HPLC法测定保济口服液浸膏二中厚朴酚、和厚朴酚含量研究

陈妍纯，尹焕苗，吴岩平

(广州王老吉药业股份有限公司，广东 广州510450)



HPLC法测定保济口服液浸膏二中厚朴酚、和厚朴酚含量研究

陈妍纯，尹焕苗，吴岩平

(广州王老吉药业股份有限公司，广东 广州510450)

目的：建立HPLC法测定保济口服液浸膏二中厚朴酚、和厚朴酚的含量测定方法。方法：色谱条件：菲罗门C18柱(250mm×4.6mm，5μm)色谱柱，柱温为30 ℃，流动相为甲醇-水(78∶22)，流速为1.0mL/min，检测波长为294nm。结果：厚朴酚、和厚朴酚的回归方程为:厚朴酚Y=1.5264X-1.8032，r2=1.0000，线性范围：4.168～1250.4μg;和厚朴酚Y=1.2620X+0.2406，r2=1.0000，线性范围：2.43～729μg。平均回收率厚朴酚为100.12%，RSD=2.96%(n=6)，和厚朴酚为99.01%，RSD=1.85%(n=6)。结论：本法具有样品处理简单、阴性样品无干扰、重现性好、稳定性高等特点，能很好地提高保济口服液浸膏二的质量可控性。

HPLC；保济口服液浸膏二；厚朴酚；和厚朴酚

厚朴是保济口服液中的君药，味苦性辛温，具有燥湿清痰，下气除满的作用，厚朴酚、和厚朴酚是厚朴的有效成分[1]。保济口服液浸膏二中含厚朴、钩藤、蒺藜、菊花、广东神曲四味药材，提取浸膏后才与其它浸膏混合再制成口服液，现保济口服液质量标准收载于2010版《中国药典》第二增补本，质量标准中只有厚朴的薄层鉴别[2]，保济口服液浸膏二作为保济口服液的中间产品，内控的质量标准中也无含量测定方法。为更好地控制其质量，我们建立了高效液相法测定保济口服液浸膏二中厚朴酚、和厚朴酚的含量测定方法，实验表明，该方法操作简便快速，结果准确，重现性好，能很好地提高保济口服液浸膏二的质量可控性。

1 实验仪器、试剂和试药

1.1 仪器

Agilent1100高效液相色谱仪，DAD检测器，四元泵，自动进样器，柱温箱，Agilent色谱工作站。

1.2 试剂及试药

甲醇(色谱纯)，水(高纯水)，厚朴酚、和厚朴酚对照品(中国食品药品生物制品检定研究院提供，供含量测定用)。

2 方法与结果

参照《中国药典》一部厚朴药材含量测定项下，经DAD紫外光谱扫描，厚朴酚、和厚朴酚在294nm处有紫外吸收峰，选择此为检测波长[3]。

2.1 色谱条件

色谱柱：菲罗门C18柱(250mm×4.6mm，5μm)，流动相：甲醇-水(78∶22)，流速：1.0mL/min，检测波长：294nm，柱温：30℃，进样量：4μL，理论塔板数按厚朴酚计算应不低于2 500。

2.2 溶液制备

2.2.1 对照品溶液的制备 取厚朴酚、和厚朴酚对照品适量，精密称定，加甲醇分别制成每1mL含厚朴酚40μg、和厚朴酚24μg的溶液，即得(见图1)。

图1 对照品溶液HPLC

2.2.2 供试品溶液的制备 精密称定本品1g置10mL的容量瓶中，加50%甲醇稀释至刻度，摇匀后，滤过，取续滤液，即得(见图2)。

2.2.3 阴性对照溶液的制备 去除保济口服液浸膏二中的厚朴，按照保济口服液浸膏二生产工艺制成阴性对照样品，按供试品溶液的制备方法制成厚朴阴性对照溶液。

2.3 方法专属性考察

在上述的色谱条件下，将供试品溶液(保济口服液浸膏二)、厚朴酚、和厚朴酚对照品溶液、厚朴阴性对照溶液，注入液相色谱仪中，结果显示阴性对照无干扰。

图2 供试品HPLC

2.4 标准曲线

精密称取厚朴酚对照品0.010 42g、和厚朴酚对照品0.012 15g，制成含厚朴酚、和厚朴酚41.68mg/mL、24.30mg/mL的对照品溶液。精密吸取上述对照品溶液0.1、1、4、10、20、30μL，注入液相色谱仪中，测定峰面积，求标准曲线、回归方程及相关系数。以对照品量为横坐标，以峰面积为纵坐标，绘制标准曲线图得回归方程：厚朴酚Y=1.5264X-1.08032，r2=1.0000，线性范围：4.168～1250.4μg；和厚朴酚Y=1.2620X+0.2406，r2=1.0000，线性范围：2.43～729μg。

