自身抗体检测的质量控制和检验程序分析

李善姬

【摘要】自身抗体检测时对自身免疫性疾病进行检测的方法，由于自身组织在发生机体、自身抗原免疫反应而导致的疾病则被称为自身免疫性疾病（AID），主要是采取免疫印迹法、间接免疫荧光法、酶联免疫吸附法等多种检测方法，对抗嗜中性粒细胞胞浆抗体（ANCA）、抗可提取性核抗原体（ENA）、抗核抗体（ANA）等项目进行检测。本文对检测的质量控制、检验程序分析等进行了阐述，要求检验人员要严格按照程序要求，全面做好自身抗体的质量控制。

【关键词】自身抗体检测；质量控制；检验程序分析

【中图分类号】R-0 【文献标识码】B 【文章编号】1671-8801（2014）04-0343-02

自身组织在机体对自身抗原发生免疫反应下发生损害而引起的疾病，称之为自身免疫性疾病（AID）。临床上没有自身免疫性疾病的正常人也可能存在自身抗体，因此，从某种意义上来说，自身抗体的存在与自身免疫性疾病是两种不同的概念。近年来，随着现代检测技术的不断发展，自身抗体检测在自身免疫性疾病的检测和诊断，以及临床用药指导等方面都有了长足发展，并起到了重要的作用。

一、临床常见的自身抗体检测

自身抗体与疾病具有相关性，并存在与多数的自身免疫性疾病患者血清中，通过对自身抗体的检测，可以对自身免疫性疾病进行诊断，以及预后评估，具有重要的临床价值。随着自身抗体的深入了解，已经逐渐成为临床免疫检测的重要实验室指标，临床中应用广泛。有抗双链DNA抗体（ds-DNA）、抗核抗体（ANA）、类风湿因子（RF）、抗环瓜氨酸肽抗体（CCP）、抗角蛋白抗体（AKA）、抗肝抗原自身抗体、抗可提取性核抗原抗体（ENA）等多种抗体检测，下面介绍几种抗体在临床中的应用。

1.抗双链DNA抗体（ds-DNA）

在DNA脱氧核糖磷酸框架上是抗体与细胞核的反应点，其靶抗原是双螺旋DNA，又有天然DNA抗体之称。是系统性红斑狼疮的主要临床特征，有研究显示，临床中有30%-90%系统性红斑狼疮患者的抗双链DNA抗体检测为阳性。抗双链DNA抗体随着疾病活动的控制呈正相关，并可以作为系统性红斑狼疮疾病的治疗效果的监测，以及预后的评价。呈阳性的患者发生肾炎的机率非常大，约为呈阴性的患者肾炎发生率的12倍。

2.抗核抗体（ANA）

自身真核细胞成分为靶抗原的各种细胞核的自身抗体统称为抗核抗体，能够与各种动物的细胞核发生反应，不具有种属和器官特异性，其性质主要体现为IgG、IgD、IgA和IgM。ANA在诊断自身免疫性疾病中的临床价值已经在多种疾病中得到证实，尤其是风湿性疾病、多发性动脉炎、重症肌无力、桥本甲状腺炎等疾病中诊断中具有重要意义。

3. 抗嗜中性粒细胞胞浆抗体（ANCA）

ANCA 是系统性血管炎的血清标志性抗体，该抗体靶抗原为人嗜中性粒细胞胞浆成分，主要有细胞质型和核周型两种类型。该抗体与临床多种小血管炎性疾病关系密切，对于全身性血管炎和Wegener肉芽肿患者，细胞质型呈阳性，且特异性超过97%，初发非活动期患者敏感性为50%，活动期敏感性为100%；对于坏死性新月体型肾小球肾炎、变态反应性肉芽肿性脉管炎和多血管炎患者，核周型在显微镜下发现较多。

4.抗单链DNA抗体（ss-DNA）

该抗体以脱氧核糖或核糖为靶抗原，也有变性DNA抗体之称。系统性红斑狼疮患者的ss-DNA检出率通常在50%-60%之间，混合性结缔组织疾病、硬皮病、类风湿性关节炎、皮肌炎、药物诱导所致狼疮等风湿性疾病患者的ss-DNA檢出率在10%-70%之间，另外，也可能在正常的老年人体内发现，但是不具有疾病特异性。

