磷酸三丁酯萃取-石墨炉原子吸收分光光度法测定海藻多糖空心胶囊中痕量六价铬

张 毅，郭盈杉

（河北省食品药品检验院，河北 石家庄 050011）

不同价态的铬有不同的生物效应，三价铬（Cr3+）是人体必需 的微量元素，而六价铬（Cr6+）则被确认为有致癌作用。样品中Cr3+和Cr6+常用的测定方法有直接分光光度法[1]、利用离子缔合物的共振散射和二级散射直接测定[2]、吸附分离-分光光度法[3-4]、原子光谱法[5]。本试验中，对海藻多糖空心胶囊中存在的痕量Cr6+萃取分离后，使用石墨炉原子吸收光谱法测定，消除了其他价态铬元素和其他元素的干扰，方法简便、灵敏度高，适用于海藻多糖空心胶囊中存在的痕量Cr6+的检测。

1 仪器和试药

原子吸收分光光度计（日本岛津 AA-6300，GFA-EX7i石墨炉原子化器）；日本岛津热解涂层石墨管；滨松铬元素空心阴极灯。硝酸（德国默克公司，优级纯，65%）；六价铬单元素标准溶液（国家有色金属及电子材料分析测试中心，GSB 04-1723-2004，1 000μg/mL）；磷酸二氢铵（国药集团化学试剂有限公司，优级纯）；水为纯化水；基体改进剂为2%磷酸二氢铵溶液。所有玻璃及聚四氟乙烯仪器，均以硝酸溶液（20%）浸泡24 h以上，用纯化水反复冲洗，晾干。

2 方法与结果

2.1 样品处理与溶液制备

取样品0.5 g，置 100mL离心管中，精密加水 50mL，置 60℃水浴中时时振摇使溶解，放冷，精密加盐酸1 mL，摇匀，再精密加入磷酸三丁酯（TBP）5 mL，密塞，强力振摇 2 min，3 000 r/min 离心10 min，精密量取上清液1 mL，置聚四氟乙烯消解罐中，加硝酸 10 mL，180℃预消解 30 min[6]，放冷，补加硝酸 5 mL，密塞，微波消解完全后，放冷，180℃蒸至近干，用水转移至10 mL容量瓶中，并用水稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。取不含六价铬的空白样品0.5 g，置100 mL离心管中，精密加水50 mL，照供试品溶液制备方法处理，制备空白基质溶液。取六价铬单元素标准溶液，用水制成含铬 0，5，10，20，40 ng /mL 的溶液，精密量取 50mL，照供试品溶液制备方法处理，制备对照品溶液。

2.2 测定条件

进样量:4μL；加基体改进剂2μL，注入石墨管，检测波长为357.9 nm（见图 1）；灯电流:4.0 mA；狭缝:0.5 nm；峰高定量，氘灯扣背景，石墨炉升温程序见表1。

图1 最大吸收波长

表1 石墨炉原子吸收测定铬的升温程序

2.3 方法学考察

专属性试验:取不含六价铬的空白样品3份，每份0.5 g，分别置100 mL离心管中，精密加合成试样（含 Cr6+20 ng/mL，Cr3+1 000 ng/mL，Na+1 000 ng/mL，K+1 000 ng/mL，Ca2+1 000 ng/mL，Mg2+1 000 ng/mL，Al3+1000 ng/mL，Zn2+1 000 ng/mL，Fe3+1 000 ng/mL的 0.2 mol/L盐酸溶液）50 mL，照 2.1项下供试品溶液制备方法处理。按拟订的测定条件测定，结果样品本底质量浓度未检出，加入六价铬质量浓度为20 ng/mL，测得六价铬平均质量浓度为17.868 7 ng /mL，回收率为 89.3% 。

