前列腺组织Galanin及GalR2表达及意义

张振宇，高健刚，姜波，侯四川

(青岛大学医学院，山东 青岛 266071 1 外科学专业； 2 附属青岛市市立医院泌尿外科)

前列腺癌目前是美国男性最常见的一种恶性肿瘤，也是最容易导致死亡的恶性肿瘤之一[1]。我国前列腺癌发病率较低，但近年随着人口老龄化、生活条件的改善以及诊断技术的不断提高,其发病率有明显增加的趋势。最近研究结果表明，在前列腺组织中存在神经内分泌细胞(NEC)，而NEC是全身弥漫性神经内分泌系统即APUD(amine precursor uptake and decarboxylation)细胞系统的组成部分，APUD在前列腺的生长及发育过程中起重要的调节作用。同样，前列腺癌组织中也可见大量的神经内分泌化(NED)现象，且表现得尤为明显[2]。Galanin及其受体在中枢和外周神经系统内分布较广泛，既往文献报道Galanin蛋白在前列腺恶性肿瘤组织阳性表达率升高，对前列腺癌的诊断具有一定意义[3-4]。Galanin 2型受体(GalR2)广泛分布于中枢和外周神经系统及许多外周组织如输精管、前列腺、子宫、卵巢等，参与肿瘤进展及生长中细胞增殖过程[5-6]。CHUNG等[7]研究显示，前列腺癌组织中编码GalR2基因的甲基化水平明显升高，提示GalR2可能在前列腺癌组织中表达异常。目前GalR2在前列腺癌组织表达方面的研究国内尚未见报道，为此，本研究采用免疫组织化学方法分别检测前列腺增生(BPH)及前列腺癌组织中Galanin及GalR2的表达，探讨其临床意义。

1 资料与方法

1.1 一般资料

收集青岛市市立医院东院区2010年10月—2013年5月确诊的50例BPH、50例未转移前列腺癌(PCa)及30例发生骨转移前列腺癌(BM)的石蜡标本。其中BPH病人的年龄为62～78岁，平均69岁；前列腺癌病人年龄为56～83岁，平均71岁。PCa组病例经诊断未发现淋巴结及远处转移，其中有27例为根治性切除标本，23例为经直肠穿刺标本。BM组均为经直肠穿刺标本，影像学检查发现骨组织受累。

1.2 免疫组化检测方法

石蜡切片脱蜡和水化。磷酸缓冲盐溶液(PBS)冲洗3次，除去PBS，在高压锅中进行高温高压抗原修复(0.01 mol/L柠檬酸抗原修复液7 mL)，喷气后计时2 min，自然冷却。用PBS冲洗3次，除去PBS，每张切片滴加体积分数0.03过氧化氢溶液覆盖标本，室温培养10 min。PBS冲洗3次，加牛血清，室温孵育30 min。甩去血清，滴加一抗，置4 ℃恒温冰箱中培养12 h。PBS冲洗3次，滴加二抗，室温孵育10 min。PBS冲洗3次，滴加DAB缓冲液覆盖标本约5～10 min，光镜下观察染色程度。苏木精复染，脱水干燥，封固，光镜下观察。Galanin及GalR2抗体购自美国Abcam试剂公司，即用型快速免疫组化检测试剂盒及DAB显色剂均购自福州迈新生物技术有限公司。

1.3 统计学分析

应用SPSS 17.0统计软件包进行分析。组间计数资料比较采用χ2检验，Galanin和GalR2相关性分析采用Spearman相关检验，以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 Galanin蛋白的表达

Galanin免疫组织化学染色显示，前列腺癌细胞胞浆中可见大量着黄褐色的颗粒，而在BPH细胞胞浆中Galanin则为低表达或表达缺失。Galanin在PCa组、BM组和BPH组中的阳性表达率分别为68.0%(34/50)、83.3%(25/30)和18.0%(9/50)，PCa组和BM组Galanin的阳性表达率均显著高于BPH组(χ2=25.50、32.75,P<0.01)，但PCa组与BM组比较差异无统计学意义(P>0.05)。

2.2 GalR2蛋白的表达

GalR2免疫组织化学染色显示，BPH细胞胞膜上可见大量着黄褐色的颗粒，而在前列腺癌细胞的胞膜中GalR2则为低表达或表达缺失。GalR2蛋白在BPH组、PCa组、BM组中的阳性表达率分别为80.0%(40/50)、14.0%(7/50)和6.7%(2/30)，BPH组GalR2蛋白阳性表达率显著高于PCa组和BPH组(χ2=43.72、40.43，P<0.01)，但是PCa组与BM组比较差异无统计学意义(P>0.05)。

