（P ＜0．05）。

表1 双龙保心方对急性心肌梗死模型大鼠血清CK，LDH，SDD，MDA水平及心肌梗死面积的影响()

表1 双龙保心方对急性心肌梗死模型大鼠血清CK，LDH，SDD，MDA水平及心肌梗死面积的影响()

注：与模型对照组比较， P ＜0．05，△ P ＜0．01。

组别假手术组模型组盐酸地尔硫 组双龙保心方高剂量组双龙保心方中剂量组双龙保心方低剂量组剂量（生药，g ／kg）－ －0．008 1 5．0 2．5 1．25大鼠（只）14 16 14 13 11 11 CK（U ／L）529．8 ± 331．6 627．1 ± 335．8 674．8 ± 161．1 660．6 ± 241．2 770．0 ± 317．9 778．1 ± 183．5 LDH（U ／L）302．7 ± 126．1 746．5 ± 916．8 512．4 ± 157．1 528．5 ± 246．64 544．2 ± 172．7 495．8 ± 206．0 SOD（U ／L）169．1 ± 41．7 176．7 ± 41．0 157．8 ± 45．3 168．2 ± 44．1 150．5 ± 45．5 174．8 ± 42．2 MDA（ mol／L）30．76 ± 10．52 26．89 ± 5．50 29．72 ± 4．94 27．85 ± 5．70 31．04 ± 7．61 30．41 ± 3．24 μ心梗／心室(%)0．59 ± 0．72 25．93 ± 11．14 17．94 ± 9．37 13．98 ± 6．41 16．70 ± 10．70 20．06 ± 9．77△△△△心梗／全心(%)0．49 ± 0．58 19．07 ± 8．26 12．59 ± 6．68 10．67 ± 5．33 12．40 ± 8．32 14．14 ± 6．28

3 讨论

急性心肌梗死属“胸痹”“心痛”“真心病”等范畴。其发病机制正如《素问·痹论》所述：“心痹者，脉不通”“痹……在于脉则血凝而不流。”由于心主血脉，心气虚弱则无力鼓动心血之运行，致使血涩不通而成真心痛[6]。因此，益气活血以恢复心血运行为其主要治法[7－10]。双龙保心方中，丹参活血化瘀，人参补气养血，两者协同共奏益气活血之功效。本研究结果表明，双龙保心方对大鼠急性心肌梗死有显著保护作用，该结果进一步验证了益气活血疗法在治疗冠心病中的优势。

以往的研究认为，心肌细胞在缺血、缺氧和受损时，产生各种氧自由基，对细胞膜及生物大分子进行过氧化反应，破坏细胞膜正常结构，心肌细胞CK，LDH等心肌酶随着细胞膜的破坏漏出细胞外，膜脂质分子的过氧化物MDA大量产生，表现出血液中CK，LDH，MDA水平的升高；与此同时，心肌细胞抗氧化能力减弱，表现出清除氧自由基的SOD水平下降。而本研究结果却显示，所有受试组的血清CK，LDH，SOD，MDA水平与模型组比较，均无显著差异；即使是模型组与假手术组比较，也未能在上述血液学指标上反映出显著性差异。这是由于在试验过程中，假手术组也接受了开胸、断肋和心肌穿线操作，这些外科损伤可能同样导致了上述血液学指标的变化，而模型组和假手术组的区别仅在于冠脉结扎与否，该区别未能从上述血液指标上反映出来。故认为上述血液学指标只能间接反应心肌缺血和受损程度，其测定具有一定的局限性和不稳定性，而心肌梗死面积仍然是动物试验中反映心肌缺血程度最直观、最重要的指标。

参考文献：

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[2]蔡 青，李连达，刘建勋，等．川芎、人参、丹参配伍对犬急性实验性心肌缺血的影响[J]．中国药理学通报，1986，2(5)：38 －42．

[3]李连达，李贻奎，宁可永，等．双龙方对犬心脏血流动力学及心肌耗氧量的影响[J]．中药新药与临床药理，2003，14(6)：393 －395．

[4]梁晓萍，陈 曦，王义明，等．双龙方配伍配比对大鼠急性心肌缺血模型的影响[J]．中国中药杂志，2011，36(22)：3 176 － 3 179．

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[8]丁书文，李 晓．试论益气活血解毒是治疗冠心病的基本大法[J]．中华中医药杂志，2012，27(12):3 141 －3 143．

[9]张 雷，张庆翔，刘剑刚，等．益气活血法在冠心病治疗中的应用[J]．中西医结合心脑血管病杂志，2012，10(11):1 358－1 360．

[10]刘国彬．益气活血汤对急性心肌缺血模型大鼠治疗作用的实验研究[J]．海峡药学，2010，2(11):30 －33．