超滤在灯盏花素注射液中的应用研究

张岩岩,黄 宁,田京京,冯玉康,孙胜斌,姜国志

(1.神威药业集团有限公司, 河北 石家庄 051430；2.河北省中药注射剂工程技术中心，河北 石家庄 051430)



超滤在灯盏花素注射液中的应用研究

张岩岩1,2,黄 宁1,田京京1,冯玉康1,孙胜斌1,2,姜国志1,2

(1.神威药业集团有限公司, 河北 石家庄 051430；2.河北省中药注射剂工程技术中心，河北 石家庄 051430)

目的：考察4种不同规格的超滤膜对灯盏花素注射液的细菌内毒素和化学成分的影响，选择适合生产使用的超滤膜。方法：分别选取10KD聚醚砜、10KD纤维素、30KD聚醚砜、30KD纤维素超滤膜对灯盏花素注射液进行超滤，测定不同超滤过程前后细菌内毒素、含量、有关物质以及膜通量变化，筛选适宜灯盏花素注射液使用的超滤膜。结果：不同截留相对分子质量的超滤膜对灯盏花素注射液的过滤效果存在差异：10KD超滤膜对药液灯盏花素含量及有关物质截留率较高，相应的水通量恢复率较低；聚醚砜超滤膜膜通量大于纤维素超滤膜，过滤时间短。结论：10KD聚醚砜超滤膜能有效去除细菌内毒素，保留有效成分并去除杂质分子，同时能保证较高的膜通量，适用于灯盏花素注射液的生产。

灯盏花素注射剂； 超滤膜； 细菌内毒素；含量测定

灯盏花素注射液是从灯盏细辛中提取分离得到的灯盏花素而制得的中药注射剂。灯盏花素注射液具有保护心脏、肾组织、糖尿病性肝脏，活血化瘀、抗血栓形成、心律失常，减少脑组织缺血及再灌注损害，改善糖尿病肾病血液流变学，通络止痛的功效[1-2]，被广泛应用于中风及其后遗症、冠心病、心绞痛等的治疗[3]。

本文主要通过对灯盏花素注射液超滤前后的细菌内毒素、含量、有关物质以及膜通量的变化综合考虑超滤对灯盏花素的质量影响。对细菌内毒素的控制作为中药注射剂一项安全性指标至关重要。注射剂中的热原主要是细菌内毒素，为革兰阴性菌外壁层的脂多糖物质，此类物质具有耐热性和化学稳定性，不易被除灭。传统的热原去除法是活性炭吸附法，但因部分有效成分也被吸附，而使其适用性受到限制[4]。并且由于操作复杂，影响因素较多，重现性不好。近年来，超滤技术的应用日趋成熟，由于其无相变、能耗低、操作简便、对环境无污染的特点，在医药行业逐步得到应用推广。

本实验采用不同材质、不同截留分子量的超滤膜，对灯盏花素注射液过滤效果进行考察，选出适宜用灯盏花素注射液生产使用的超滤膜[5]。

1 仪器与材料

1.1 仪器

Agilen 1260 高效液相色谱仪；UV-2550紫外可见分光光度计；Millipore 蠕动泵；10KD聚醚砜超滤膜、30KD聚醚砜超滤膜、10KD纤维素超滤膜、30KD纤维素超滤膜(密理博(上海)贸易有限公司提供)。

1.2 材料

灯盏花素注射液药液(神威药业集团有限公司，批号1303011)，灯盏花乙素对照品(批号110842-201106，中国食品药品生物制品检定研究院；乙腈、甲醇为色谱纯，其它试剂均为分析纯；水为注射用水。

2 方法

2.1 样品制备

取灯盏花素注射液中间体，加注射用水稀释，制成与实际生产药液相当的样品。

2.2 超滤试验

取灯盏花素溶液适量，平均分成4份，分别选择10 KD聚醚砜超滤膜、10KD纤维素超滤膜、30 KD聚醚砜超滤膜、30KD纤维素超滤膜过滤。药液温度30℃，操作压力0.06MPa，泵转速180r/min。药液经超滤膜过滤后进行循环，待药液平衡后，收集滤过液。药液快过滤完时，加补入适量注射用水。超滤结束后，收集滤过液，并记录其体积。

