BRMS1在结肠癌组织中表达意义的研究

刘国伟，邱 钢，张 萍 (广东省深圳市龙岗区横岗人民医院，广东 深圳 518115)

乳腺癌作为女性排名第一的常见恶性肿瘤，其对女性的健康造成了严重的影响［1］。BRMS1对肿瘤的形成与生长不会造成影响，但其能够有效地抵制肿瘤细胞的转移［2］。本研究就针对50例结肠癌患者，采用免疫组化二步法，对结肠癌组织中BRMS1蛋白的表达进行检测，并综合相关研究资料分析BRMS1在结肠癌组织中的表达意义。现报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料:资料选自2005年1月～2012年12月在深圳市横岗人民医院病理科保存的经手术切除结肠癌50例患者的石蜡包埋标本，其中，男27例，女23例;年龄28～71岁，平均(42±5.64)岁;患者在结肠癌术前，均未行放疗、化疗及靶向治疗等。按照2000年WHO结肠肿瘤组织学类型的修订方案，对50例结肠癌患者的标本进行分类，其中14例为黏液腺癌，36例为腺癌;并有37例未出现淋巴结转移，13例出现淋巴结转移。同期选择50例癌旁正常结肠组织标本(距肿瘤边缘≤5 cm)，作为对照组。

1.2 方法

1.2.1 检测试剂:采用蓝基生物技术开发公司供应的DAB显示试剂盒;采用武汉博士德公司供应的BRMS1免抗人单克隆抗体，使用浓度为1∶100;采用福州迈新公司供应的即用型非生物素免疫组化EliVisionTM plus检测试剂盒［3］。

1.2.2 检测方法:所有标本均由浓度为10%的福尔马林固定，并经常规脱水后，采用石蜡包埋。标本切片厚度4 μm，根据免疫组化试剂盒说明书，严格按照正确步骤进行操作。并设阴性与阳性对照，将PBS代替一抗的结肠组织免疫组化染色结果作为阴性对照，再将已知的结肠癌阴性片作为阳性对照［4］。

1.3 评定标准:染色主要位于细胞胞浆或(和)细胞核内，根据许良中等［5］关于基因或抑癌基因的判断标准，对阳性表达进行判断，以阳性细胞的着色深度(着色深度以背景着色进行对比)以及细胞数进行计分。具体评分标准为:⑴染色强度。棕褐色－3分，棕黄色－2分，淡黄色－1分，基本不着色或无色－0分;⑵细胞所占百分比。以随机模式对每例计数5个高倍镜(×400)视野，并确定每个视野的阳性率，取其平均数值。＞50%:－2分，10%－50%:－1分，＜10%:－0分。再将染色强度与细胞所占百分比评分相加，若总评分≥3分，即可判断为阳性;若总评分＜3分，即可判断为阴性。

1.4 统计学方法:所有数据均用SPSS 18.0软件包进行统计分析处理，一般资料用均数±标准差(s)表示，计量资料采用t检验，计数资料采用χ2检验，当P＜0.05时，表示差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 BRMS1在结肠癌中的表达情况:研究组细胞癌组织中的BRMS1蛋白阳性表达率为38.00%，明显低于对照组结肠癌旁正常组织84.00%，组间比较差异具有统计学意义(P＜0.05)，如表1所示。

表1 结肠癌及结肠癌旁组织中BRMS1基因蛋白表达情况［例(%)］

2.2 BRMS1表达与结肠癌临床病理学特征的关系:BRMS1表达蛋白阳性率为53.60%，明显高于肿块大于5 cm者的BRMS1表达蛋白阳性率18.20%，两者比较差异具有统计学意义(P＜0.05)，如表2所示。

表2 BRMS1表达与结肠癌临床病理学特征的关系(例)

3 讨论

恶性肿瘤转移主要是指恶性肿瘤从原发部位经由血液、淋巴、体腔等途径，播散到身体其他部位的一种过程。在恶性肿瘤的转移中，其转移抵制基因起到的作用十分关键，当这类基因的表达下降或者缺失时，则有可能会诱导肿瘤进行转移［6－7］。

在 2000年，Samant等［7］在研究恶性肿瘤过程中，将BRMS1转染到高转移性乳腺癌细胞MDA－MB－435中，通过观察发现，其转移潜能会降低70%－90%左右。在此研究的基础上，Cicek等［8］于2004年对BRMS1传染的乳腺癌细胞MDA－MB－435与高转移乳腺癌细胞MDA－MB－435进比较，发现其转移潜能会降低50%～90%左右，这与2000年Samant等人的研究相近。而在Saunders等［9－10］的研究中显示，BRMS1抵制肿瘤转移的机制有间隙连接蛋白组成变化、间隙连接信息交通等方面参与。BRMS1的转移抵制部分，有可能是经由修复间隙连接蛋白表达和间隙连接信息交通而实现的［11－12］。

