紫外分光光度法测定甲钴胺注射液含量

雷晓雪，陈文芝，张高平，王丽楠

(扬子江药业集团南京海陵药业有限公司，江苏 南京 210049)



紫外分光光度法测定甲钴胺注射液含量

雷晓雪，陈文芝，张高平，王丽楠*

(扬子江药业集团南京海陵药业有限公司，江苏 南京 210049)

目的：建立紫外分光光度法(UV)快速测定甲钴胺注射液含量。方法：首次以水为溶剂，在266 nm处测定吸光度并计算注射液中甲钴胺含量。结果：甲钴胺在3～60 μg/mL浓度范围内与吸光度呈良好的线性关系，回归方程为：Y=0.013 66X+0.001 68，r=0.999 97，平均回收率为100.3%(n=9, RSD=0.3%)。结论：该方法简便、快速、准确、专属性强、重现性好，可用于甲钴胺注射液的质量控制。

紫外分光光度法(UV)；甲钴胺注射液；含量测定

甲钴胺注射液(Mecobalamin Injection)是一种内源性辅酶B12，参与一碳单位循环，在由同型半胱氨酸合成蛋氨酸的转甲基反应过程中起重要作用,是一种新型的有效治疗末梢性神经障碍的药物[1]。体外研究表明，甲钴胺可促进大鼠组织中卵磷脂的合成和神经元髓鞘形成，适用于周围神经病变。该注射液主要成分为甲钴胺，化学名称为Coα-[α-(5,6)-二甲基苯并咪唑基]-Coβ-甲钴酰胺。甲钴胺在紫外光区有很强的吸收，已有报道HPLC法测定甲钴胺片的含量及有关物质[2,3]，以及以盐酸溶液为溶剂，采用紫外法测定甲钴胺的含量[4]。本研究首次以水为溶剂，采用紫外法测定其含量，该法操作简便、快速、准确、环保，且大大降低了成本。

1 仪器与试药

1.1 仪器

UV-2550型紫外分光光度计(日本岛津)；AG285型电子天平(瑞士梅特勒托利多公司)；KQ-250DE型数控超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)；甲钴胺对照品(上海市药品检验所，批号080802，含量99.1%)；甲钴胺注射液(扬子江药业集团南京海陵药业有限公司，规格为1mL:0.5mg，批号：12041711、12041811、12041911、13031311)。

2 方法与结果

2.1 对照品储备液配制

精密称取甲钴胺对照品适量，加水制成每1mL含甲钴胺0.15mg的溶液，作为对照品储备液。

2.2 供试品溶液配制

精密量取甲钴胺注射液适量(约相当于甲钴胺1.5mg)，置于50mL量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。

2.3 测定波长选择

精密量取甲钴胺对照品储备液10mL置于50mL量瓶中，用水稀释至刻度，作为对照品溶液。以水为空白，在200～400nm波长范围内进行扫描，结果甲钴胺对照品在266nm处有最大吸收，故选择266nm作为测定波长。

2.4 专属性试验

取按处方制法制得不含甲钴胺的阴性模拟制剂适量，按供试品制备法同法制得阴性对照液，取阴性对照液在266nm波长处进行测定。结果见图1，紫外扫描图显示甲钴胺在266nm处有最大吸收，而阴性对照液在此处无明显吸收，因此辅料不干扰主成分的测定。

图1 紫外扫描光谱

2.5 耐用性实验

取同一份供试品溶液，按“2.2”项下方法制备供试品溶液，在(266±1)nm波长处测定，以其含量计算RSD值。结果见表1，该方法耐用性良好，RSD=0.3 %。

表1 耐用性实验结果

2.6 线性关系考察

分别精密量取对照品储备液1.0，5.0，10.0，15.0，20.0mL置于50mL量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，以水为空白，在266nm波长处测定吸光度，以吸光度为纵坐标，以浓度为横坐标，绘制标准曲线，得到回归方程为Y=0.013 66X+0.001 68，r=0.999 97。结果表明甲钴胺在3～60μg/mL浓度范围内线性关系良好。

