冯了性风湿跌打药酒中东莨菪素、东莨菪苷和绿原酸的测定

杨媛媛， 陈志永， 廖立平，3， 张紫佳，3*， 王峥涛，3

（1.上海中医药大学 中药药代动力学实验室， 上海 201203； 2.上海中医药大学 中药研究所 中药标准化教育部重点实验室 上海市中药复方重点实验室， 上海 201203； 3.上海中药标准化研究中心， 上海201203）

冯了性风湿跌打药酒中东莨菪素、东莨菪苷和绿原酸的测定

杨媛媛1， 陈志永2， 廖立平2，3， 张紫佳2，3*， 王峥涛2，3

（1.上海中医药大学 中药药代动力学实验室， 上海 201203； 2.上海中医药大学 中药研究所 中药标准化教育部重点实验室 上海市中药复方重点实验室， 上海 201203； 3.上海中药标准化研究中心， 上海201203）

目的 建立冯了性风湿跌打药酒 （丁公藤、麻黄、桂枝、 泽泻、 厚朴、 木香等） 中主要活性成分东莨菪素、东莨菪苷和绿原酸的测定方法。 方法 采用 HPLC法， 用 Agilent Poroshell120 EC-C18柱对冯了性风湿跌打药酒中东莨菪素、 东莨菪苷和绿原酸进行测定。 用甲醇-0.1%甲酸水作流动相， 梯度洗脱， 体积流量 1 mL/min， 检测波长 360 nm。结果 东莨菪素在 0.008 1 ～0.81 μg范围内线性关系良好， r=0.999 9， 平均回收率为 98.5%， RSD为 0.4%； 东莨菪苷在 0.026 8 μg～2.68 μg范围内线性关系良好， r=0.999 9， 平均回收率为 99.2%， RSD为 1.6%； 绿原酸在0.027 04 ～2.704 μg范围内线性关系良好， r=1， 平均回收率为 98.3%， RSD为 0.8%。 结论 本方法简单可行， 重复性好，可作为冯了性风湿跌打酒的质量控制方法。

冯了性风湿跌打药酒；东莨菪素；东莨菪苷；绿原酸

冯了性风湿跌打药酒为 《中国药典》 2010 年版收载品种，由丁公藤、麻黄、桂枝、泽泻、厚朴、 木香等27味中药组成。 具有疏风通络、 散寒止痛的功效，用于治疗风寒湿痹、四肢麻木、筋骨疼痛、 腰背酸痛［1］。 丁公藤为方中君药， 在我国广西、广东等地区有悠久的药用历史，主要用于治疗风湿性关节炎和关节痛，近年来的研究也发现丁公藤在治疗免疫相关疾病和神经功能障碍方面有一定的作用［2-5］。 其含有的东莨菪 素、 东莨菪 苷和绿原酸为冯了性风湿跌打药酒中主要祛风湿活性成分［6-9］。 《 中国药典》 中 尚未见该 制 剂 中成分的定量测定方法。冯了性风湿跌打药酒及主药丁公藤中东莨菪素 的 测 定方 法 已 经 有 相 关 报 道［10-14］。 但 其主要活性成分东莨菪苷和绿原酸的测定方法尚未有报道。本实验建立东莨菪素、东莨菪苷和绿原酸的测定方法，可作为冯了性风湿跌打药酒的质量控制方法参考。

1 仪器与试药

1.1 仪器 Agilent高效液相色谱仪 （ 美国安捷伦公 司， 型 号 1260 系 列 ）， 电 子 天 平 （ Sartorius BP211D），超声波清洗器 （美国 Branson 公司， 型号 B5510E， 频率 40 kHz）。

1.2 试 药 对 照 品 东 莨 菪 素 （ 批 号 110768-200504） 和绿原酸 （110753-200413） 由中国药品生物制品检定所提供。东莨菪苷为本实验室分离纯化得到， 制备方法参考文献 ［15］报道， 纯度在98%以上。 冯了性风湿跌打药酒 （佛山冯了性药业 有 限 公 司 生 产， 500 m L/瓶， 批 号 分 别 为120033、 120006、 110308、 120058、 120067、120064、120030、 120070、 120061、110297 ）。 甲醇为色谱纯 （Fisher化学试剂公司）， 水为超纯水，其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色 谱 条 件 Agilent Poroshell 120 EC-C18柱（150 mm × 4.6 mm， 2.7 μm）； 流动相 为甲醇（A） -0.1%甲酸水溶液 （ B） 梯度洗脱 （0 ～12 min， A为 15%； 12 ～15 min， A由 15% 递 升 到30%；15 ～25 min， A为 30%；25 ～30 min，A由30%递升到 80%； 30 ～35 min， A由 80%递减至15%； 35 ～40 min， A为 15%）； 检 测 波 长 360 nm； 体积流量 1 mL/min；柱温 25 ℃；进样量 10 μL。 在此色谱条件下， 其他成分对东莨菪素、 东莨菪苷和绿原酸的测定无干扰，对照品、样品及阴性对照色谱图见图1。

图1 混合对照品 （A）， 冯了性风湿跌打药酒 （B） 及阴性对照 （C） 高效液相色谱图Fig.1 HPLC chrom atogram s of m ixed reference substances（ A） ， Fengliaoxing Fengshi Dieda W ine（B） and negative sample（C）

2.2 供试品溶液的制备 精密量取冯了性风湿跌打药酒 25 mL， 置 50 m L量瓶中， 加甲醇稀释至刻度， 摇匀， 过 0.45 μm 微 孔 滤膜， 取 续 滤 液，即得。

