HPLC法同时测定天舒胶囊中阿魏酸和天麻素

2014-04-11武晓红蒲晓辉

中成药 2014年1期

关键词：天麻甲醇供试

赵辉，武晓红，蒲晓辉

（河南大学药学院，河南开封 475004）

HPLC法同时测定天舒胶囊中阿魏酸和天麻素

赵辉，武晓红，蒲晓辉*

（河南大学药学院，河南开封 475004）

目的建立用高效液相色谱同时测定天舒胶囊中阿魏酸和天麻素的方法。方法采用 Thermo C18色谱柱（250 mm×4.6 mm， 5 μm）；流动相为甲醇-1%冰醋酸，梯度洗脱；体积流量为 1.0 mL/min；检测波长为 270 nm；柱温为30 ℃。结果天麻素、阿魏酸分别在 10.125 ～162.0 μg/mL（r=0.999 7）、 5.375 ～86.0 μg/mL（r=0.999 8）范围内有良好的线性关系。平均回收率分别为 98.58%、 99.01% （n=9）， RSD分别为 1.75%、 1.90%。结论该方法简便，稳定准确，重复性好，可用于天舒胶囊的质量控制。

高效液相色谱法；天舒胶囊；天麻素；阿魏酸

天舒胶囊由川芎、天麻两味中药组成，具有活血平肝，通络止痛之功效［1］。多用于血管神经性头痛即偏头痛［2-7］，对急性缺血性脑血管病也有较好的防治作用［8］。川芎主要成分为阿魏酸，有抗血小板凝集、抗血栓、抗菌、消炎、抗肿瘤、抗突变、增加免疫力、清除亚硝酸盐、氧自由基、过氧化亚硝基等功能并具有增强人体精子活力和运动性等药理作用［9-10］。天麻素作为天麻的主要活性成分之一，不仅可以治疗眩晕、头痛，也可作为高血压的辅助治疗［11］，在防治中枢神经系统疾病等方面也发挥着重要作用［12-14］。因此本实验以阿魏酸和天麻素作为指标成分，用高效液相色谱法进行测定，该方法简便，稳定准确，重复性好。

1 仪器与材料

1.1 仪器 Waters高效液相色谱仪， UV1600 紫外分光光度仪（北京瑞利分析仪器公司），pHS23C型精密 pH计（上海雷磁仪器厂）， SB2200 型超声仪（上海超声仪器厂）。

1.2 试剂与试药甲醇（色谱纯）；阿魏酸对照品（中国药品生物制品检定所，批号 0773-9910），天麻素对照品（中国药品生物制品检定所，110807-200205）；娃哈哈纯净水；磷酸（分析纯）；天舒胶囊（批号 100901、 100902、100903）每粒0.34g，江苏康缘药业生产。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 Thermo C18色谱柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；以甲醇（A） -1%冰醋酸溶液（B）为流动相，梯度洗脱［0 ～10 min （13%A）， 10 ～15 min （13% ～40%A）， 15 ～35 min （40% ～70% A）， 35 ～40 min （ 70% ～13%A）， 40 ～43 min（13%A）］；检测波长为 270 nm；柱温为 30 ℃；体积流量为 1.0 mL/min。理论塔板数按天麻素和阿魏酸计算均不低于 2 500。

2.2 溶液的制备

2.2.1 对照品溶液精密称取天麻素与阿魏酸对照品适量，加 70%甲醇，制成每 1 mL含天麻素与阿魏酸分别为 81.0 μg和 43.0 μg的混合对照品溶液。

2.2.2 供试品溶液精密称取天舒胶囊内容物约0.5 g，加 70%甲醇 50 mL，精密称定。超声提取30 min，放冷，用 70%甲醇补足质量，离心，用微孔滤膜（0.22 μm）过滤，即得。

2.2.3 阴性对照液的制备取不加天麻、川芎药材的供试品，按 “2.2.2” 项下方法制备阴性对照溶液。

2.3 系统适用性试验取上述对照品溶液、供试品溶液、阴性对照品溶液，按 “2.1”项下色谱条件进行分析，记录色谱图，见图1。理论塔板数按天麻素和阿魏酸计算均不低于2 500，峰分离良好，阴性对照无干扰。