2.3 样品指标成分测定

2.3.1 动态浊度法测定细菌内毒素 依照细菌内毒素检查法[6]进行动态浊度法测定细菌内毒素。通过灯盏花素注射液干扰试验结果，样品在稀释20倍后得到很好的回收率，故此次测定取40倍的稀释液即可。

2.3.2 灯盏花素含量测定 色谱条件与系统适用性实验 以十八烷基键合硅胶为填充剂；以甲醇-0.1%磷酸溶液(40：60)为流动相；流速为1.0mL/min；柱温40℃；检测波长为335nm。理论塔板数按灯盏乙素峰计算应不低于5 000[7]。

(1)对照品溶液制备。 取灯盏乙素对照品10mg，精密称定，置100mL量瓶中，加甲醇70mL，超声处理(功率300W，频率50kHz)45min，取出，放置室温，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。

(2)供试品溶液制备 。取本品5mL，精密称定，置100mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。

(3)测定法。 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5μL，注入液相色谱仪，测定，即得。

2.3.3 有关物质[8]色谱条件及系统适用性试验色谱柱：Zorbax SB-C18，4.6×250mm，5μm；流动相：A:0.5%甲酸，B乙腈，C甲醇。梯度洗脱。流速：1mL/min；检测波长：335nm；柱温：30℃。理论塔板数按灯盏花乙素计算应不低于30 000。

(1)对照溶液制备。精密称取105℃干燥至恒重的灯盏花乙素对照品适量，加甲醇制成每1mL含0.2mg的溶液，即得。

(2)供试品溶液的制备。精密吸取供试品溶液适量，加水稀释成每1mL含灯盏花乙素0.2mg的溶液，摇匀，通过0.45μm的微孔滤膜，取续滤液，即得。

(3)测定法。精密吸取对照溶液与供试品溶液各10μL，注入液相色谱仪，测定，即得。

将本品图谱纵坐标调整为灯盏乙素峰峰高的10%,此条件下能检出的色谱峰均要求积分(溶剂峰不积分)，计算灯盏花乙素峰以外的杂质峰总面积占总峰面积的比例。

表1 梯度洗脱

2.4 超滤过程膜通量的测定

超滤前，用注射用水清洗膜至pH值为中性，测定膜纯水通量；超滤过程中分别测定超滤开始、超滤液体积为原液总体积1/2 时及超滤结束前的膜通量，计算超滤过程平均膜通量。超滤结束后，先用注射用水循环洗去残存料液，再用0.1mol/L NaOH循环30min后，最后用注射用水清洗膜至中性，测定膜纯水通量恢复率[9]。

3 结果与分析

3.1 样品指标性成分变化

表2 4种不同超滤膜超滤前后灯盏花素注射液指标性成分变化结果

3.2 不同超滤膜对灯盏花素注射液的影响

结果表明不同规格的超滤膜过滤后，灯盏花素注射液中细菌内毒素、灯盏花素含量、相关物质均有不同程度降低。超滤后细菌内毒素值降低率为96.8%～99.2%，根据质量标准，完全符合注射剂内毒素的要求。灯盏花素含量的降低率为1.5%～5.6%，而有关物质的降低为46%～73%，综合比较有关物质降低率与灯盏花素含量降低率，发现有关物质降低率大于灯盏花素含量降低率，即四种超滤均可在保留灯盏花素的同时除去杂质。不同材质超滤膜截留效果不同，聚醚砜对灯盏花素注射液的截留效果稍好于纤维素超滤膜。超滤膜孔径对截留效果影响较大，10KD超滤膜对细菌内毒素及有关物质的截留率明显大于30KD超滤膜。

3.3 超滤膜膜通量变化

表3 样品对4种超滤膜通量的变化情况 (mL/min)

3.4 灯盏花素注射液对不同超滤膜的影响

不同规格超滤膜清洗后膜通量恢复率为75%～90%，大于75%，即灯盏花素注射液对超滤膜污染低，清洗后可继续使用。对比膜通量数据发现，聚醚砜超滤膜超滤过程中平均膜通量大于纤维素超滤膜，且膜通量恢复率也高于纤维素膜，30KD超滤膜膜通量及膜通量恢复率明显大于10KD超滤膜，所以生产过程使用聚醚砜材质过滤时间短于纤维素材质，30KD截留分子量过滤时间短于10KD截留分子量超滤膜。

