Fascin在大肠癌中的表达及其与预后的关系

姚冬颖，张华英，许欣

(河北医科大学附属邢台市人民医院病理科，河北邢台054031)

Fascin在大肠癌中的表达及其与预后的关系

姚冬颖，张华英，许欣

(河北医科大学附属邢台市人民医院病理科，河北邢台054031)

目的探讨Fascin在大肠癌组织中的表达及临床意义。方法采用免疫组化Elivision法检测Fascin蛋白在130例大肠癌组织和30例大肠正常组织中的表达情况，分析其与临床病理特征的关系及对患者预后的影响。结果Fascin蛋白在大肠癌组织中的阳性率为54.6%，明显高于正常大肠组织中的阳性率(16.7%)。在大肠癌中，Fascin蛋白的表达与组织学分级、浆膜侵犯、淋巴结转移及临床分期有关(P＜0.05)，与患者的年龄、性别及肿瘤大小无关(P＞0.05)。多因素Cox回归分析显示：淋巴结转移、临床分期及Fascin蛋白表达为影响患者预后的独立危险因素(P＜0.05)。Kaplan-Meier生存曲线显示，Fascin蛋白的阳性表达组的生存时间低于阴性组(P＜0.05)。结论Fascin蛋白的表达上调可能促进大肠癌的侵袭转移，对评价大肠癌的生物学行为和预后具有一定的参考价值。

结直肠肿瘤；Fascin；免疫组织化学；预后

大肠癌是一种常见的恶性肿瘤，早期不易发现，侵袭和转移是导致大肠癌患者死亡主要因素。Fascin是一种细胞骨架蛋白，能与F-肌动蛋白结合，加强细胞的运动能力，在细胞迁移、细胞粘附以及细胞间信息交流等过程中发挥作用[1]。本研究试图通过检测大肠癌中Fascin蛋白的表达情况，探讨其在肿瘤侵袭和转移中的作用，分析其与患者预后的关系，希望为临床治疗和预后判断提供新的参考指标。

1 材料与方法

1.1 一般资料选取我院2006年1月至2008年2月期间130例大肠癌石蜡组织标本，均有完整的临床和病理资料，患者术前均未接受过任何抗肿瘤治疗。男性70例，女性60例；年龄37～83岁，中位年龄56岁；肿瘤直径小于4 cm者51例，大于4cm者79例；组织学分级高-中分化77例，低分化53例；未侵及浆膜39例，侵及浆膜91例；淋巴结无转移82例，淋巴结转移48例；Dukes分期A+B期72例，C+D期48例。取30例大肠正常组织作为对照(距肿瘤5 cm以上)。所有标本均采用常规取材，福尔马林液固定，石蜡包埋。

1.2 方法免疫组织化学采用Elivision两步法，鼠抗人Fascin单克隆抗体及Elivision免疫组化试剂盒购于福州迈新生物技术有限公司，磷酸盐缓冲液(PBS)及APES防脱片剂购自北京中杉金桥生物技术有限公司。主要步骤：4 μm厚连续切片，常规脱蜡至水，柠檬酸盐缓冲液高温修复，3%H2O2溶液阻断内源性过氧化物酶活性，PBS漂洗3×5 min，滴加一抗，湿盒内4℃过夜，PBS漂洗3×5 min，滴加聚合物增强剂，滴加酶标抗鼠/兔聚合物，3，3-二氨基联笨胺DAB显色，苏木精衬染，盐酸酒精分化，梯度酒精脱水、二甲苯透明、中性树胶封片。用PBS代替一抗作为空白阴性对照，试剂公司提供的阳性切片作为阳性对照。

1.3 结果判定采用双盲阅片，随机计数5个高倍视野，共计数1 000个瘤细胞，先按染色强度评分：0分为无色，1分为淡黄色，2分为棕黄色，3分为棕褐色，再按细胞百分比评分：1分为阳性细胞＜25%，2分为阳性细胞25%～50%，3分为阳性细胞51%～75%，4分为阳性细胞＞75%，最后将两者相乘：0～3分为阴性，4分以上为阳性[2]。

1.4 随访通过电话或信件对患者进行随访获取生存或死亡信息，随访截止日期为2013年4月，生存时间的计算从手术日期到随访截止日期，或由于复发、转移而死亡的日期为止。本组患者死亡91例，截尾39例，生存时间为22～80个月。