2.3 对照品溶液的制备 精密称取东莨菪苷、 东莨菪素和绿原酸的对照品适量，加80%甲醇水溶液溶解制成东莨菪苷 （134.0 μg/mL）， 东莨菪素 （40.5 μg/mL） 和绿原酸 （135.2 μg/mL） 溶液， 即得。

2.4 线性关系考察 取上述对照品溶液， 分别稀释 2 倍、 4 倍、 20 倍、 100 倍。分别进样 10 μL，以峰面积为纵坐标，以对照品进样量为横坐标，进行线性回归，得到回归方程。 东莨菪苷： Y=965X +1.498， r=0.999 9， 在 0.026 8 ～2.68 μg范围内线 性关系良好。 东莨 菪素： Y=265 2X+ 0.453， r=0.999 9， 在 0.008 1 ～0.81 μg范围内线性关系良好。 绿原酸： Y=597X+0.140， r= 1， 在 0.027 04 ～2.704 μg范围内线性关系良好。

2.5 精密度试验 精密吸取东莨菪素、 东莨菪苷和绿原酸对照品溶液各 10 μL， 连续进样 5 次， 测量峰 面 积， 结 果 RSD 分 别 为 0.36%、 0.89%、0.72%， 表明精密度良好。

2.6 稳定性试验 精密吸取同一供试品 （批号110297）溶液10 μL， 分别在第0、 4、8、 12、24、48 h进样测定， 结果表明东莨菪素、 东莨菪苷和绿原 酸 峰 面 积 的 RSD分 别 为 0.74%、 0.98%、0.72%， 表明供试品溶液在 48 h 内稳定。

2.7 重复 性 试 验 取 同 一 批 号 样 品 （ 批 号110297）， 按供试品溶液制备项下制备， 平行制备6份，按以上色谱条件测定，东莨菪素、东莨菪苷和绿原酸峰面积的 RSD分别为 1.42%、 1.35%和1.27%， 结果表明该方法重复性良好。

2.8 加样回收率试验 精密量取已知含有量的冯了性风湿跌打药酒 （批号 110297） 2 mL， 精密加入一定量的东莨菪素、东莨菪苷和绿原酸对照品。按供试品溶液制备项下操作，每一浓度制备3份样品， 按色谱条件测定， 计算回收率， 结果见表1。

表 1 加样回收率试验结果 （n=3）Tab.1 Results of recovery tests（n=3）

2.9 阴性对照 取不含丁公藤的其他 26 味中药制成阴性空白样品，按样品溶液制备方法，制成阴性空白溶液。按上述色谱条件进样测定，在对照品相应位置无对照品峰出现，说明阴性空白样品不干扰样品测定。

2.10 样品测定 分别精密吸取对照品和供试品溶液 （10 批次）各 10 μL， 进样。按上述色谱条件进样，每批次制备样品3次，以外标法计算。结果见表2。

表2 冯了性风湿跌打药酒中东莨菪素、 东莨菪苷和绿原酸测定结果 （n=3）Tab.2 Determ ination of scopoletin， scopolin and chlorogenic acid in Fengliaoxing Fengshi Dieda W ine（n=3）

3 讨论

3.1 对照品制备溶剂的选择 本实验中的对照品制备项下选择用 80%甲醇水溶液溶解对照品， 在用纯甲醇溶液溶解时东莨菪素和东莨菪苷峰形不对称， 所以最后选择峰形对称， 溶解性好的 80%甲醇水溶液溶解对照品。

3.2 检测波长的选择 《中国药典》 2010 年版一部 “丁公藤” 中总东莨菪内酯含量测定项下的检测波长为 298 nm， 但冯了性风湿跌打药酒由 27 味中药提取而成， 组成成分复杂，在 298 nm下检测3 个待测峰受到杂质峰干扰。 本实验选择 360 nm为检测波长，在此波长下干扰较少，有利于更准确地进行定量测定。

冯了性风湿跌打药酒由 27味中药提取而成，成分复杂，质量控制具有一定的难度。质控方法不健全造成了不同批次冯了性风湿跌打药酒中主要活性成分含有量上的差异。目前已有报道的质控方法主要针对其活性成分东莨菪素，往往忽略了其中含有的大量的具有抗炎活性的绿原酸类成分。本研究建立了冯了性风湿跌打药酒中东莨菪素、东莨菪苷和绿原酸的 HPLC联合测定方法。 方法学考察证明此方法简单、重复性好，可用于冯了性风湿跌打药酒的质量控制。

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Determ ination of scopoletin， scopolin and chlorogenic acid in Fengliaoxing Fengshi Dieda W ine

YANG Yuan-yuan1， CHEN Zhi-yong2， LIAO Li-ping2，3， ZHANG Zi-jia2，3*， WANG Zheng-tao2，3
（1.Laboratory of Pharmacokinetics for Chinese Materia Medica， ShanghaiUniversity of Traditional ChineseMedicine， Shanghai201203， China； 2.The MOE Key Laboratory for Standardization of Chinese Medicinesand The ShanghaiKey Laboratory for Compound ChineseMedicines， Instituteof ChineseMateria Medica， Shanghai University of Traditional Chinese Medicine， Shanghai 201210， China； 3.Shanghai R&D Centre for Standardization of Chinese Medicines， Shanghai 201210， China）

Fengliaoxing Fengshi Dieda Wine； scopoletin； scopolin；chlorogenic acid

R927.2

： A

： 1001-1528（2014）03-0551-03

10.3969/j.issn.1001-1528.2014.03.022

2013-04-16

上海市科技启明星跟踪项目 （11QH1402200）

杨媛媛 （1988—） ， 女， 硕士。 E-mail： chenzhiyong0612@sina.com

*通信作者： 张紫佳， 副研究员， 研究方向： 中药活性成分与质量标准。 Tel： （021） 51322513 ， E-mail： 18721608946@163.com