高效液相色谱法测定安神养血口服液中芒柄花素含量

（广西医科大学制药厂，广西 南宁530021）

安神养血口服液是由制何首乌、鸡血藤、首乌藤等7味中药经提取精制而成，具有养血安神功效，临床用于治疗肝血不足引起的失眠、健忘等症。方中的鸡血藤主要成分为芒柄花素，为强壮性之补血药，适用于贫血性神经麻痹症及妇女月经不调、经闭等，有活血镇痛之效[1]。方中鸡血藤与制何首乌同为补血养血之药，目前安神养血口服液质量标准缺乏对鸡血藤的质量控制。为完善和提高质量控制标准，本研究中建立了测定安神养血口服液中芒柄花素含量的高效液相色谱法。现报道如下。

1 仪器与试药

Waters515型高效液相色谱仪（美国Waters公司）；N2000型色谱工作站（浙江大学智能信息工程研究所）；BP211D型电子天平（北京赛多利斯仪器系统有限公司）；UV－2100型双光束紫外－可见分光光度计（北京瑞利分析仪器公司）。芒柄花素对照品（中国药品生物制品检定所，供含量测定用，批号111703－200501）；安神养血口服液（广西医科大学制药厂，批号分别为20100302，20110501，20120201，规格为每瓶30mL）；乙腈为色谱纯，甲醇为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱：Kromasil C18柱（250mm×4.6mm，5μm）；流动相为乙腈－水（45:55）；流速：1.0mL/min；检测波长：250nm；AUFS1.000；进样量：10μL；柱温：25℃。理论板数以芒柄花素计均不低于4000。

2.2 溶液制备

精密称取芒柄花素对照品7.08mg，加甲醇溶解定容至100mL，摇匀，得对照品贮备液（质量浓度为70.8μg/mL）。精密取对照品贮备液，加甲醇稀释制成含芒柄花素7.08μg/mL的对照品溶液。取安神养血口服液5mL，加70%甲醇定容至25mL，滤过，取滤液，即得供试品溶液。除鸡血藤外，按安神养血口服液的处方比例及制备工艺制成缺鸡血藤的阴性对照品，按供试品溶液制备方法操作，制得阴性对照品溶液。

2.3 方法学考察

系统适用性试验：取供试品溶液及对照品溶液，按拟订色谱条件进行色谱分析。结果芒柄花素出峰时间为6.76min，峰形尖锐、对称、陡峭，无杂质峰干扰，见图1。

线性关系考察：精密吸取芒柄花素对照品贮备溶液，制成含芒柄花素质量浓度分别为1.416，4.248，7.08，10.62，14.16μg/mL的系列标准溶液。分别进样10μL，按拟订色谱条件测定峰面积，以进样量（X）为横坐标、峰面积(Y)为纵坐标进行线性回归，得回归方程Y＝252423.2X＋516.6，r＝0.9999（n＝5）。结果表明，芒柄花素进样量在0.01416～0.1416μg范围内与峰面积呈良好线性关系。

精密度试验：精密吸取同一对照品溶液10μL，连续进样10次。结果的RSD为0.87%，表明仪器精密度良好。

重复性试验：精密取同一批（批号为20110501）样品5份，按拟订方法测定。结果芒柄花素的含量为5.0μg/mL，RSD为1.28%(n＝5)，表明方法重复性良好。

稳定性试验：精密吸取同一供试品溶液10μL，分别于0，6，12h时进样，测定其峰面积。结果的RSD为0.98%，表明供试品溶液在12h内稳定。

加样回收试验：精密取已知含量的样品（批号为20110501）5mL，分别精密加入对照品溶液（70.8μg/mL）各1mL，共5份，依法制备待测溶液，按拟订色谱条件测定含量，计算回收率。结果见表1。

2.4 样品含量测定

取样品3批，按拟订色谱条件操作，测定含量，结果批号为20100302，20110501，20120201的3批样品中芒柄花素含量分别为4.5，5.0，3.8μg/mL。

3 讨论

检测波长选择：取芒柄花素对照品溶液，于200～400nm波长范围内扫描，结果芒柄花素在250nm波长处有最大吸收，故选择检测波长为250nm[2－4]。

图1 高效液相色谱图

表1 芒柄花素加样回收试验结果（n＝5）

流动相选择：可选用甲醇与水的混合物或乙睛水作为流动相[2－4]。本试验发现，用适当比例的乙腈与水的混合物，更容易得到对称的峰形。从样品含量测定结果分析，3批样品的芒柄花素含量差别较大，可能与鸡血藤产地、采收季节及提取工艺有很大关系。文献[2－4]报道了鸡血藤中芒柄花素的不同提取方法，建议应用本试验所建立方法控制安神养血口服液的质量时，应对生产中的提取工艺作进一步的研究。

参考文献：

[1]江苏新医学院.中药大辞典（上册）[M].上海：上海人民出版社，1977：1206.

[2]钟小群，李 艳，王丽静，等.正交试验优选丰城鸡血藤的提取工艺研究[J].中草药，2009，40（7）：1066－1068.

[3]杨遁嘉，霍 昕，刘文炜，等.鸡血藤颗粒质量标准的研究[J].中成药，2009，31（1）：144－146.

[4]刘加元，周 伟.鸡血藤片质量控制研究[J].中外医疗，2011（15）：150－151.