2.3 Galanin与GalR2蛋白在前列腺癌组织表达的相关性

在50例PCa组织中，Galanin表达阳性34例，GalR2表达阳性7例，二者均不表达9例；在30例BM组织中，Galanin表达阳性25例，GalR2表达阳性2例。Galanin与GalR2蛋白在PCa组和BM组中的表达均呈显著负相关(rs=-0.55、-0.77，P<0.01)。

3 讨 论

目前，前列腺癌的主要治疗方法有体外放射、近距离照射、局部治疗、内分泌治疗及根治性前列腺切除术等。内分泌治疗(如手术和药物去势、雄激素受体拮抗剂及其他抗雄激素药物等)是晚期前列腺癌的主要治疗措施，大多数病人在疾病早期采取内分泌治疗有效，但病程在14～30个月后疗效可能不佳，这种情况可认为前列腺癌已经发展为激素非依赖型。另有少数病人发现前列腺癌的时间较晚，或已出现全身转移，发现时即为激素非依赖型前列腺癌，内分泌治疗对于这类病人疗效不佳，许多研究认为此情况与前列腺癌NED有关[8]。

Galanin最早是从牛的消化系统中被发现、分离的，它是一种神经多肽，在递质释放、摄食、疼痛、生殖、睡眠及觉醒等生理功能的调节中起作用[3]。目前,国内外已有研究显示，在神经内分泌肿瘤中存在Galanin及其相关受体表达，如成神经细胞瘤及垂体肿瘤；Galanin对脑组织中进行的有丝分裂具有促进作用，因此提示其在神经内分泌肿瘤生长及进展过程中可能参与细胞增殖过程。Galanin有3种受体，分别是GalR1、GalR2和GalR3，Galanin主要是通过这3种受体的介导发挥作用[3]。目前3种GalR都已在人神经细胞肿瘤组织被检测出来[9]，而在其他肿瘤各种GalR表达存在很大差异。GalR2可能同时拥有促增殖和抗增殖的作用，GalR2被证实在早期小细胞肺癌组织有促增殖作用[10]；最近的研究表明，GalR2在神经母细胞瘤、嗜铬细胞瘤和头颈部鳞状细胞癌组织表达导致了细胞增殖的抑制[11-13]。GalR2在神经系统的增殖和凋亡方面有重要作用,但其在非神经系统恶性肿瘤的信号机制和功能却是相对未知的[10]。 MISAWA等[14]报道，在头颈部鳞癌细胞株中GalR2蛋白表达水平降低，而非肿瘤细胞中其表达水平稳定；在临床组织标本中，GalR2基因启动子的甲基化水平升高，且与病人无病生存期呈负相关，提示GalR2可能抑制肿瘤的生长，且在肿瘤的靶向治疗及预后等方面具有研究潜力。

本研究结果显示，前列腺癌组织中Galanin蛋白表达水平较高，而在BPH组织中其表达较低；相反，BPH组织中GalR2蛋白表达水平较高，而在前列腺癌组织中其表达较低；Galanin与GalR2蛋白在前列腺癌组织中的表达呈显著负相关。以上结果提示，在前列腺恶性肿瘤组织中，Galanin蛋白表达持续升高，而GalR2的表达降低或缺失；在BPH组织中，两种蛋白的表达情况刚好与恶性肿瘤相反。Galanin蛋白在前列腺癌组织中的表达情况与既往报道结果相似[4]，提示Galanin可能参与了前列腺癌的发病机制，对前列腺癌的诊断有一定临床意义。而GalR2蛋白在前列腺癌组织中表达水平降低，与Galanin蛋白表达水平呈负相关，提示Galanin在前列腺癌组织可能是通过与GalR2之外的两种受体相结合从而发挥生物学作用，也提示Galanin与GalR2蛋白的联合检测对前列腺良恶性病变的诊断具有较好的临床意义。本研究的不足之处在于，Galanin蛋白在前列腺癌组织的表达升高，是否通过上调GalR1和(或)GalR3蛋白的表达发挥作用目前尚不明确，仍需进一步的研究。

综上所述，Galanin和GalR2对良恶性前列腺肿瘤的鉴别及预测前列腺癌预后有一定的意义。然而，细胞内调节蛋白间相互作用是一个复杂的网络，本文结果仍需进一步扩大样本量后在多个相关受体基因及蛋白水平的研究中进行验证、明确。

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