稳定性试验:取六价铬单元素标准溶液，用水制成含铬20 ng/mL的溶液，精密量取50 mL，置100 mL离心管中，依法制备对照品稳定性试验溶液，室温放置 1，2，4，6，8 h，注入石墨管，结果响应值的 RSD为 2.7%（n＝5）。另取不含六价铬的空白样品0.5g，置100 mL离心管中，精密加六价铬单元素标准溶液（1 000 ng /mL）1.0 mL，精密加水至 50 mL，依法制备稳定性试验供试品溶液，室温放置 1，2，4，6，8 h，注入石墨管，结果响应值的RSD 为 3.6% （n＝5）。

线性关系考察:参照2010年版《中国药典（二部）》[6]明胶空心胶囊总铬的限度，按拟订的方法测定，以吸光度对质量浓度绘制标准曲线，得线性回归方程 A＝0.015 435C+0.000 4，r＝0.999 7（n ＝6）。结果表明，六价铬最佳检测质量浓度线性范围为0～40 ng/mL。

最低检测限确定:取空白基质溶液，连续测定11次。结果的RSD ＝0.001 7% ，当信噪比(S/N)≥3 时，检测限为 0.33 ng/mL（0.033 mg /kg）。

精密度试验:取六价铬单元素标准溶液，用水制成含铬20 ng/mL的溶液，精密量取50mL，置100mL离心管中，依法制备精密度试验溶液，连续进样6次。结果响应值的 RSD为1.3%（n＝6）。

加样回收试验:取不含六价铬的空白样品9份，每份0.5 g，分置100mL离心管中，精密加六价铬单元素标准溶液（1 000 ng/mL）0.8，1.0，1.2 mL，各 3 份，分别精密加水至 50 mL，照供试品溶液制备方法制备回收率试验溶液，进样测定，计算回收率。结果见表2。

表2 六价铬加样回收试验结果（n＝9）

2.4 样品检测

取各批号样品，分别按2.1项下方法制备供试品溶液，按2.2项下条件测定，结果及参照2010年版《中国药典（二部）》明胶空心胶囊铬检查方法测得的总铬量对比见表3。

3 讨论

Cr2O72-可与 TBP和Cl-形成Cr6+-TBP-Cl-溶剂化合物，故选用盐酸提供酸性环境[7]。至于5 mL的磷酸三丁酯，加入15mL硝酸微波消解能充分破坏有机物，剩余的硝酸经赶酸处理至近干，可有效减少酸效应，结果重复性良好。加入2%磷酸二氢铵溶液作为基体改进剂，可以提高灰化温度，减少背景干扰，增加信号的稳定性。

表3 样品检测结果

参考文献:

[1]薛 斌，李月华，白晓琳，等.可见分光光度法对水样中痕量Cr（Ⅲ）和Cr（Ⅵ）的同时测定[J].沈阳工业大学学报，2004，26（1）:117-120.

[2]申金山，李献锐.罗丹明B-I-3离子缔合物共振散射测定环境水样中的铬（Ⅲ）和铬（Ⅵ） [J].分析化学，2001，29（8）:944-946.

[3]刘海玲，刘树深，陈英淼.聚酰胺富集分离环境水中铬铬（Ⅲ）和铬（Ⅵ） [J].分析化学，1998，26（8）:963-967.

[4]余建新，曾汉口.出口手套皮革中水溶性六价铬含量的测定 [J].分析测试学报，1998，17（8）:59-61.

[5]Sperling M，Xu SK，Kelz B.Determination of chromium（Ⅲ）and chromium（Ⅵ）in water using flow injection on line perconcentration with selective absoption on activated alumina and flame atomic absorption spectrometric detection[J].Anal Chem，1992，64:3 101-3 108.

[6]雷 庆，林琪宇，陈建平.微波两步消解-石墨炉原子吸收光谱法快速检测明胶空心胶囊中的铬[J].2013，22（19）:46-47.

[7]国家药典委员会.中国人民共和国药典（二部）[M].北京:中国医药科技出版社，2010:1 204.