产超广谱β-内酰胺酶大肠埃希菌和克雷伯菌的检测和耐药性监测

郑 力

（沈阳市第一人民医院，辽宁 沈阳 110041）

产超广谱β-内酰胺酶大肠埃希菌和克雷伯菌的检测和耐药性监测

郑 力

（沈阳市第一人民医院，辽宁 沈阳 110041）

目的监测大肠埃希菌、克雷伯菌产超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）情况及耐药状况。方法对我院2010年1月至2011年6月送检的尿、痰、分泌物标本进行常规培养，采用纸片协同法确证试验检测产ESBLs菌株，然后以纸片扩散法测定分离菌株对抗菌药物的敏感性。结果大肠埃希菌236株，确证试验检出产ESBLs菌66株，检出率27.9%，肺炎克雷伯菌和产酸克雷伯菌58株，确证试验检出产ESBLs菌22株，检出率37.9%。产ESBLs的大肠埃希菌和克雷伯菌对头孢噻吩、头孢唑啉、头孢呋辛、头孢曲松、头孢噻肟、头孢吡肟、氨曲南、庆大霉素、环丙沙星等明显耐药，耐药率达70%以上。结论大肠埃希菌和克雷伯菌ESBLs的检出率高并呈多重耐药性，临床应加强抗菌药物的合理使用及管理。

产超广谱β-内酰胺酶；三代头孢菌素；耐药性

近年来，随着超广谱β-内酰胺酶类抗生素特别是第3、4代头孢菌素的广泛应用，导致革兰阴性菌对其耐药性增加，产超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）菌株的检出率逐年上升[1-2]，其中最主要是大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌。为更好地了解本院产ESBLs的大肠埃希菌和克雷伯杆菌的检出率和耐药情况，控制产ESBLs菌株的传播和流行，监测我院2010年1月至2011年6月临床标本中分离的大肠埃希菌、克雷伯菌产ESBLs情况及耐药状况。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 菌株来源：294株菌株为2010年1月至2011年6月沈阳市第一人民医院住院部送检的尿、痰、分泌物等标本中分离鉴定的革兰阴性杆菌，其中大肠埃希菌236株、肺炎克雷伯菌46株、产酸克雷伯菌12株。标本的留取和保存按操作规程要求。

1.1.2 质控菌株：使用标准株大肠埃希菌ATCC25922、肺炎克雷菌ATCC700603进行质量控制。

1.2 方法

1.2.1 细菌鉴定及药敏试验：使用杭州天和微生物有限公司生产的细菌鉴定管，及北京天坛生产的药敏纸片进行ESBLs菌的初步筛选试验。

1.2.2 ESBLs的确证试验：按NCCLS纸片法做确证试验，经初步筛选后，可疑菌株用头孢噻肟、头孢噻肟/克拉维酸做纸片法药敏试验，35 ℃温育16～18 h，药物纸片中任何一个在加克拉维酸后，抑菌圈直径增大值≥5 mm时，判定为产ESBLs菌株。结果判定按照NCCLS1999年的标准。

2 结 果

2.1 ESBLs菌株的检出率

①294株菌株，经初筛试验选出可疑产ESBLs菌株155株，其中大肠埃希菌117株，肺炎克雷伯菌及产酸克雷伯菌38株。质控均在合格范围内。②294株菌株，经确证试验检出产ESBLs菌株共88株，占待检菌的29.9%（88/294），占初筛阳性菌的56.8%（88/155）。其中大肠埃希菌66株，占待检菌27.9%（66/236），占初筛阳性菌56.4%（66/117）；肺炎克雷伯菌及产酸克雷伯菌22株，占待检菌的37.9%（22/58），占初筛阳性菌的57.9%（22/38），见表1。

表1 大肠埃希菌、克雷伯菌产ESBLs表型确认试验结果

2.2 产ESBLs菌对头孢菌素等抗菌药物的耐药率

产ESBLs的大肠埃希菌和克雷伯杆菌对头孢噻吩、头孢唑啉、头孢呋辛、头孢曲松、头孢噻肟、头孢吡肟、氨曲南、庆大霉素、环丙沙星耐药率在70.0%以上，见表2、表3。

表2 产ESBLs大肠埃希菌对头孢菌素等抗菌药物的耐药率（%）

表3 产ESBLs克雷伯菌对头孢菌素等抗菌药物的耐药率（%）

3 讨 论

近年随着大量广谱抗菌药物的广泛应用，细菌耐药性问题日益突出，其耐药机制较为复杂，如耐药酶的产生、细菌膜通透性的改变及胞质内药物的泵出机制等，而质粒介导的ESBLs是主要耐药机制之一，是造成医院感染和院外耐药菌株传播的主要原因[3-5]。某些革兰阴性菌，尤其是大肠埃希菌和肺炎克雷伯杆菌，它们通过获得的ESBLs裂解青霉素和头孢菌素类抗菌药物的基本结构——β内酰胺环，使其丧失抗菌活性，导致临床治疗失败。范爱民等[6]筛查大肠埃希菌与肺炎克雷伯菌膜孔蛋白基因情况，分析其与耐药的关系，72株大肠埃希菌中，14株产AmpC酶，23株产ESBL，3株膜孔蛋白基因缺失；57株肺炎克雷伯菌中，13株产AmpC酶，19株产ESBL，5株膜孔蛋白缺失，膜孔蛋白缺失株4代头孢均出现耐药。结果说明大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌对头孢类抗生素的耐药机制主要是产AmpC酶和ESBLs，同时膜孔蛋白基因的缺失会造成耐药程度增高。