1.5 统计学方法应用SPSS19.0软件进行分析，组间表达率的比较采用χ2检验，Kaplan-Meier法绘制生存曲线，组间比较用Log-rank检验，多因素Cox模型进行回归分析，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 大肠癌组织和正常大肠组织中Fascin蛋白的表达Fascin蛋白在大肠癌中主要表达于细胞质，少量表达于细胞膜(见图1)，在大肠正常组织中仅少量微弱表达于细胞质(见图2)。Fascin蛋白在130例大肠癌组织中有71例呈阳性表达，阳性表达率为54.6%，30例大肠正常组织中仅5例呈阳性表达，阳性表达率为16.7%，组间差异有统计学意义(χ2=14.076，P＜0.01)。

图1 大肠癌组织中Fascin蛋白呈阳性表达（IHC 200×）

图2 大肠正常组织中Fascin蛋白呈阴性表达（IHC 200×）

2.2 大肠癌组织中Fascin蛋白的表达与临床病理特征的关系Fascin蛋白的表达与组织学分级、浆膜侵犯、淋巴结转移、Dukes分期有相关性，低分化组高于高中分化组，侵及浆膜组高于未侵及浆膜组，有淋巴结转移组高于无淋巴结转移组，Dukes分期为C+ D期组高于A+B期组，差异均有统计学意义(P＜0.05)。Fascin蛋白的表达与患者的年龄、性别和肿瘤大小无明显相关性(P＞0.05)，见表1。

表1 大肠癌Fascin的表达与临床病理特征的关系（例）

2.3 大肠癌临床病理特征与患者生存时间的关系用Kaplan-Meier法经Log-rank检验行单因素分析显示，组织学分级(χ2=21.276，P＜0.05)、浆膜侵犯(χ2=12.842，P＜0.05)、淋巴结转移(χ2=32.196，P＜0.01)、Dukes分期(χ2=38.783，P＜0.05)和Fascin的表达情况(χ2=35.538，P＜0.05)与大肠癌患者的生存时间有关。

2.4 影响患者生存时间的多因素Cox分析将经单因素分析出的的各个因素进行Cox多因素分析，结果显示淋巴结转移、Dukes分期及Fascin的表达(P＜0.05)为影响患者生存时间的独立危险因素，见表2。

表2 多因素Cox回归分析结果

2.5 大肠癌组织中Fascin蛋白的表达与生存时间的关系Fascin蛋白的阳性表达组的五年生存率为32.4%(23/71)，阴性表达组的五年生存率为69.5% (41/59)，差异有统计学意义。绘制Kaplan-Meier生存曲线，Fascin蛋白的阳性表达组的中位生存时间为42个月，阴性表达组的中位生存时间为71个月。经Log-rank检验发现，Fascin蛋白的阳性表达组生存期显著低于阴性组(P＜0.05)，见图3。

图3 大肠癌患者的生存曲线

3 讨论

侵袭、转移行为是恶性肿瘤的重要致死原因。肿瘤浸润包括粘附、溶解和移动等过程。肿瘤细胞需经历从原发灶破裂脱落、细胞粘附并穿过基底膜、细胞向远处移动进入周围组织或进入血液循环及淋巴系统[3]。

人类Fascin基因是定位于染色体7q22，编码一种分子量为55 kDa的细胞骨架蛋白，又称为聚束蛋白，定位于细胞质张力纤维和细胞膜皱褶边缘的丝状伪足、微棘的核心肌动蛋白束中，细胞的丝状伪足和微棘与细胞的运动、癌细胞的转移有密切关系[4-5]。Fascin蛋白可以增多细胞膜表面突起，改变细胞骨架、细胞与细胞外基质的粘附，降低细胞间联系的完整性，以及通过细胞信号转导通路等途径加快细胞的迁移，促进肿瘤细胞的侵袭转移[7]。近年来的研究发现，Fascin蛋白在不同类型的细胞中表达不一样，在正常上皮细胞中不表达或低表达，在多种恶性肿瘤中高表达，与肿瘤的浸润转移密切相关，且影响预后[7]。Takikita等[8]研究发现，Fascin在食管正常组织、异常增生组织和鳞状细胞癌组织中的表达率分别为26%、46%、48%，呈逐渐升高的趋势，说明其过表达在食管癌的恶性进程中可能发挥作用。Kim等[9]研究了胃癌的组织标本，结果Fascin在肿瘤组织分化低、有局部浸润和远处淋巴结转移的病例中表达更高，且患者的术后生存时间更短，说明Fascin的表达情况可用于判断患者的预后。

