温州地区献血者Kidd血型基因频率调查与输血风险评估

2014-04-13陈荣仓林碧张锋郑璐徐思莉陈通

浙江医学 2014年14期

陈荣仓林碧张锋郑璐徐思莉陈通

陈荣仓林碧张锋郑璐徐思莉陈通

目的调查温州地区献血者Kidd血型基因频率的分布，对Kidd血型不配合的输血风险进行评估。方法采用尿素溶血试验，对36 235例献血者进行Jk（a-b-）稀有血型进行筛选，随机抽取672例献血者的标本采用微量板法进行Kidd血型抗原的鉴定，再用血清学方法对JK（a-b-）表型和可疑的Kidd血型抗原的确认。结果在36 235例献血者中筛选出5例Jk（a-b-）表型，分布频率为0．014%，基因频率为0．012。672例献血者中，Jka和Jkb的基因频率分别为0．44和0．56。Jka和Jkb不配合的概率分别为0．21和0．16，Jka和Jkb不配合的概率合计为0．37。结论Kidd血型系统基因频率符合Hardy-weinberg群体遗传平衡法则；若怀疑为Kidd血型系统抗体时，应采用多种配血方法，以确保输血的安全。

献血者 Kidd血型尿素溶血试验基因频率输血风险

Kidd血型系统在输血中具有重要的意义，其红细胞上有2个常见的抗原：Jka抗原和Jkb抗原；其免疫原性微弱,一般对外来抗原免疫能力强的人才产生抗-Jka和抗-Jkb。通常情况下，是由怀孕或输血致敏后产生Jka或Jkb抗体，偶尔引起中等强度的新生儿溶血病（HDN）[1]，但可引起严重的溶血性输血反应，特别是严重的迟发性输血反应[2-4]。因此，笔者对温州地区献血者Kidd血型抗原的基因频率进行调查，同时评估在随机输血中Kidd血型不配合引起输血反应的风险，现将结果报道如下。

1 对象和方法

1.1 对象采取整体抽样的原则，收集2013-03—09温州地区36 235例献血者，年龄18～55岁，且无亲缘关系的血液标本，均采用乙二胺四乙酸二钾（EDTA-K2）抗凝的静脉血，4℃保存。

1.2 试剂和仪器分析纯尿素试剂（上海达瑞精细化学品有限公司，批号：20120912）使用前配制为2mol/L的溶液（称取尿素125g，溶解于1 000ml的蒸馏水中配制而成）；Liss溶液（上海血液生物医药有限公司，批号：20130701）；抗-Jka试剂血清（英国Millipore公司，批号：BIB1102B）和抗-Jkb试剂血清（德国Bio-Rad公司，批号：2246091）；96孔U型微量板（德国greiner Bio-Rad公司）；Galileo Neo全自动加样仪（美国Immucor公司）；TL-5.0台式平板离心机（上海市离心机械研究所）；振荡器（德国Hettich公司）；KA2200台式离心机（日本久保田株式会社）。

1.3 方法

1.3.1 2mol/L尿素溶血试验[5]对Jk(a-b-)表型的筛选采用微量板法。通过Galieo Neo全自动加样仪处理标本和试剂：将EDTA-K2抗凝血用0.9%氯化钠溶液将每份标本制成2%红细胞悬液（压积红细胞4μl+0.9%氯化钠溶液200μl），并将2%红细胞悬液20μl加入到微量板相应的U型孔中，再分别加入2mol/L尿素溶液100μl，完成标本和试剂分配的微孔板由有传送带自动传出后，置于震荡器上，微震混匀后静置1～2min，在平板离心机上2 000r/min离心1 min，溶血为阳性，反之为阴性。

1.3.2 Kidd血型抗原的检测采用微孔板法。通过Galieo Neo全自动加样处理标本和试剂：将EDTA-K2抗凝血用Liss溶液将每份标本制成2%红细胞悬液（压积红细胞4μl+Liss溶液200μl），并将2%红细胞悬液20μl加入到96孔U形微孔板孔中，分别将抗-Jka和抗-Jkb试剂血清各20μl加入96孔U形微孔板相应孔中，完成标本和试剂分配的微孔板由有传送带自动传出后，置于震荡器，振荡混匀后，置于4℃冰箱60min，其间微量板微振混匀3次，取出微孔板，置于平板离心机2 000r/mim离心1min，微振后肉眼观察结果，发生凝集为有相应的抗原，反之为无相应的抗原。