Meehan等［13］发现BRMS1集中于细胞核，并且其也有可能包含几块蛋白质－蛋白质相互作用区和一块转录子激活区，因此，推测BRMS1可能与转录子复合物调节转移有关联。在近年的研究中显示，BRMS1的作用也可能与雌激素受体(ER)有关系，ER作为一种新型的雌激素受体，其主要是通过由配基激活的转录调节因子经由招募共激活因子或是共抵制因子，来调动启动子区域含有雌激素应答元件的基因转录［14－16］。因此表明，雌激素受体为相应的转录应答、信号分子等提供了直接的联系，也表明BRMS1行使癌细胞转移抵制的功能，也有可能与雌激素受体有关系［17］。

而通过本次研究发现，研究组结肠癌组织中BRMS1蛋白的表达水平，明显要低于对照组结肠癌旁正常组织;并且有淋巴结转移组织的BRMS1表达水平也要明显低于无淋巴结转移的组织(P＜0.05)。而患者的性别、年龄、分化程度、病理组织学分类等指标与BRMS1蛋白表达无明显关系(P＞0.05)，并与淋巴结转移情况、肿瘤的大小等有关系(P＜0.05)，由此而推测BRMS1的表达下降或缺失，有可能参与了结肠癌的淋巴结转移和远处转移。

综上所述，乳腺癌转移抵制基因1(BRMS1)不仅在乳腺癌中发挥了抵制恶性肿瘤细胞转移的有效作用，也在结肠癌等恶性肿瘤的转移抵制中发挥良好的作用。通过检测对结肠癌组织中BRMS1蛋白的表达，有助于预后的判断。

［1］ Seraj MJ，Samant RS，Verderame MF，et al.Functional evidence for a novel human breast carcinoma metastasis suppressor，BRMS1，encoded at chromosome 11q13［J］.Cancer Res，2000，60 (11):2764.

［2］ Shevde LA，Samant RS，Goldberg SF，et al.Suppression of human melanoma metastasis by the metastasis suppressor gene，BRMS1［J］.Exp Cell Res，2002，273(2):229.

［3］ Zhang S，Lin QD，DI W.Suppression of human ovarian carcinoma metastasis by the metastasis－suppressor gene，BRMS1［J］.Int J Gynecol Cancer，2006，16(2):522.

［4］ Seraj MJ，Harding MA，Gildea JJ，et al.The relationship of BRMS1 and RhoGDI2 gene expression to metastatic potential in lineage related human bladder cancer cell lines［J］.Clin Exp Metastasis，2000，18(6):519.

［5］ 许良中，杨文涛.免疫组织化学反应结果的判断标准［J］.中国癌症杂志，1996，6(4):229.

［6］ Debies MT，Welch DR.Genetic basis of human breast cancer metastasis［J］.J Mammary Gland Biol Neoplasia，2001，6(4) 441.

［7］ Samant RS，Seraj MJ，Saunders MM，et al.Analysis of mechanisms underlying BRMS1 suppression of metastasis［J］.Clin Exp Metastasis，2000，18(8):683.

［8］ Cicek M，Samant RS，Kinter M，et al.Identification of metastasis－associated proteins through protein analysis of metastatic MDA －MB －435 and metastasis－suppressed BRMS1 transfected－MDA－MB－435 cells［J］.Clin Exp Metastasis，2004，21(2):149.

［9］ Saunders MM，Seraj MJ，Li ZY，et al.Breast cancer metastatic potential correlates with a breakdown in homospecific and heterospecific gap junctional intercellular communication［J］. Cancer Res，2001，61(5):1765.

［10］ Locke D.Gap junctions in normal and neoplastic mammary gland［J］.J Pathol，1998，186(4):343.

［11］ Locke D，Perusinghe N，Newman T，et al.Developmental expression and assembly of connexins into homomeric and heteromeric gap junction hemichannels in the mouse mammary gland［J］.J Cell Physiol，2000，183(2):228.

［12］ Phillips KK，Welch DR，Miele ME，et al.Suppression of MDA－MB－435 breast carcinoma cell metastasis following the introduction of human chromosome 11［J］.Cancer Res，1996，56 (6):1222.

［13］ Meehan WJ，Samant RS，Hopper JE，et al.Breast cancer metastasis suppressor 1(BRMS1)forms complexes with retinoblastoma－binding protein 1(RBP1)and the mSin3 histone deacetylase complex and represses transcription［J］.J Biol Chem，2004，9;279(2):1562.

［14］ Robinson－Rechavi M，Escriva GH，Laudet V.The nuclear receptor superfamily［J］.Journal of Cell Science，2003，116(4): 585.

［15］ Sáez JC，Berthoud VM，Branes MC，et al.Plasma membrane channels formed by connexins:their regulation and functions［J］.Physiol Rev，2003，83(4):1359.

［16］ Kelly LM，Buggy Y，Hill A，et al.Expression of the breast cancer metastasis suppressor gene，BRMS1，in human breast carcinoma:lack of correlation with metastasis to axillary lymph nodes［J］.Tumour Bio，2005，26(4):213.

［17］ 翟 羽，欧周罗，邵志敏.BRMS1抗肿瘤转移作用及其机制研究进展［J］.中国肿瘤杂志，2009，18(8):648.