本实验结果显示，Fascin蛋白在大肠癌组织中的表达明显高于其在大肠正常组织中的表达，提示Fascin蛋白的表达可能促进了大肠癌的发生。本研究还表明，Fascin蛋白的表达情况与肿瘤恶性程度相关指标如组织学分级、浆膜侵犯、淋巴结转移、临床分期有关，在低分化组的表达高于高中分化组、有浆膜浸润组的表达高于无浆膜浸润组，有淋巴结转移组高于无淋巴结转移组，Dukes C+D期高于Dukes A+B期，提示Fascin蛋白的表达在大肠癌的局部浸润和远处转移过程中发挥了促进作用。推测Fascin蛋白可能参与了大肠癌的恶性转化进程，改变了大肠癌细胞骨架结构，提高了其运动能力，使之具有更高的侵袭性和转移倾向。对患者进行随访获取生存时间，Cox分析显示淋巴结转移、Dukes分期及Fascin的表达为影响大肠癌患者预后的独立危险因素。Kaplan-Meier生存曲线显示Fascin蛋白的阳性表达组生存时间显著低于阴性组。这一结果与Jung等[10]的研究一致。因此，检测Fascin对于判断肿瘤的恶性程度和评估患者预后具有重要的参考价值。

总之，本实验结果提示Fascin的高表达可能在大肠癌的发生发展和浸润转移中发挥作用，进一步研究Fascin在大肠癌中的作用机制，有望为肿瘤的基因治疗开辟新的途径。

参考资料：

[1]Hashimoto Y,Kim DJ,Adams JC.The roles of fascins in health and disease[J].J Pathol,2011,224(3):289-300.

[2]许良中,杨文涛.免疫组织化学反应结果的判断标准[J].中国癌症杂志,1996,6(4):229-231.

[3]Alam H,Bhate AV,Gangadaran P,et al.Fascin overexpression promotes neoplastic progression in oral squamous cell carcinoma[J]. BMC Cancer,2012,12:32.

[4]Ono S,Yamakita Y,Yamashiro S,et al.Identification of an actin binding region and a protein kinase C phosphorylation site on human fascin[J].J Biol Chem,1997,272(4):2527-2533.

[5]Adams JC,Clelland JD,Collett GD.Cell-matrix adhesions differentially regulate fascin phosphorylation[J].Mol Biol Cell,1999,10 (12):4177-4190.

[6]张宁,沈洋.Fascin蛋白在肿瘤中的研究现状和进展[J].现代中西医结合杂志,2011,20(21):2723-2725.

[7]Machesky LM,Li A.Fascin:invasive filopodia prmomting metastasis[J].Commun Integr Biol,2010,3(3):263-270.

[8]Takikita M,Hu N,Shou JZ,et al.Fascin and CK4 as biomarkers for esophageal squamous cell carcinoma[J].Anticancer Res,2011,31 (3):945-952.

[9]Kim SJ,Kim DC,Kim MC,et al.Fascin expression is related to poor survival in gastric cancer[J].Pathol Int,2012,62(12): 777-784.

[10]Jung EJ,Lee JH,Min BW,et al.Clinicopathologic significance of fascin,extracellular matrix metalloproteinase inducer,and ezrin expressions in colorectal adenocarcinoma[J].Indian J Pathol Microbiol,2011,54(1):32-36.

Expression of Fascin in colorectal carcinoma and its correlation with prognosis.

YAO Dong-ying,ZHANG Hua-ying,XU Xin.Department of Pathology,Xingtai People's Hospital Affiliated to Hebei Medical University,Xingtai 054031,Hebei,CHINA

ObjectiveTo investigate the expression and clinical significance of Fascin in colorectal carcinoma.MethodsWith Elivision immunohistochemistry,the expression of Fascin was detected in 130 patients of colorectal carcinoma and 30 patients of normal tissue.Its clinicopathological characteristics and prognostic significance was analyzed.ResultsThe positive expression rate of Fascin was 54.6%in colorectal carcinoma,which was significantly higher than that 16.7%in normal tissus.In colorectal carcinoma,the expression of Fascin was correlated with degree of differentiation,serosal invasion,lymph node metastasis and dukes stage,and irrelevant with age,gender,size of tumor.Multivariate Cox regression analysis showed that lymph node metastasis,dukes stage and Fascin over expression were independent risk factors affecting the prognosis of patients.The plotted survival curves by the Kaplan-Meier method demonstrated that overall survival was significantly shorter in patients with high expression than in patients with low expression of Fascin protein.ConclusionThe expression of Fascin may ultimately promote tumor invasion and metastasis of colorectal carcinoma.It can be used as important parameters for judgement of biological behavior and prognosis.

Colorectal neoplasms;Fascin；Immunohistochemistry;Prognosis

R735

A

1003—6350（2014）20—3089—03

10.3969/j.issn.1003-6350.2014.20.1212

2014-03-03)

姚冬颖。E-mail：yaodongying11@126.com