图1 HPLC谱图Fig.1 HPLC chromatograms

2.4 线性关系考察分别精密量取天麻素、阿魏酸混合对照品溶液用 70%甲醇稀释至含天麻素10.125、20.25、 40.5、81.0、 162.0 μg/mL，阿魏酸 5.375、 10.75、 21.5、 43.0、 86.0 μg/mL的系列混合对照品溶液，注入高效液相色谱仪进行测定，记录峰面积。以峰面积为纵坐标，对照品质量浓度（μg/mL）为横坐标进行线性回归。天麻素和阿魏酸的回归方程分别为 Y=3 378.1X-14 796，r=0.999 7； Y=40 694X+25 749， r=0.999 8。结果表明天麻素在 10.125 ～162.0 μg/mL、阿魏酸在 5.375 ～86.0 μg/mL范围内呈良好的线性关系。

2.5 精密度试验取混合对照品（天麻素 40.5 μg/mL，阿魏酸 21.5 μg/m L），重复进样 6 次，按“2.1”项下色谱条件测定，结果天麻素和阿魏酸峰面积的 RSD分别为 0.73%、 0.67%。

2.6 稳定性试验取样品适量（批号 100901），按 “2.2.2” 项下的方法制备供试品溶液，分别在0、 2、 4、 6、 8、12 h 进行测定，结果天麻素、阿魏酸峰面积的 RSD分别为 1.16%， 1.35%，表明供试品溶液在12 h内稳定。

2.7 加样回收率试验取已知含有量的样品（批号 100901），精密称定，精密加入 2 m L高中低不同质量浓度的混合对照品各 3 份，按 “2.2.2” 项下供试品溶液制备方法制备 9 份样品，按 “2.1”项下色谱条件测定，计算回收率，结果见表1。

表 1 加样回收率试验结果（n=9）Tab.1 Results of recovery tests（n=9）

2.8 样品测定取样品适量，精密称定，按“2.2.2” 项下方法制备供试品溶液，按 “2.1” 项下色谱条件进行测定，记录色谱图，计算天麻素、阿魏酸的质量分数，结果见表2。

表2 样品测定结果（n=3）Tab.2 Determ ination results of sam Ples（ n=3）

3 讨论

《中国药典》 2010 年版中收载的天舒胶囊其指标性成分天麻素和阿魏酸是分别测定的，其中流动相体系不同，溶液的配制方法不同，比较繁琐。本实验设计了梯度洗脱同时测定两个指标性成分的量，操作简单，结果可靠，分析速度快。

3.1 检测波长的选择分别对天麻素和阿魏酸对照品溶液在 190 ～400 nm波长内进行扫描，结果天麻素在 270 nm处有最大吸收、阿魏酸在 322 nm处有最大吸收并且在 270 nm处有较大吸收。通过对两波长下的高效液相色谱图比较，发现在 270 nm处天麻素和阿魏酸色谱峰分离良好，且灵敏度较高，故选择270 nm作为检测波长。

3.2 流动相的选择由于天麻素和阿魏酸两种成分极性差异较大，因此采用梯度洗脱并考察了不同的流动相［15-19］：甲醇-磷酸盐缓冲溶液、甲醇-0.01%磷酸溶液、乙腈-0.05% 磷酸溶液、甲醇-1%冰醋酸溶液。结果表明采用甲醇-1%冰醋酸系统为流动相时，天麻素和阿魏酸峰峰形较好，且保留时间适中，无干扰峰，故本实验采用甲醇-1%冰醋酸溶液作为流动相。

3.3 样品提取方法的选择与优化考察了多种提取方法，如超声提取、回流提取、索氏提取。结果表明，超声提取操作简单，提取时间短，提取率高。又分别对提取溶剂［15，18，20-21］（纯甲醇、 80%甲醇、 70% 甲醇、50% 甲醇、 75% 乙醇、 50% 乙醇）、提取时间（ 20 min、 30 min、 40 min、 50 min、 60 min）进行了筛选。结果表明，采用 70%甲醇超声提取 30 min 为最佳提取条件，提取完全，提取率高。

［ 1 ］国家药典委员会.中华人民共和国药典： 2010 年版一部［S］.北京：中国医药科技出版社， 2010.

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