HPLC法测定乳脂体中白藜芦醇的含量

游国叶，李光霞，黄传辉

(信阳职业技术学院 药学院，河南 信阳 464000)



HPLC法测定乳脂体中白藜芦醇的含量

游国叶，李光霞，黄传辉

(信阳职业技术学院 药学院，河南 信阳 464000)

目的：建立HPLC法测定自制白藜芦醇乳脂体中白藜芦醇的含量。方法：采用Luna C18(5μm,250mm×4.6mm)柱，以甲醇∶水(75∶25)为流动相，流速1.0mL/min， 305nm波长处检测。结果：白藜芦醇在0.1～50μg/mL范围内线性关系良好，线性回归方程为：A=125 485.4C+8 407，R=0.999 9；平均回收率为99.1%，RSD为0.63%。结论：本法快速、准确，结果可靠，重现性好，适用于白藜芦醇制剂的质量控制。

白黎芦醇；HPLC；含量测定；乳脂体

白藜芦醇(本文下称RES)又名芪三酚，是含芪类结构的二苯乙烯芪类、非黄酮类多酚物质，文献报道其对光敏感，在多种植物如虎杖、决明、葡萄中均有RES存在。多篇文献报道[1]RES药理作用较多，对心脑血管疾病有明显的疗效，还具有较强的抗突变、抗炎、抗氧化等生物活性，部分研究显示它能够抑制肿瘤生长，具有较强的抗肿瘤活性，有望成为新一代植物类抗肿瘤新药物。 由于RES难溶于水，半衰期短，生物利用度低，本研究欲将其制备新剂型乳脂体，该剂型可将脂溶性药物包裹其中，改善其在体内存留时间短的缺陷。制备过程中使用一些具有特殊功能的辅料，提高体内吸收程度，改善疾病治疗效果。本实验仅对含量测定进行研究。

1 仪器与试药

1.1 仪器

BP211D型半微量电子天平、Waters2695高效液相色谱仪，Waters2996紫外检测器 (美国Waters公司)；100μL进样针(江苏汉邦科技有限公司)。

1.2 试药

白藜芦醇(湖北银河化工厂，含量99.9%)、分析级甲醇及氯仿。

2 方法与结果

2.1 色谱条件与系统适用性试验

2.1.1 波长选择 取处方量RES标准品和不含药的空白辅料混合物，分别置于25mL容量瓶中，甲醇溶解定容，备用。以甲醇为空白，分别取上两溶液进行紫外扫描，由试验可知在305nm处标准品有最大吸收峰，不含药的空白辅料混合液无吸收，故选择305nm为最佳波长,扫描图谱见图1。

2.1.2 色谱条件 色谱柱：Luna C18(250mm×4.6mm ,5μm)；流动相：甲醇-水(75∶25)；流速：1.0mL/min；检测波长：305nm；柱温：室温；进样量：20μL。

图1 波长扫描

2.1.3 储备液制备 精密称取白藜芦醇对照品适量，用甲醇配制成200μg/mL的RES对照品储备液。

2.1.4 干扰试验 精密量取上储备液7.5mL于100mL容量瓶，甲醇定容，得15μg/mL的RES对照品溶液；同上操作制备相当于含15μg/mL RES的空白乳脂体和含药RES乳脂体。取上述三种溶液分别按照“2.1.2”项下色谱条件进样测定，由试验结果可见，在选定的色谱条件下，药峰与杂质峰、溶剂峰均能有效分离且峰形稳定，保留时间约为6.3min，其它辅料均不影响RES测定。色谱见图2。

图2 白藜芦醇色谱

2.2 线性关系考察

精密量取“2.1.3”储备液5mL于100mL容量瓶中，流动相定容，摇匀，得浓度为10μg/mL的RES对照品溶液。分别精密吸取RES标准溶液适量于10mL容量瓶中，流动相定容，摇匀，得浓度分别为0.1、1.0、5.0、10.0、15.0、20.0、50.0μg/mL的系列溶液，进样，以“2.1.2”项下色谱条件进样测定峰面积，以峰面积A对浓度C作线性回归，得标准曲线方程为A=125 485.4C+8 407 ，R=0.999 9，表明RES在0.1～50μg/mL浓度范围内线性关系良好。

2.3 精密度试验

精密量取RES对照品储备液适量配制浓度分别为5、15、50μg/mL的RES溶液3份，按“2.1.2”项下色谱条件进样，每份样品每隔4h测定1次，共测5次；每份样品每天测1次，连续测定5天。分别计算RES的日内及日间精密度。可得日内精密度和日间精密度三浓度RSD分别为1.31%、0.91%、1.01%和1.40%、0.95%、1.25%，由此可知，精密度良好。

2.4 加样回收率试验

取已知含量的RES(99.9%)9份, 每份约0.1g，精密称定，分别置于已标号的1～9号烧杯中,其中1、2、3号中加入RES对照品溶液50μg·mL-1,4、5、6号中加入RES对照品溶液100μg·mL-1,7、8、9号加入RES对照品溶液150μg·mL-1各10mL，得到9份加样回收供试液。按“2.1.2”项下色谱条件测定,结果见表1。由表1可知：平均回收率为98．71%，表明用HPLC测定RES的含量准确度良好。

表1 回收率试验结果

2.5 稳定性试验

取同一供试品溶液,在放置时间为0、2、5、8、12h时进样，测定峰面积，稳定性试验RSD为1.46%，小于2%药典标准，说明稳定性在此条件下良好。

2.6 样品含量测定

按成熟的制备工艺和处方量制备三批含药乳脂体(编号1、2、3)，精密吸取该制剂5mL置100mL容量瓶中，流动相定容，摇匀后过滤，取续滤液得约相当于；另精密量取浓度约为20μg/mL的RES对照品溶液，分别取供试液和对照品液进样，用峰面积外标法计算含量，结果见表2。

表2 样品含量测定结果 (n=3)

3 讨论

通过文献查阅和反复预实验，在紫外扫描的基础上确定了主药的测定波长，最终选择了甲醇∶水(75∶25)为流动相，室温条件下测定白藜芦醇乳脂体的体外含量分析方法，以HPLC测定白藜芦醇的含量，试验条件下线性关系良好，精密度、回收率均符合药典规定，重现性好，方法学考查表明此法可用来进行含RES的乳脂体制剂的含量测定。由试验可知，由于RES对光敏感，自然光照下室温放置16h，含量下降20%，棕色瓶室温条件下放置72h后含量降低5%，所以在实验过程中应避光操作。

白藜芦醇属于强脂溶性药物，体内药代不佳，消除半衰期短，难以达到有效治疗的血药浓度，不利于疾病的治疗，而新剂型乳脂体类似于脂质体，可包封脂溶性药物，使被包封的药物性质不发生改变，毒性降低，提高利用度。

[1] 张文众．白黎芦醇雌激素作用研究[J].中国食品卫生杂志，2008，20(3)：214-216.

(责任编辑：宋勇刚)

2014-01-06

游国叶(1984- )，女，河南省信阳职业技术学院助教，研究方向为药物新剂型与新技术。

R284.2

A

1673-2197(2014)09-0031-02