连翘不同药用部位质量比较研究*

2014-04-27李志荣杨光义杜士明孙荣进

中国药业 2014年11期

李志荣，杨光义，叶方，杜士明，王刚，杜婷，孙荣进

（1.湖北医药学院附属医院十堰市太和医院药学部，湖北十堰 442000； 2.湖北医药学院，湖北十堰 442000）

连翘是木犀科植物连翘Forsythia suspensa（Thunb.）Vahl的干燥成熟果实，是常用的传统中药之一，具有清热解毒、消肿散结等功效［1］，临床主要用于治疗急性风热感冒、痈肿疮毒、淋巴结结核、尿路感染等症。由于连翘生长周期较长，易受不良自然环境的影响而大量减产，造成市场缺口较大，而大量连翘叶却被遗弃。现代研究表明，连翘叶有广泛的药用价值，如有抗菌、保肝、非特异性免疫、抗氧化等作用［2－6］，但一直以来缺乏对连翘叶的系统研究。本试验通过对连翘叶和连翘果实进行薄层色谱、紫外光谱鉴别，对灰分、浸出物及主要化学成分等进行对比研究，探讨连翘叶代替连翘果实药用的可行性，为进一步对连翘叶药用、保健饮品等领域的潜在价值开发奠定理论和实验基础。

1 仪器与试药

戴安UltiMateTM3000型高效液相色谱仪（美国戴安公司），包括四元梯度泵、自动进样器、柱温箱、紫外检测器和Chromeleon软件数据处理系统；TU－1901型紫外分光光度计（北京普析通用仪器有限责任公司）；AUW 120D型电子天平（日本岛津公司）；CQX25－06型超声波震荡器（上海必能信超声有限公司）；电热恒温水浴锅（上海医疗器械五厂）；SX－4－10型高温箱形电炉（上海三星电热仪器厂）。连翘叶和连翘采自湖北十堰房县连翘种植基地，由湖北医药学院生药学教研室陈吉炎教授鉴定为连翘叶Forsythia suspensa（Thunb.）Vahl Folium和连翘；连翘苷对照品（中国药品生物制品检定所，批号为110821－200711）；乙腈、甲醇为色谱纯；其余试剂均为分析纯；水为自制超纯水。

2 方法与结果

2.1 薄层色谱鉴别［1］

精密称取连翘苷对照品0.25 mg，置10 mL容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，备用，即得对照品溶液。分别取连翘叶和连翘粉末1 g置具塞锥形瓶中，加石油醚20mL，密塞，超声处理15min，滤过，弃去石油醚液，残渣挥干石油醚后加甲醇20mL，密塞，超声处理20min，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇5mL溶解，作为供试品溶液。分别取上述3种溶液适量点于同一薄层板上，以氯仿－甲醇（8∶2）为展开剂，以10%硫酸乙醇为显色剂，105℃加热至斑点显色清晰，结果见图1。可见，连翘叶和连翘中主要成分相近，在连翘苷所在的位置均有较明显的斑点。

图1 薄层色谱图

2.2 紫外光谱鉴别

分别取2.1项下供试品溶液各1mL，用甲醇稀释2000倍后，以甲醇为空白溶液，在200～500 nm波长范围内进行紫外扫描，紫外吸收光谱图见图2。可见，在200～500 nm波长范围内连翘和连翘叶的紫外吸收曲线相近，但连翘叶的吸光度大于连翘。

图2 紫外吸收光谱图

2.3 醇浸出物含量测定

参照2010年版《中国药典（一部）》附录ⅩA醇溶性浸出物冷浸浸出物测定法。取供试品约4 g，精密称定，置250mL具塞锥形瓶中，精密加入一定浓度的乙醇溶液100mL，密塞，冷浸，前6 h内时时振摇，再静置18 h后用干燥滤器迅速滤过。精密量取滤液20mL，置已干燥至恒重的蒸发皿中，水浴蒸干后，于105℃干燥3 h，置干燥器中冷却30min，迅速精密称定质量。以干燥品计算供试品中醇溶性浸出物的含量（%）。结果见表1。可见，连翘叶和连翘50%乙醇所得浸出物含量最高，而且连翘叶中浸出物含量高于连翘。