1.3.3 对JK（a-b-）表型和可疑的Kidd血型抗原的确认采用盐水试管法。取2支洁净试管，分别加入抗-JKa血清和抗-JKb血清各50μl，再加入2%受检者红细胞悬液50μl，混匀，3 500r/min离心18s，肉眼观察结果。用已知的JK（a+b-）和JK（a-b+）红细胞（上海血液生物医药有限公司）作为对照。

1.4 JKa、JKb抗原在随机输血中不配合的概率计算根据Kidd血型基因频率计算随机输血中Kidd抗原不配合的概率[6]。在随机输血中，Jka抗原不配合的概率为Pa=b2（1-b2）；Jkb抗原不配合的概率为Pb=a2（1-a2）。Jka、Jkb抗原不配合概率合计Pa+Pb=2ab（1-ab）（a和b分别代表Jka、Jkb基因频率）。

1.5 统计学处理采用SSPS13.0统计软件。参照文献[7]进行基因频率计算，经χ2检验比较表型分布的期望值与观察值，验证是否符合Hardy-weinberg平衡法则。

2 结果

2.1 Jk（a-b-）表型的筛选使用2mol/L尿素溶血试验从36 235例标本中筛选出5例Jk（a-b-）表型阴性样本，再经盐水试管法血清学鉴定，均确认为Jk（a-b-）表型，分布频率为0.014%，基因频率为0.012。

2.2 Kidd血型抗原检测从36 235例标本中，随机抽取的672例献血者标本共检测到3种表现型：Jk（a+ b-）、Jk（a-b+）和Jk（a+b+），未检测到Jk（a-b-）表现型。基因频率Jka=0.44，Jkb=0.56，Jkb＞Jka，各表型观察值与期望值的差异无统计学意义（P＞0.05），资料符合Hardy-weinberg分布，详见表1。

表1 672例献血者Kidd血型分布和基因频率分布

2.3 Jka和Jkb血型抗原不配合的概率 Jka不配合的概率为0.21，Jkb不配合的概率为0.16，Jka和Jkb不配合的概率合计为0.37。抗-Jka随机输血不配合的概率为0.68，抗-Jkb随机输血不配合的概率为0.80。

3 讨论

1951年Allen等首先报道了Jka抗原，两年后Plaut等报道了其对偶Jkb抗原[8]。1997年，国际输血协会（ISBT）确定Kidd血型3种血型抗原，分别是Jka（Jk1）、Jkb（Jk2）和Jk3（Jk3），存在4种不同的表型：Jk（a+b-）、Jk（a-b+）、Jk（a+b+）和Jk（a-b-）。其中Jk（a-b-）表型是Pinkerton等于1959年首先在菲律宾人中报道的，是由遗传同型的隐性对偶基因形成，JK（a-b-）表型的人没有Jka、Jkb和Jk3抗原；随后有文献报道，罕见Jk（ab-）表型分布频率存在种族和人群的差异，在太平洋的波利尼西亚人群中，分布频率高达0.1%～1.4%，而欧洲人群中，该表型的分布频率极低，在芬兰人群中为0.03%[9]。而东亚人群中，北方人群显示较低的分布频率，如日本（0.0022%）[10]、上海（0.0039%）[11]和长春（0.005%）[12]。而南方人群显示有相对较高的分布频率，如成都（0.022%）[13]、中国台湾（0.023%）[14]和泰国（0.025%）[15]。而温州地区尚无此相关数据。根据Jk（a-b-）表型的人红细胞对2mol/L尿素的溶血有抵抗性，笔者使用2mol/L尿素试验筛查36 235例献血者标本，筛选出5例Jk（a-b-）表型样本，分布频率为0.014%，低于成都、中国台湾和泰国，但明显高于日本、上海和南京长春等其他地区，调查结果提示在不同地域、不同人群之间存在一定的差异。为解决这一类患者的临床输血问题，笔者建议开展Jk（a-b-）稀有表型的筛选，建立红细胞稀有血型档案库的兄弟血站实施全省或全国信息联网，可以有效地解决临床上对该类血型患者输血问题的迫切需求，为抢救患者生命赢得宝贵的时间是非常有意义的。

