改变胱抑素C实验参数对检验结果的影响分析
2014-04-23张双元
张双元
[摘要] 目的 检验通过适当改变胱抑素C试验参数对试剂盒实验结果的影响。方法 收集覆盖试剂盒线性范围的标本在改变参数前后分别检验一次，并对前后两次结果分别进行配对t检验和线性相关与回归分析，对常数a与斜率b进行单样本均数t检验。结果 实验前后结果经配对t检验，t=1.81，P >0.05，无统计学意义，线性回归方程为Y=0.9981X-0.0364，r=0.9982，对常数a斜率b进行单样本均数t检验结果为ta=0.70633< t（0.05/2，22）=2.074，P>0.05无统计学意义；tb=0.151802< t（0.05/2，22）=2.074，P>0.05无统计学意义。结论 胱抑素C适当改变试验参数前后对检验结果无影响，不影响试剂盒线性。
[关键词] 胱抑素C；改变试验参数；实验结果
[中图分类号] R446.1 [文献标识码] B [文章编号] 1673-9701（2014）10-0054-02
胱抑素C 是一种小分子蛋白[1]，也被称为γ-微量蛋白及γ-后球蛋白，广泛存在于各种组织的有核细胞和体液中，是一种低分子量、碱性非糖化蛋白质，其血中浓度由肾小球滤过决定，而不依赖任何外来因素，如性别、年龄、饮食的影响，是一种反映肾小球滤过率变化的理想同源性标志物[2，3]。胱抑素C 能够自由通过肾小球， 并且由肾小管重吸收后降解，生理情况下几乎没有影响胱抑素C稳定的因素。胱抑素具有产生速率恒定、只能通过肾小球滤过排泄，在肾小管内完全被重吸收降解[4]，这一特点使得血清胱抑素 C成为引人注目的肾脏肾小球滤过率的替代标志物[5，6]，是衡量早期肾功能损害的重要指标[7-10]。最近本科室也开展了此项目，在实验过程中发现R1试剂消耗多R2试剂消耗少，随着累积检验次数的增加，这种现象更加明显，造成试剂大量浪费，本研究就是通过改变试剂实验参数使试剂R1与试剂R2消耗量相互匹配，并对改变参数前后的标本检验结果进行统计分析。
1材料与方法
1.1检测系统
奥林巴斯AU640全自动生化分析仪，某胶乳增强免疫比浊胱抑素C试剂盒。原试剂参数，R1 250 μL，R2 50 μL、吐水10 μL；改为R1 220 μL，R2 50 μL、吐水10 μL。实验所需所有试剂均在有效期内，在改变试验参数前后分别定标，质控在控。
1.2 样本收集与处理
收集2013年5月22日～6月18日在试剂线性范围内低、中、高浓度标本血清24例放置于超低温冰箱中储存备用，实验时取出室温复溶，然后对24例标本分别在改变试剂参数前后各测试一次。
1.3 实验方法
通过EXCEL2003首先对实验数据进行配对t检验；再以改变参数前数据为横坐标，改变参数后数据为纵坐标，绘制散点图，并得到回归方程与回归系数，通过统计学方法验证回归曲线与Y=X的关系。
1.4 统计学方法
计量资料以（x±s）表示，对实验数据采用EXCEL2003软件进行统计学分析，统计方法采用配对t检验和直线相关线性与回归分析，单样本均数t检验，P <0.05表示有统计学意义。
2结果
改变参数前实验数据（3.66±2.01），改变参数后实验数据（3.60±1.99）。改变参数前后实验结果经配对t检验比较，t=1.81，P=0.08 >0.05，差异无统计学意义。线性相关与回归分析：实验前后结果呈正相关R2=0.9966，r=0.9982接近1，回归方程Y=0.9981X-0.0364。如图1。对-0.0364（a）与0，0.9981（b）与1进行单样本均数t检验，ta=0.70633
图1 改变参数前实验数据
3讨论
首先在EXCEL2003工作表中对改变参数前后数据进行配对t检验，将实验前后数据分左右各列一列，然后选择函数TTEST，分别将两列数据代入，参数选为双尾配对t检验得到结果为P=0.08，因此实验前后结果没有统计学意义，利用TINV函数得到t值，分别将概率值（P=0.08）、自由度（d=23）输入得到结果t=1.81。然后进行线性相关与回归分析，选中两列数据点击插入选择图表选择XY散点图点击完成，散点图就会出现在工作表中，选中散点图在点击图表选择添加趋势线，选择线性，点击选项选择显示公式、显示R平方值，点击确定，就会出现图一结果，然后对Y= 0.9981X-0.0364中的系数（b）与常数（a）进行单样本均数t检验。
本研究在改变试验参数过程中减少了R1 试剂用量，从而使总反应体积变小，使抗体浓度相对增加可能出现免疫反应中的“前带现象”，主要原因可能是抗原抗体比例不合适，而产生抑制反应现象，使反应信号弱化，从而使实验结果出现严重误差。因此通过收集高、中、低浓度的胱抑素C标本，在改变实验参数前后分别检验一次，并对实验结果进行配对t检验，t=1.81，P>0.05无统计学意义；以及直线相关与回归分析，通过对回归方程Y=0.9981X-0.0364与Y=X比较。分别对a与0、b与1进行单样本均数t检验，ta=0.70633
通过对本实验的数据研究表明适当改变胱抑素C的试验参数可以解决试剂不匹配的问题，并对实验结果无明显影响。原因有：①本试剂的R1为甘氨酸缓冲液主要是为R2混合后提供抗原抗体反映合适的酸碱环境，减少R1用量对对反应体系影响较小。②本次实验中的胱抑素C测定试剂盒使用的是胶乳增强免疫透射比浊法（PETIA），是以多克隆抗体为基础的改良免疫比浊分析法，利用基因工程方法将抗体与胶乳颗粒结合，当抗原抗体相结合时便形成了抗原-抗体-胶乳颗粒复合物，增强了反应吸光度，反应液在一定波长处比浊，与同样处理的标准液比较，计算标本中抗原的含量，利用生化分析仪进行比浊测定，整个分析过程只需几分钟，该方法与传统免疫比浊法比较其灵敏度更高。重要的是此种方法与传统比浊法相比可能使抗原抗体反应的“等价带”变宽，因此有更高的灵敏度和更宽的线性范围，本次试验改变了反应的总体积并没有对实验前后的检验结果产生影响，也充分体现了胶乳增强免疫比浊类试剂盒对胱抑素C测试的优异性。因此在日常工作中对R1、R2试剂不匹配的项目经过论证适当改变试验参数既产生一些经济效益也避免了浪费，值得我们注意。
[参考文献]
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[12] 王凡，蒋红君. 甲胎球蛋白检测的临床可报告范围验证[J]. 实用医学杂志，2011，27（13）：2452-5453.
（收稿日期：2013-11-04）endprint
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（收稿日期：2013-11-04）endprint
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（收稿日期：2013-11-04）endprint