表1 连翘叶和连翘药材浸出物含量测定结果（n＝3）

2.4 灰分含量测定

分别取连翘叶与连翘适量，粉碎过2号筛，称取3～5 g，置炽灼至恒重的坩埚中，缓慢炽热，至完全炭化时，逐渐升高温度至500～600℃，使完全灰化至恒重，根据残渣质量，计算供试品中总灰分的含量（%）。待坩埚放冷，加入10%浓硫酸2mL，放在电炉上灼烧至无烟，残渣照前法炽灼，至坩埚内容物完全灰化，计算酸不容灰分的含量（%）。结果见表2。可见，连翘叶和连翘灰分含量相近，差异无显著性。

2.5 连翘苷含量测定［1］

2.5.1 色谱条件

色谱柱：Diamonsil C18柱（200mm ×4.6mm，5 μm）；流动相：乙腈－水（25 ∶75）；流速：1.0mL ／min；检测波长：277 nm；柱温：30℃；进样量：10μL。

表2 连翘叶和连翘果实药材灰分测定结果（n＝10）

2.5.2 溶液制备

取2.1项下对照品溶液，以0.45μm微孔滤膜滤过，备用。取连翘叶粉末（过5号筛）约1 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇15mL，称定质量，浸渍过夜，超声处理25min，放冷，再称定质量，用甲醇补足减失的质量，摇匀，过滤，精密量取续滤液5mL，蒸至近干，加中性氧化铝0.5 g拌匀，加在中性氧化铝柱上，用70%乙醇120mL洗脱，收集洗脱液，浓缩至干，残渣用50%甲醇溶解，转移至5mL容量瓶中，稀释至刻度，摇匀；从中精密量取1mL，稀释至10mL，以0.45μm微孔滤膜滤过后作为连翘叶供试品溶液。按连翘叶供试品的制备方法，至过中性氧化铝柱、洗脱液浓缩并定容至5 mL容量瓶中后，改为从中精密量取2mL，其他同连翘供试品溶液制备方法。

2.5.3 线性关系考察

取连翘苷对照品溶液，按拟订色谱条件，分别进样10，14，18，22，26，30 μL，以被测物峰面积为纵坐标（Y）、相应浓度为横坐标（C）进行线性回归，得回归方程Y＝7.8297C＋5.3008（r＝0.9990）。结果表明，连翘苷进样量在0.26～7.80μg范围内与峰面积呈良好线性关系。

2.5.4 含量测定

分别取连翘苷对照品溶液、供试品溶液，按拟订色谱条件进样分析，色谱图见图3。结果连翘与连翘叶中连翘苷含量分别为0.0862%和3.1496%。可见，连翘叶中连翘苷的含量明显高于连翘。

3 讨论

在对连翘叶和连翘薄层色谱分析中发现，连翘叶含有部分连翘所不含有的斑点，这些斑点有的可能是未除完的叶绿素或杂质，有些是叶中独有的物质，但这些物质有无药用价值、有何药用价值尚待进一步研究。由图2可见，连翘叶的吸收曲线高于连翘果实，说明连翘叶中所含某些化学成分可能高于连翘。药材中灰分、浸出物含量的测定，可从一定程度上反映中药的内在质量，也是中药质量控制的重要指标。查阅近年来对连翘叶与果实的研究状况，其化学成分研究主要是醇溶部分，醇浓度太低，提取的淀粉、糖类物质等溶出过多，不易过滤；醇浓度太高，水溶性有效成分溶出较低。因此本试验参照2010年版《中国药典（一部）》，考察了50%，75%，95%等不同浓度的乙醇对浸出物含量的影响，结果以50%的乙醇水溶液浸出效果最好，可能是该浓度下以连翘苷为代表的脂溶性成分和以连翘酯苷为代表的水溶性的成分均有较好的提取效果。对连翘叶和连翘中连翘苷的含量测定发现，连翘叶中连翘苷的含量明显高于连翘叶，差异较大，与紫外吸收光谱结果一致，说明以连翘叶代替连翘药用具有可行性，但需要调整用药剂量。