高效液相色谱荧光法测定辣椒酱中的罗丹明B

刘谦 白帆 刘丽丽

摘要[目的]建立辣椒酱中罗丹明B的高效液相色谱荧光检测法。[方法] 将样品中的罗丹明B用一定比例的丙酮和正己烷提取，经过氧化铝固相萃取柱净化浓缩后，用液相色谱荧光检测器检测其含量。[结果]试验得出，罗丹明B在0.005 ～0.050 mg/kg 浓度范围内，线性关系良好，相关系数为0.999；方法的定量检测限为0.005 mg/kg，平均回收率高。[结论]该试验建立的方法快速、准确、灵敏度高，适用于辣椒酱中罗丹明B的测定。

关键词液相色谱；荧光检测法；罗丹明B

中图分类号O657.7+2文献标识码A文章编号0517-6611（2014）01-00248-02

作者简介刘谦（1980- ），女，河北保定人，工程师，硕士，从事食品的检测研究，Email：chemliuq@163.com。

收稿日期20131129罗丹明B，俗称“花粉红”，又称玫瑰红B或碱性玫瑰精， 是一种人工合成的具有鲜桃红色的染料，分子式为C28H31ClN2O3，分子量为479.017 5，化学结构式如图1所示。罗丹明B常温下为绿色结晶或红紫色粉末，易溶于水、甲醇及乙醇，微溶于丙酮、氯仿、盐酸和氢氧化钠溶液。由于罗丹明B 在溶液中荧光现象比较强烈，在实验室中细胞荧光染色剂、有机玻璃和特色烟花爆竹、环境保护、钢铁生产、矿石生产等行业中得到了比较广泛的应用[1-4]。

图1罗丹明B化学结构式罗丹明B曾经被用做食品添加剂，但也有研究结果表明[5-6]，罗丹明B有致癌性， 同时其可能造成人皮肤及内脏红染、心肌纤维断裂、横纹模糊和肺水肿等，该物质的摄取、吸入及皮肤接触均会造成急性和慢性中毒伤害。但罗丹明B 具有价格低廉的特点，脂溶性良好，比其他水溶性染料如诱惑红、赤鲜红和柠檬黄等更易于在辣椒及制品上染色且不易褪色，一些不法企业及商贩用罗丹明B 作为食用色素对辣椒及其制品进行染色，以次充好。我国将罗丹明B列入《食品中可能违法添加的非食用物质名单（第一批）》进行重点监督，欧盟等国家也都不允许其在食品中使用。笔者采用液相色谱荧光检测法测定辣椒酱中的罗丹明B，前处理采用有机溶剂提取，氧化铝固相萃取柱净化，得到辣椒酱中罗丹明B快速、准确、灵敏度高的检测方法。

1材料与方法

1.1材料辣椒酱，市售。主要仪器：高效液相色谱仪，配荧光检测器；固相萃取装置；1/1000天平；旋转蒸发仪；漩涡混合器。主要试剂：甲醇、丙酮、正己烷，均为色谱纯；水为去离子水；罗丹明B标准品、氧化铝萃取柱（1 000 mg/3 ml），上海安谱试剂公司。

1.2样品的处理取辣椒酱样品称取2.00 g置于100 ml具塞离心管中，加入20 ml 20%丙酮的正己烷液，振荡100 min，上层提取液慢慢加入氧化铝层析柱中，用10 ml 20%丙酮的正己烷液洗涤残渣，上层提取液慢慢加入氧化铝层析柱中，柱中保持液面为2 mm左右时上样，流速1滴/s；待样液完全流出后，用15 ml 20%丙酮的正己烷液洗柱，直至流出液颜色变浅，弃去全部淋洗液，用90%甲醇溶液洗脱，收集洗脱液于10 ml容量瓶中，用0.45 μm针桶滤器过滤供LC测定。

1.3标准曲线的制备取空白样品，经“1.2”处理后制备空白基质溶液，配制罗丹明B标准溶液，浓度为1.0、2.0、5.0、8.0、10.0 ng/ml。

1.4色谱条件色谱柱： C18 4.6 mm×250 mm，不锈钢柱；流动相：A泵甲醇B泵水（70∶30）；流速：1.0 ml/min；进样量：10 μl；检测器：荧光检测器，激发波长（Ex）550 nm，发射波长（Em）580 nm；柱温：35 ℃。

2结果与分析

标准品特征离子谱图在上述仪器条件下，9.5 min出峰且峰形尖锐而对称，测试结果见图1，空白样品对照见图2。

2.2样品的提取和纯化由于辣椒本身就含有比较多的油分，过固相萃取小柱时容易出现堵塞柱子的情况。SN/T2430-2010中提到需要使用凝胶色谱进行前处理，由于GPC的采集时间长，如果想提高净化效果，就会牺牲采集时间，降低目标物的回收率，否则就不能完全除去样品中的油脂和颗粒，会堵塞萃取柱；GPC的有机试剂用量大，既提高了检测成本，也在一定程度上造成了环境污染。该试验中采用丙酮和正己烷作为提取溶剂，效果比较好。

2.3流动相的选择试验分别对比了不同体积比的乙腈-水、甲醇-水作为流动相，结果发现，乙腈-水做流动相时，色谱峰比较宽，有时会有拖尾的现象；甲醇-水作为流动相时，干扰峰与目标物可以完全分离，出峰峰型好，灵敏度高。罗丹明B是碱性染料，pH对其灵敏度也有一定的影响。试验中发现，在流动相中加入0.1%的甲酸，对出峰效果和回收结果有很大的提高。

3结论

研究通过高效液相色谱荧光检测法测定辣椒酱中罗丹明B含量，结果表明， 该方法具有前处理简单快速、灵敏度高、准确性好、可操作性强的特点， 适合大批次样品的罗丹明B含量的检测， 具有良好的应用前景。

参考文献

[1] 王勇，武娜.高效液相色谱-紫外光检测法测定食品中罗丹明B 的含量[J].安徽农业科学，2012，40（15）：8723-8725.

[2] 张贞理，张平，申大忠.超高效液相色谱-串联质谱法同时测定水产调味品中的罗丹明B、结晶紫和孔雀石绿[J].分析化学，2012，40（3）：487-488.

[3] 龙四红，熊瑛. 高效液相色谱- 串联质谱法测定油辣椒中罗丹明B[J].贵州化工，2012，37（4）：30-32.

[4] 占立明，夏爱萍，张旭，等.高效液相色谱法测定辣椒粉中罗丹明B 的含量[J].食品工程，2012（12）：17-19.

[5] 杨仁惠，胡立立，许乾丽.高效液相色谱荧光检测法测定辣椒制品中罗丹明B 的含量[J].现代医药卫生，2013，29（4）：481-485.