2.7 回收率实验

称取相当于80%、100%、120%标示量的主药加入相应辅料各3份，进行测定，计算回收率，结果见表2。甲钴胺平均回收率为100.3%，RSD=0.3%(n=9)。

表2 回收率实验结果 (n=9)

2.8 重复性实验

取批号为13031311甲钴胺注射液，按“2.2”项下方法，分别配制6份供试品溶液，以其含量计算RSD值，结果测得甲钴胺注射液含量平均含量为101.2%，RSD=0.1%(n=6)。

2.9 稳定性实验

取同一份供试品溶液，分别于0h，0.5h，1h，1.5h，2h，2.5h，3h时内，在266nm处测定其吸光度，结果RSD为0.4%，表明供试品溶液在3h内稳定。

2.10 样品测定

精密量取甲钴胺注射液适量(批号：12041711、12041811、12041911)，约相当于甲钴胺1.5mg，置于50mL容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。另取对照品储备液10mL置于50mL容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。在266nm处分别测定吸光度，计算各批次含量。采用本公司经过验证的高效液相色谱法测定此3批甲钴胺注射液含量，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，甲醇-乙腈-磷酸缓冲液(25∶85∶400)为流动相，检测波长为267nm，流速为0.8mL/min，进样量为20μL。结果见表3。

经对比两种方法的测定结果，本文采用的紫外分光光度法适用于甲钴胺注射液含量的测定。

表3 两种含量测定结果比较 (%)

3 讨论

从专属性实验中可以看出，甲钴胺最大吸收波长为266nm，而阴性对照在此波长处吸收非常弱，对含量测定的准确度无影响，方法的专属性良好。

本研究首次以水为溶剂测定甲钴胺注射液的含量，成本低、无毒性，操作过程简便、快速，且准确度、精密度、线性、回收率、稳定性等结果均符合要求，适合在大生产过程中快速检测中间产品的含量。

[1] 吴学军,邹定,刘志鹤，等.紫外分光光度法测定制剂中甲钴胺的含量[J].药物分析杂志,1998(S1):206-207.

[2] 陈琪.高效液相色谱法测定甲钴胺片的含量[J].中国生化药物杂志，2003,24(5):251-252.

[3] 吴琼珠,戴永健,刘卫卫,等.HPLC测定甲钴胺的有关物质[J].南京军医学院学报，2003,25(4):221-222.

[4] 陈咏昕,罗卓雅.UV法测定甲钴胺片剂及注射液的含量[J].广东药学院学报,1998,14(3):199-200.

(责任编辑：宋勇刚)

Determination of Mecobalamin injection by Ultraviolet Spectraphotometr

Lei Xiaoxue, Chen Wenzhi, Zhang Gaoping, Wang Linan*

(Yangtze River Pharmaceutical Group Nanjing Hailing Pharmaceutical Co., LTD,Nanjing 210049,China)

Objective:To establish a method for the determination of ropivacaine mesylate injection by ultraviolet spectrophotometry.Methods:H2O was taken as solvent and detected at 266nm, The content of ropivacaine mesylate was measured and calculated.Results:The linear equation wasY=0.013 66X+0.001 68，r=0.999 97，and the calibration curve was linear in the range of 3～60μg/mL. The average recovery was 100.3% and RSD was 0.3% (n=9).Conclusion:The UV method was simple, accurate, specific, reproducible, and it can be used for determination of mecobalamin injection.

Ultraviolet Spectraphotometr；Mecobalamin Injection；Assay

2014-01-07

雷晓雪(1985-)，女，硕士，扬子江药业集团南京海陵药业有限公司工程师，研究方向为药物质量控制及生物药物分析。

R927.2

A

1673-2197(2014)09-0018-02