表1 厚朴酚、和厚朴酚标准曲线制备

2.5 精密度试验

取厚朴酚、和厚朴酚对照品溶液4μL，连续进样5次，测定其峰面积，计算得和厚朴酚峰面积平均值为：119.78，RSD%为0.33%，厚朴酚峰面积平均值为：247.74，RSD%为0.33%，结果显示精密度良好。

表2 精密度试验

2.6 重复性试验

精密称取同一样品，按供试品溶液制备方法制备6份样品溶液，测得平均含量为和厚朴酚0.577 7mg/g，RSD=1.69%，厚朴酚0.627 8mg/g，RSD=2.40%，结果显示，重现性好。

表3 重复性试验

2.7 稳定性试验

精密称取样品，按供试品溶液制备方法制备样品溶液，依法测定，分别在0、2、5、12、16、21、35h，依法测定，厚朴酚平均含量为0.604 5mg/g、RSD%为1.11%，和厚朴酚平均含量为0.575 0mg/g、RSD%为0.74%，结果显示，在35h内，样品溶液稳定。

表4 稳定性试验

2.8 回收率试验

取已知含量(厚朴酚0.627 8mg/g、和厚朴酚0.577 7mg/g)的保济口服液浸膏二样品0.5g，精密称定，共6份，分别精密加入厚朴酚对照品溶液(浓度：0.416 8mg/mL)0.75mL、和厚朴酚对照品溶液(浓度：0.486 0mg/mL，按98.7%计)0.6mL，按照供试品溶液制备方法制备供试液，分别精密吸取上述溶液各4μL注入液相色谱仪，测定，计算回收率，结果见表5、表6。

表5 厚朴酚回收率试验

表6 和厚朴酚回收率试验

2.9 样品测定

取3批中试的样品，按上述色谱条件制备供试品溶液，依法测定，分别计算供试品中和厚朴酚、厚朴酚含量，结果见表7。

表7 保济口服液浸膏二中和厚朴酚、厚朴酚含量测定结果

3 讨论

厚朴用于治疗湿滞伤中、脘痞吐泻、食积气滞、腹胀便秘、痰饮咳喘等症[4]，为保济口服液的君药，探讨保济口服液浸膏二中的主要成分厚朴酚、和厚朴酚，对保济口服液的质量控制具有重要意义。中国药典(2010版)一部对厚朴药材的含量测定采用浸渍24h[3]，笔者在实验过程中，曾用浸渍24h以及直接稀释摇匀配制进行对比实验，证明直接稀释摇匀配制和厚朴酚、厚朴酚已经基本提取完全，确定了以此作为供试品的制备方法。采用HPLC法测定保济口服液浸膏二中厚朴酚、和厚朴酚含量，该方法简便、稳定、重现性好，可作为保济口服液浸膏二的质量控制的指标之一，同时也为在后续研究保济口服液中厚朴酚、和厚朴酚的含量测定方法提供了实验依据。

[1] 曾和平，曾志，杨定乔，等.保济丸中厚朴酚浓度的HPLC法测定[J].华南师范大学学报：自然科学版，2004，8(2)：90-91.

[2] 中华人民共和国药典委员会.中国药典[M].北京：中国医药科技出版社，2013：63.

[3] 中华人民共和国药典委员会.中国药典[M].北京：中国医药科技出版社，2010：235.

[4] 徐镇军.厚朴和厚朴习用品、混淆品及伪品的鉴别[J]. 中国中医药现代远程教育，2008，6(5)：431.

(责任编辑：姜付平)

2014-02-15

陈妍纯(1981-)，女，广州王老吉药业有限公司制药工程师，研究方向为药品质量标准及管理。

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1673-2197(2014)09-0027-02