HPLC测定牛蒡降压片中牛蒡苷的含量

曹坤 姚丽娜

【摘要】目的 建立测定牛蒡降压片中牛蒡苷含量的测定方法。方法 色谱柱为Inertsil C18柱，以甲醇：水（40：60，V/V）作为流动相，流速为1.0ml.min-1，检测波长为280nm。结果 牛蒡苷在0. 5～5.0?g范围内呈良好的线性关系，平均回收率为101.5%，RSD=0.7%（n=6）。结论 建立的方法灵敏、准确、专属性强，可用于松脂醇二葡萄糖苷的测定。

【关键词】HPLC；牛蒡苷；牛蒡子

牛蒡降压片是由牛蒡子提取物、牛膝提取物等组成的具有辅助降血压功能的保健食品，本品配方中牛蒡子提取物主要含有木脂素类成分，其中以牛蒡苷为主要成分，牛蒡苷具有钙拮抗、扩张血管的作用，从而起到降血压的效果，故我们选择牛蒡苷作为本品功效成分指标之一。本文采用高效液相色谱法测定牛蒡降压片中牛蒡苷含量，简便、快速，准确度高，稳定性及重现性好。

1 仪器与试药

Waters高效液相色谱仪，Waters515泵，Waters2487检测器；超声波振荡器；牛蒡苷对照品：中国生物制品检定所；牛蒡降压片（哈药集团制药六厂，批号：20130118-1，20130118-2，20130118-3）；甲醇为色谱纯；水为纯化水；其他试剂试药均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 色谱柱：Inertsil C18柱（150mm×4.6mm，5?m）；流动相：甲醇：水=40：60；流速：1.0mL/min；检测波长：280nm；进样量：5μL；理论板数：按牛蒡苷峰计算应不低于1500。

2.2 对照品溶液制备 精密称取约12.5mg牛蒡苷对照品于25mL容量瓶中，用甲醇超声使溶解，稀释并定容至刻度即得。

2.3 供试品溶液制备 取本品10片，研细，混匀。精密称取0.5g，置25mL容量瓶中，加甲醇适量，超声20min，放冷，用甲醇定容至刻度，过滤即得。

2.4 专属性试验 按本品配方（不含牛蒡子提取物）工艺制备阴性样品，按2.3项方法处理即得阴性样品溶液，取阴性样品溶液5?l，注入液相色谱仪，按上述色谱条件测定，记录色谱图。在此条件下，阴性样品对牛蒡苷的测定无干扰。

2.5 线性关系考察 精密称取牛蒡苷对照品适量，加甲醇溶解制成0.4mg/ml的标准储备溶液，分别精密吸取该储备液1、3、5、8、10ml于10ml量瓶中，加甲醇稀释并定容至刻度，分别进样5?l，记录色谱图。 以牛蒡苷峰面积积分值为横坐标（Y），以牛蒡苷对照品进样量（?g）为纵坐标（X）绘制标准曲线，回归方程为：Y（C）=（3.858758e-004）X（A）-1.423225e-003，r=0.9999。结果表明，牛蒡苷在0.5～5.0?g范围内，具有良好的线性关系。

2.6 精密度试验 精密吸取同一供试品溶液5?l，注入高效液相色谱仪，重复进样6次，测定牛蒡苷峰面积，结果RSD为0.4%。

2.7 稳定性试验 依2.3制备供试品溶液，分别于0、1.5、2.0 、3.0、6.0小时测定，记录色谱峰面积，RSD为1.8%。结果表明，供试品溶液在6小时内稳定。

2.8 重复性试验 依2.2和2.3分别制备对照品溶液和供试品溶液（n=6），分别进样5?l，记录色谱图，计算100g样品中所含的牛蒡苷质量，RSD为1.3%。结果表明：本法精密度良好。

2.9 加样回收率试验 称取已知含量的样品适量（共6份），分别置于6支25ml容量瓶中，分別精密加入牛蒡苷对照品适量，按2.3的方法制备供试品溶液，分别进样5?l，记录色谱图。结果牛蒡苷的平均加样回收率为101.5%，RSD=0.7%。线果表明：本方法回收率良好。

3 样品测定 取3批牛蒡降压片，按2.3项方法制备供试品溶液，并按上述色谱条件进样测定峰面积，按外标法计算样品的含量。三批样品测定结果分别为2.280g/100g、20333g/100g、2.220g/100g。

4 讨论

4.1 流动相的选择 《中华人民共和国药典》2010年版一部牛蒡子中牛蒡苷含量测定色谱条件中的流动相为甲醇-水（1：1.1），按此流动相对本品进行检测，无法将牛蒡苷与其它组分有效分离。而将流动相比例调整为甲醇-水（40：60）时，主峰与其它组分获得较好分离，且出峰时间适宜，故以甲醇-水（40：60）作为测定本品的流动相。

4.2 本法操作简便，分离良好，可作为本品的质量控制方法。

参考文献

[1]《中华人民共和国药典》2010年版一部