高效液相色谱法测定盐酸伊立替康注射液的含量

王 宇，黄巧巧，谢升谷，郑国钢

（浙江省食品药品检验研究院，浙江 杭州 310004）

盐酸伊立替康（CPT－11）为半合成喜树碱衍生物，抗癌活性强，毒性较喜树碱小［1］，水溶性较好；1994年由日本第一制药和YakultHonsha公司开发上市，用于治疗肺癌、卵巢癌和宫颈癌［2］；1998年获得美国食品与药物管理局批准，用于标准化疗方案治疗失败后转移性结直肠癌的一线治疗。该药于2001年3月在中国上市，2010年版《中国药典》尚未收载。笔者采用高效液相色谱（HPLC）法对盐酸伊立替康注射液的含量测定方法进行了研究，现报道如下。

1 仪器与试药

Agilent 1260型高效液相色谱仪；Mettler XS205DU型电子天平。盐酸伊立替康对照品（USP对照品，使用前不需干燥，按C33H38N4O6·HCl计，含量为 91.6%，CAT.NO.为 1347609，MD LOT为GOJ233）；盐酸伊立替康注射液（浙江海正药业股份有限公司，批号分别为 120801，120802，120803，规格均为 5mL ∶100mg）；盐酸伊立替康注射液辅料原液（浙江海正药业股份有限公司）；甲醇、乙腈均为色谱纯，无水磷酸二氢钠、辛烷磺酸钠均为分析纯，水为重蒸水。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱：AgilentHC－C18柱（250mm×4.6mm，5μm）；流动相：磷酸盐缓冲液（取无水磷酸二氢钠2.43 g和辛烷磺酸钠1.66 g，溶

于 1 000mL 水中）－甲醇 －乙腈（57∶25∶18）；流速：1.5mL ／min；

进样量：15 μL；柱温：40℃；检测波长：255 nm。

2.2 溶液制备

溶液制备时均避光操作。精密量取本品5mL（相当于盐酸伊立替康100mg），置100mL容量瓶中，用稀释剂（流动相用盐酸调节pH为3.65）稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。避光操作。取盐酸伊立替康对照品约50mg，精密称定，置50mL容量瓶中，加稀释剂溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。取不含盐酸伊立替康的辅料原液，按供试品溶液制备方法制备得空白辅料溶液。

2.3 方法学考察

专属性试验：按2.1项下色谱条件，取2.2项下3种溶液，分别进样分析。结果见图1，可见，供试品溶液色谱主峰的保留时间与对照品溶液色谱峰一致，空白辅料对盐酸伊立替康的含量测定无干扰。

线性关系考察：取盐酸伊立替康对照品适量，精密称定，加流动相溶解并稀释成质量浓度约为 0.2，0.4，0.6，0.8，1.0，1.2，1.6 g／L的对照品溶液，分别取15μL注入高效液相色谱仪，记录色谱图，以质量浓度（C，g／L）对峰面积（A）作标准曲线，得线性回归方程A＝29561C＋1043.8，r＝0.9994（n＝7）。结果表明，盐酸伊立替康质量浓度在0.1831～1.4647 g／L范围内与峰面积呈良好线性关系。

图1 盐酸伊立替康高效液相色谱图

精密度试验：精密吸取同一对照品溶液15μL，注入高效液相色谱仪，连续进样6次。结果的RSD为0.03%（n＝6），表明仪器精密良好。

重复性试验：取批号为120801的样品，依法制备6份供试品溶液，分别进样。结果的RSD为0.46%（n＝6），表明方法重复性良好。

稳定性试验：取同一份供试品溶液，分别于 0，2，4，6，8，12 h时进样分析，记录色谱图。结果峰面积的RSD为0.56%（n＝6），表明供试品溶液在12 h内稳定性良好。

回收率试验：分别取盐酸伊立替康对照品共9份，精密称定，分成高、中、低3组，按注射液处方加入辅料原液，用稀释剂溶解并定量稀释制成每1mL中约含盐酸伊立替康0.8，1.0，1.2mg的溶液，按2.1项下色谱条件进样测定，计算回收率。结果见表1。

2.4 样品含量测定

取3批样品，依法制备供试品溶液。取对照品溶液和供试品溶液适量，照2.1项下色谱条件进样测定，记录色谱图，按外标法以峰面积计算含量。结果批号为120801，120802，120803的样品中盐酸伊立替康含量分别为标示量的100.3%，100.9%，

表1 盐酸伊立登康回收率试验结果（n＝9）

3 讨论

将盐酸伊立替康对照品溶液用稀释剂稀释至20μg／mL，于200～400 nm波长范围进行紫外扫描，其最大吸收波长为255 nm，故确定检测波长为255 nm。盐酸伊立替康在干燥状态下对光稳定，水溶液对光敏感［3］，因此溶液制备过程都需要在避光条件下进行。文献［4］报道，采用HPLC法测定盐酸伊立替康含量及有关物质，采用同一色谱条件可使主成分与7－乙基－10－羟基喜树碱、7－乙基羟基喜树碱有效分离。但近年来随着研究的深入，盐酸伊立替康已知的有关物质已达到7种，该色谱条件已无法满足要求，需进行进一步研究，本试验中建立了测定盐酸伊立替康注射液中盐酸伊立替康含量的HPLC法，该方法样品峰形良好，保留时间合适，理论板数达到10000以上，可用于盐酸伊立替康注射液的质量控制，适当调整后亦可用于血药浓度的测定［5］，可满足体内药物分析的要求。

参考文献：

［1］ Anonymous.Irinotecan － Antineoplastic［J］.Drugs Future，1996，21（3）：315－317.

［2］孙晓东，岳树香，李建伟.盐酸伊立替康临床应用研究进展［J］.中国药业，2011，20（14）：79－80.

［3］王世霞.伊立替康脂质体的制备及体内外行为研究［D］.河北：河北医科大学，2008.

［4］李语如，顾 萍，蒋素梅，等.盐酸伊立替康及注射液的HPLC测定［J］. 中国医药工业杂志，2001，32（6）：268－269.

［5］孙祥德，高 革，齐 伟，等.高效液相色谱法测定血浆中伊立替康的含量［J］. 中国现代应用药学，2005，22（1）：57 －59.