4 结论

超滤膜可有效去除灯盏花素注射液细菌内毒素，并且能在保留有效成分的同时去除杂质。不同材质超滤膜对灯盏花素注射液效果差异不大，不同截留分子量效果差异较大。10KD膜包对灯盏花素注射液截留效果优于30KD超滤膜，聚醚砜材质过滤时间短于纤维素材质，故10KD聚醚砜材质超滤膜更适合灯盏花素注射液生产使用。

5 讨论

超滤膜截留分子量小的，对细菌内毒素及有关物质截留率高，但膜通量较低，造成过滤时间延长，影响生产效率，同时增加药液污染的风险。超滤应用于灯盏花素注射液生产中应综合评估截留效果与生产时间的风险与收益，并采取相应措施保证产品质量。

超滤应用于生产还应进行工艺参数优化，一方面选择合适的药液浓度，减少或避免浓度极化现象；另一方面通过细化超滤操作压力、泵转速等参数，确保较大的膜通量，提高生产效率，降低污染风险，满足生产需要。

[1] 杨淑艳，钟秀宏，张以忠，等．灯盏花素药理作用研究进展[J]．吉林医药学院学报，2008，29(6)：360-363．

[2] 林雄，褚克丹．灯盏花素的药理学研究进展[J]．海峡药学，2005，17(6)：5-8．

[3] 张晓丹，刘婧，张卫兵，等．灯盏花素心血管药理及临床研究进展[J]．中国药业，2007，21(16)：3-5．

[4] 尹楠,李红阳,彭国平,等. 超滤法去除中药注射液中的细菌内毒素[J]. 中国医药工业杂志,2008(12):927-929.

[5] 孙晶波,姜国志,刘鑫. 超滤在冠心宁注射液工艺中的应用及对有效成分的影响 [J]. 河北化工,2011(7):18-21.

[6] 国家药典委员会.中国药典[S].一部.北京：中国医药科技出版社，2010：附录VIII D.

[7] 国家药典委员会.中国药典[S].一部.北京：中国医药科技出版社，2010：378-380.

[8] 代勇,刘三康,付春梅,等. 灯盏花素注射液的含量测定及有关物质的检查[J]. 华西药学杂志,2005(2):147-149.

[9] 韩丽. 应用逆流提取与膜分离技术的中药注射剂新工艺研究[D].成都：成都中医药大学,2003.

(责任编辑：宋勇刚)

Applicationon Dengzhanhuasu Injectionin the Process of Ultrafiltration

Zhang Yanyan1,2, Huang Ning1, Tian Jingjing1, Feng Yukang1, Sun Shengbin1,2, Jiang Guozhi1,2

(1.Shineway Pharmaceutical Co．，Ltd．， Hebei 051430 ，China；2.Hebei Engineering Center for Chinese medicine injections,Hebei 051430,China)

Objective:To inspect the influence on Dengzhanhuasu Injection by using four different ultrafiltration membranes and select one applicable for manufacturing.Methods:Determining the bacterial endotoxin,content,related substance and membrane flux before and after Dengzhanhuasu Injection was filtered respectively by 10KD PES membrane,10KD cellulose membrane,30KD PES and 30KD cellulose membrane.Results:The filtering effects of four membranes are different.Membrane of 10KD owed higher retention rate of content and related substance but lower pure water flux recovery rate.PES membranes owed higher membrane flux and faster speed than cellulose.Conclusion:10KD PES membrane is applicable for manufacturing Dengzhanhuasu Injection with effectively removing the bacterial endotoxin and impurity,retaining effective components and higher membrane flux.

Dengzhanhuasu;Ultrafiltration Membrane;Bacterial Endotoxin;Content Determination

2014-02-10

张岩岩(1986-)，男，神威药业集团有限公司助理工程师，研究方向为中药工艺技术。

R284.2

A

1673-2197(2014)09-0023-02