二、常用检验方法

临床中应用较为广泛的检验方法有：间接免疫荧光法（IIF）、酶联免疫吸附法（ELISA）、免疫印迹法（WB）、放射免疫法（RIA）、免疫斑点法（IDA）。

三、自身抗体检测的质量控制和检验程序

自身抗体检测的质量控制（QC）实验室检测水平的一个重要衡量指标，是实验结果准确性的重要保证。由于自身抗体检测多为定性实验或半定量实验（以滴度报告），特别强调每次实验中应同时设置检测阳性对照，阴性对照，以监测结果的准确性。同时，也便于对实验室内部、实验室之间质量控制的可比性、重复性进行评估。

1.进行自身抗体检测的要求

（1）实验室应有充分的空间、良好的照明和空调设备；设施和设备配备合理，能满足自身抗体检测的要求；（2）检测用试剂盒必须由具有相关资质的厂家提供，并按规定保存；（3）荧光显微镜的质量和荧光光源的强度是保证良好分辨率的基础；（4）每家开展检测的实验室都应建立其自身抗体检测项目的标准操作规程文件；（5）相对固定检测人员，并严格按照SOP文件要求进行检测。阳性结果最好与该患者过去检测档案进行复核后再发出结果；（6）开展自身抗体检测的实验室在保证室内质控的同时，应参加国家或国际权威组织的室间质量评价。（7）质控品与患者标本在同样条件下进行测定，并要特别注意质控品的保存条件和保质期，不得使用保存不当和超过保质期的质控品；（8）微量加样器必须定期进行校准， 从而使其保持有足够的准确度和精密度；（9）每家开展检测的实验室都应对厂家推荐的荧光标记物的稀释方法进行评价，应用已知滴度的阳性血清去滴定标记物，以建立操作过程中的正确稀释方法；（10）酶标仪应定期校准，制定标准操作程序和严格的维护保养措施。

2.实验基质的选择要求

实验基质的选择实验基质的质量在很大程度上取决于间接免疫荧光法对自身抗体进行测定的效果。自身抗体检测中的实验基质，一般用动物或人类的细胞或组织，须经一系列方法进行处理，如HEP-2 细胞的培养、吸附和固定，冰冻组织切片的制备、贴片等。越来越多的实验室已经使用商品化的自身抗体间接免疫荧光检测试剂盒。由于生产工艺先进，质控措施严格，从而保证了实验结果准确的可信性。检测不同的自身抗体应选择不同来源的实验基质， 如检测ANA 一般用人上皮HEP-2 细胞和灵长类动物肝脏。而器官和组织特异性自身抗体则选用相应的抗原器官组织。

熒光标记二抗的选择在自身抗体检测中，荧光标记二抗的质量直接影响实验的结果。荧光素与第二抗体的偶联需要保持一定的摩尔比值（F/P，荧光素/抗体蛋白比值），F/P 值过高将产生明显的非特异性荧光。

3. 检验程序

（1）标本处理：标本的处理首先保证检测系统要具有完整性；常温下进行标本处理操作；正确贮存试剂，保证日期。如二抗的贮存不合理，自身抗体效价则下降明显。建议实验室各自建立每种玻片的最佳容量并写入SOP 中；为防止标本干燥，孵育过程要在潮湿箱内进行；加样要准确，防止向邻近区域溢漏；孵育、洗涤按要求进行；读片后， 玻片置于冰箱， 可保存24 小时。对于24小时以上的保存，需要在零下20℃下密封放置。（2）血清稀释按试剂说明书要求稀释血清；结果为阳性的血清进行等比稀释。（3）阳性和阴性质控品的操作与标本操作过程相同；对于重要的荧光图型，每个一定间隔， 应采用疾病特异的自身抗体阳性质控品；具有商品化的阳性质控品，实验室可以自己制备；理想化的是应用商品化或CDC的特定质控品；根据国家标准和指南， 参加独立于供应商的室间质评。（4）采用显微镜判断荧光强度；应重视有丝分裂， 判断基本图型； 更换灯泡后， 应对显微镜作一定的校准。

3.结果的判断和解释

检验报告中必须描述每个图型及其滴度；有的图型具有疾病相关性， 也可提示做特异性免疫检测。通过自身抗体效价与滴度消长，可判断疾病的活动性，观察治疗反应，指导临床治疗。检验报告中必须描述每个图型及其滴度；有的图型与疾病有相关性，也可提示做特异性免疫检测。

结合患者年龄、自身抗体水平以及相应的荧光模式等方面对结果进行综合分析和解释。对于意义不明确、图型不典型的情况，在检验报告中添加注解，便于临床医师充分了解患者情况；检验报告应由资深人员出具；各实验室应建立自己的参考区间。

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