高效液相色谱-蒸发光散射检测器法测定人参健脾丸中黄芪甲苷含量

2014-05-02吕紫璇张传平

中国药业 2014年22期

陈健,胡幸,吕紫璇,张传平

（重庆市涪陵食品药品检验所,重庆 408000）

人参健脾丸主要由人参、白术、茯苓、山药、陈皮、木香、炙黄芪等11味中药组方,具有健脾益气、和胃止泻的功效。方中黄芪是补气的主药,而黄芪甲苷是其主要成分,原标准无黄芪甲苷的含量测定,不能有效控制产品质量。笔者采用高效液相色谱-蒸发光散射检测器（HPLC-ESLD）法对人参健脾丸中黄芪甲苷的含量进行了测定[1-3],方法简单、准确、重复性好,可用于产品的质量控制。

1 仪器与试药

岛津LC-20A型高效液相色谱仪；岛津ELSD-LTⅡ型蒸发光散射检测器；Sartorius-ME235S型电子天平。黄芪甲苷对照品（中国食品药品检定研究院,批号为 110781-200613,含量100.00%）；人参健脾丸（云南腾冲制药股份有限公司,批号分别为 20130403,20130503,20130401）；甲醇为色谱纯,水为超纯水,其余试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱:AgilentEclipse XDBC18柱（250mm ×4.6mm,5μm）；流动相:甲醇-水（75∶25）；流速:1.0mL/min；柱温:30 ℃；ELSD 检测条件:漂移管温度40℃,增益4；进样量:20μL。

2.2 溶液制备

称取黄芪甲苷对照品14.65 mg,精密称定,置50 mL容量瓶中,加甲醇适量,振摇使溶解并稀释至刻度,摇匀,即得对照品溶液。取本品研细的内容物约10 g,精密称定,置索氏提取器中,加甲醇100 mL,冷浸过夜,加热回流4 h,提取液回收溶剂并浓缩至干,残渣加水10 mL,微热使溶解,用水饱和的正丁醇振摇提取4次,每次30 mL,合并提取液,用氨试液充分洗涤2次,每次30 mL,弃去氨液,正丁醇液蒸干,残渣加甲醇溶解,转移至5mL容量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀,滤过,取续滤液,即得供试品溶液。按人参健脾丸制备工艺,制备缺黄芪的阴性样品,照供试品溶液的制备方法制成阴性对照品溶液。

2.3 方法学考察

系统适用性试验:取2.2项下3种溶液,按拟订色谱条件进样测定。结果供试品溶液色谱中,黄芪甲苷与其他成分色谱峰能完全分离,阴性样品对测定无干扰,见图1。

线性关系考察:精密吸取对照品溶液 5,10,15,20,25 μL,按拟订色谱条件分别注入液相色谱仪,以黄芪甲苷对照品进样量的自然对数值为横坐标（X）、黄芪甲苷峰面积的自然对数值为纵坐标（Y）进行线性回归,得回归方程 Y=0.4430X＋2.5944,r=0.9995（n=5）。结果表明,黄芪甲苷进样量在 1.465～7.325 μg范围内与峰面积线性关系良好。

精密度试验:精密吸取同一对照品溶液,分别取10,20μL,按拟订色谱条件重复进样6次。结果的 RSD为0.48%（n=6）,表明仪器精密度良好。

重复性试验:精密取同一批（批号为20130403）样品,依法制备6份供试品溶液并进样测定。结果黄芪甲苷峰面积的 RSD为0.22% （n=6）,表明方法重复性良好。