在不同种族中，Kidd血型分布存在一定的差异，一般在西方人群中Jka＞Jkb（分别为0.50～0.74和0.26～0.50），在东方人群中则Jkb＞Jka（分别为0.50～0.69和0.31～0.50）[16]。笔者用抗-Jka和抗-Jkb血清分别对随机抽取672例献血者的标本采用微量板法进行Kidd血型抗原的鉴定，结果显示温州地区献血者Kidd血型表型分布为Jk（a+b+）＞Jk（a-b+）＞Jk（a+b-），未发现Jk（a+ b-）；基因频率Jkb＞Jka，符合东方人群Kidd血型基因频率的分布规律。经Hardy-weinberg吻合度检验验证，Kidd血型分布状况及基因频率相对稳定，符合Hardyweinberg群体遗传平衡法则。与我国部分地区人群相比较，温州地区与柳州地区（Jka=0.47、Jkb=0.53）[17]、四川地区（Jka=0.45、Jkb=0.55）[18]和上海地区（Jka=0.48、Jkb= 0.52）[19]和成都地区（Jka=0.44、Jkb=0.56）[20]Jka、Jkb抗原基因频率比较接近，与浙江地区（Jka=0.49、Jkb=0.51）[21]、广东深圳（Jka=0.41、Jkb=0.59）[16]和宁波地区（Jka=0.50、Jkb=0.50）[22]比较差距较大，说明Kidd血型系统基因频率存在多态性分布，具有在不同的人群、不同的地域之间存在一定的差异，这可能由于地域不同、群体迁徙和人口流动情况不同而造成。

JK抗体的产生不只是由于Jk（a-b-）、Jk（a+b-）和Jk（a-b+）同样可产生相对应的抗体，Jk（a+b-）可产生抗Jkb抗体，Jk（a-b+）可产生抗Jka抗体[23]。根据本次的调查结果，估计在随机输血中Jka和Jkb抗原之间的不配合输血的风险可能性为0.37。一旦产生抗体，对于抗-JKa来说，随机输血不配合的可能性为0.68，即Jk（a+ b-）和Jk（a+b+）的表型频率之和。同理，对于抗-Jkb来说，随机输血不配合的可能性为0.80，即Jk（a-b+）和Jk（a+b+）的表型频率之和，因此我们在临床输血中应引起高度重视。与大多数血型抗体不同，抗-Jka、抗-Jkb在活体内产生后很快会消失的特性，经输血免疫后鉴定出的强抗体，可能在数周或数月后难以鉴定，这些都是Kidd血型抗体具有临床意义的原因[24]。因此，对有输血史或妊娠史的患者必需进行抗体筛查，怀疑为Kidd血型系统抗体时，实验室可以通过加入新鲜血清提高补体的浓度，以及使用盐水介质法、快速聚凝胺法或者卡式配血法的同时，结合酶法以及经典的抗球蛋白法，采用多种配血方法联合检测此类抗体，防止抗-JKa和抗-JKb漏检，以保障临床输血安全。

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Gene frequency of Kidd blood group and risk assessment of transfusion in blood donors of Wenzhou area

Objective To investigate the gene frequency of Kidd blood group and to assess the risk of mismatched transfusion in Wenzhou area．MethodsBlood samples were collected from 36235 donors in Wenzhou area．The Jk(a-b-) individuals were screened by urea lyses test and Kidd blood group antigens were identified in 672 randomly selected samples by microplate method．The Jk(a-b-)phenotype and suspicious Kidd blood group antigens were confirmed by serological method．ResultsFive individuals with Jk(a-b-)phenotype were screened from 36235 donors,the frequency of Jk(a-b-) was 0．014%and the gene frequency was 0．012．The gene frequency of Jka and Jkb in 672 blood donors was 0．44 and 0．56 respectively．The rate of Jka and Jkb mismatches was 0．21 and 0．16 respectively，with a total mismatch rate of 0．37．ConclusionThe gene frequency of Kidd blood group were consistent with the Hardy-weinberg population-based genetic equilibrium in Wenzhou area．The antibodies of Kidd blood group systems being suspected,it should use a variety of matching method in order to ensure the safety of blood transfusion．

Blood donors Kidd blood group Urea lyses testGene frequency Transfusion risk