研究表明产ESBLs菌株不断增多，耐药菌株有逐年上升的趋势，各地方产ESBLs菌株流行情况存在一定程度的差异。毛炎辉等[7]检测720株大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌株，产超广谱β-内酰胺酶阳性率为37.9%；其中大肠埃希菌阳性率为42.1%；肺炎克雷伯菌阳性率为32.6%。汪秀红[8]在儿科病房共收集痰和咽拭子标本共1830份，分离出致病菌624份，检出率为34.09%，其中肺炎克雷伯菌158株，大肠埃希菌178株，两菌总共占致病菌总数的53.85%。本资料显示出我院分离得到的大肠埃希菌和克雷伯菌的检出率分别为27.9%（66/236）和37.9%（22/58），大肠埃希菌和克雷伯菌导致的医院感染以泌尿道和呼吸道为主，临床应引起高度的重视。

近年来随着抗生素的大量应用及对抗菌药物耐药率的比较可以看出，多种抗菌药物的耐药率不断上升，裴碧娜[9]研究验证了以上观点，产ESBLs的大肠埃希菌和肺炎克雷伯杆菌对头孢唑林、头孢孟多、头孢噻肟、哌拉西林耐药率在90.0%以上，其中二者均对头孢噻肟耐药最为严重，耐药率分别为97.3%、96.9%；对头孢曲松、头孢哌酮耐药率在80.0%以上。本文调查通过比较产ESBLs菌株和非产ESBLs菌株对常用抗菌药物的耐药率发现，产ESBLs菌对头孢噻吩、头孢唑啉、头孢呋辛、头孢曲松、头孢噻肟、头孢吡肟、氨曲南、庆大霉素、环丙沙星耐药率在70.0%以上，对头孢他啶、哌拉西林/他唑巴坦的耐药率较低；非产ESBLs大肠埃希菌对头孢噻吩、环丙沙星耐药率较高。结果还可见克雷伯菌对阿米卡星的耐药率达68.2%，而大肠埃希菌对阿米卡星有较高敏感度。在使用抗菌药抗感染过程中必须同时进行ESBLs的常规监测，用以预防ESBLs的产生和播散[10]。

总之，本院大肠埃希菌和克雷伯菌ESBLs的检出率高并呈多重耐药性，应及时掌握它们的临床分布及耐药特点，加强抗菌药物的合理使用及管理，对有效控制产ESBLs菌株传播和流行起到至关重要的作用。

[1] 崔岩,沈定霞,周贵民.产超广谱β内酰胺酶产酸克雷伯菌的医院感染流行分析[J].中华检验医学杂志,2002,25(5):277-280.

[2] 许宏涛,宣天芝,陶凤荣,等.3种非发酵革兰阴性杆菌5年的分离率及耐药趋势回顾[J].中国临床药理学杂志,2004,20(3):219-221.

[3] 沈定霞,罗燕萍,曹敬荣,等.肺炎克雷伯菌质粒编码的AmpC酶和超广谱β-内酰胺酶的表型和基因型分析[J].中华医院感染学杂志,2007,17(6):639-642.

[4] 冯福英,张亚彬,苏丽萍,等.革兰阴性杆菌菌种分布及耐药性和分子流行病学研究[J].实用医学杂志,2006,22(24):2915-2917.

[5] 胡云建,俞云松,张秀珍,等.产超广谱β-内酰胺酶细菌的分子流行病学研究[J].中华医院感染学杂志,2004,14(3):241-244.

[6] 范爱民,田秀红.大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌耐药机制检测[J].山西医药杂志,2011,40(9):877-879.

[7] 毛炎辉,陈庆煜.产超广谱β-内酰胺酶的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌临床分析及耐药性分析[J].检验医学与临床,2011,8(4):409-410.

[8] 汪秀红.儿科住院病房336株肺炎克雷伯菌与大肠埃希菌耐药性分析[J].检验医学与临床,2012,9(1):71-72.

[9] 裴碧娜.产超广谱β-内酰胺酶的大肠埃希菌和肺炎克雷伯杆菌的检测和耐药性分析[J].中国医师进修杂志,2013,36(6):43-44.

[10] 毛敏芝.产超广谱β-内酰胺酶的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌耐药性监测[J].吉林医学,2012,33(7):1411-1412.

Production Testing and Monitoring of Drug Resistance of Extended-spectrum β-lactamase Producing Escherichia Coli and Klebsiella

ZHENG Li
(The First People’s Hospital of Shenyang, Shenyang 110041, China)

ObjectiveMonitoring Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae producing extended-spectrum β-lactamases (ESBLs) cases and drug resistance..MethodsOur hospital from January 2010 to June 2011 inspection of urine, sputum, secretion specimens were routinely cultured using disc synergy confirmatory test to detect ESBLs producing strains, and then isolates the disk diffusion assay for antibacterial drugs sensitivity.ResultE.coli are 236 strains,117 of them may be produce ESBLs bacteria, 66 of them are definite , out-examining rate is 27.9%; Klebsiella pneumonia are 46 strains, acid-producing Klebsiella are 12 strains, 38 of them may be produce ESBLs, 22 of them are definite , out-examining ratte is 37.9%.ConcLusionEscherichia coli and Klebsiella ESBLs detection rate and showed multi-drug resistance, clinical management should be strengthened and the rational use of antimicrobial drugs.

Ρroducing ESBLs; 3rd generation cephorlosporins; Medicine tolerance

R978.1

B

1671-8194（2014）10-0010-02