瘦素及瘦素受体在银屑病皮损中的表达

黄朝卫 杨 洋 刘新庭

瘦素及瘦素受体在银屑病皮损中的表达

黄朝卫 杨 洋 刘新庭

目的: 检测银屑病皮损中瘦素及其受体的表达。方法: 40例银屑病患者皮损和18名正常人皮肤标本，采用SP免疫组化法检测皮肤石蜡标本中瘦素的表达，ELISA法检测瘦素受体的表达。结果: 银屑病患者皮损中瘦素表达明显高于正常皮肤(P＜0.01)，主要分布在表皮的胞浆和胞核。患者皮损中瘦素受体含量为103.4±18.7 pg/mL高于正常对照组的76.9±13.5 pg/mL(P＜0.05)。结论:瘦素及其受体可能参与了银屑病的发病。

银屑病； 瘦素； 瘦素受体

瘦素(eptin)是一种脂肪源蛋白激素，具有广泛的生物学效应，介入了多种疾病的发生发展过程，它可诱导人Th1型细胞因子的产生，增强Th1促炎症免疫应答，抑制Th2亚群的细胞活性，通过调节炎症反应，参与免疫功能的发挥。1目前国内外多数文献研究的是血清瘦素水平与寻常型银屑病的相关性。2我们研究了瘦素及其受体在银屑病患者皮损中的表达，探讨它们在银屑病发病中的作用及其意义，为银屑病的治疗提供新思路。

1 材料与方法

1.1 对象 我院2011年10月至2012年7月间临床资料完整的门诊或住院患者40例，均符合《临床皮肤病学》进行期寻常型银屑病诊断标准。入选标准:具有典型的皮损并经病理确诊，除银屑病外，受试者身体健康，至少4周内未使用糖皮质激素、免疫抑制剂、维A酸类药物及其他系统治疗药物，4周内无外用治疗银屑病的药物，不伴有其他类型皮肤病，无自身免疫性疾病、糖尿病、慢性肾衰、肿瘤或其他严重疾患。排除体质肥胖和过度消瘦者。其中男23例、女17例；年龄14～75岁，平均33.18±16.68岁；体重45.5～68.2 kg，平均58.4±10.3 kg；病程3月～21年，平均3.18±4.73年。18名正常对照，取自外科手术者，无皮肤疾病、无肿瘤、无肥胖或过度消瘦者的皮肤，男10名、女8名；年龄10～65岁，平均29.6±8.7岁；体重35.6～71.4 kg，平均55.6±15.1 kg。对符合上述入选标准者详细记录病史资料，PASI评分为1.50～25.5。

1.2 实验方法

1.2.1 材料 瘦素抗体(晶美生物工程有限公司)；免疫组化SP试剂盒，DAB试剂盒(北京中山生物技术有限公司)。

1.2.2 方法 取躯干或四肢典型皮损10%甲醛固定24 h常规石蜡包埋，连续切片5μm厚。同时取绿豆大皮损匀浆器研磨成匀浆，置与液氮罐内保存备用。常规脱水，石蜡包埋、切片，脱蜡至水；3%H2O2孵育10 min，阻断内源性过氧化物酶的活性；枸橼酸缓冲液中92℃热抗原修复15 min，室温自然冷却30 min；抗原修复液修复抗原，滴加山羊血清封闭液10 min，滴加瘦素抗体4℃冰箱过夜；滴加生物素标记二抗，37℃孵育30 min；滴加辣根酶标记链霉亲和素，37℃孵育30 min；DAB显色20 min左右，苏木素复染、脱水、透明、封片，镜检。阴性对照用枸橼酸缓冲液替代一抗和二抗。

银屑病皮损匀浆瘦素受体含量的测定采用双抗夹心酶联免疫吸附试验法，严格依照试剂盒说明书进行。

1.2.3 结果判定 组织切片在光镜下观察细胞中有黄色、棕黄色或褐色颗粒沉着为阳性细胞。按染色强度及阳性细胞数来计算评分:染色强度将无、弱、中、强分别计0～3分；根据阳性细胞数量在观察的同类细胞所占比例，分为4类:0分为阳性细胞≤2%，1分为阳性细胞3%～20%，2分为阳性细胞数21%～60%，3分为阳性细胞数＞60%。综合评价值由两类计分分值的乘积表示，0～3分为(－)，4分为(＋)，6分为(＋＋)，9分为(＋＋＋)。

1.2.4 统计学方法 采用SPSS 11.0软件进行分析。瘦素在银屑病患者与正常皮肤之间的表达差异采用Fisher精确概率法计算，瘦素受体值与正常对照组间的表达采用t检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

结果见表1，图1，2，3。

表1 瘦素在银屑病组及对照组的表达

银屑病皮损中瘦素受体含量103.4±18.7 pg/mL，正常皮肤76.9±13.5 pg/mL，主要分布在表皮的胞浆和胞核。两组比较t＝6.38，P＜0.01。

2 结果

图1 正常皮肤中瘦素的表达(SP，×400)图2 银屑病皮损中瘦素的表达(SP，×100)图3 银屑病皮损中瘦素的表达(SP，×400)

3 讨论

瘦素是肥胖基因编码的一种蛋白激素，Zhang等3于1994年首先从人和小鼠的脂肪组织中分离并克隆出来。现在对瘦素作用的认识早已超越肥胖与消瘦的范畴，它与能量平衡、发育和生殖以及免疫功能、糖尿病、白血病、慢性肾衰竭都有密切关系。瘦素除了由脂肪组织表达外，在许多脂肪外组织如胃黏膜、骨骼肌、胎盘、乳腺上皮、子宫内膜均可发现瘦素的存在。用分子生物学方法检测，发现在骨、间叶细胞、肝、脑、心、胎盘、肾、肌肉、睾丸、卵巢、肠、肾上腺中均有瘦素受体表达。4

在本研究中，我们对瘦素在正常人皮肤和银屑病皮损的表达进行了初步研究，实验结果显示，瘦素在银屑病皮损有不同程度的表达。正常人皮肤中瘦素少量表达，银屑病皮损中瘦素表达强于正常皮肤(P＜0.01)，主要表达于颗粒层、棘层角质形成细胞胞质和胞核中，在角质层角化不全的细胞中表达非常微弱。银屑病皮损中瘦素受体含量与正常皮肤有明显差异(P＜0.05)。说明瘦素受体在皮肤中也是存在的，在银屑病皮损中的含量较正常皮肤高。

银屑病发病机制仍然不十分清楚，但90年代初确立的T细胞在银屑病发病中的核心作用已得到公认。5Th1/Th17共同介导的免疫紊乱在银屑病的发病中起重要作用。6拮抗Th1/Th17细胞因子的生物制剂对银屑病具有肯定的临床疗效，支持上述理论。7Th2细胞具有拮抗Th1细胞的作用，Th2细胞分泌的细胞因子IL－4和IL－6具有抑制Th1细胞分化的作用，同样Th1细胞分泌的细胞因子IL－2和IFN－γ具有抑制Th2细胞分化的作用，因此Th1/Th2细胞失衡被认为是导致银屑病发病的重要基础。

瘦素及受体影响银屑病的机制尚不清楚，研究显示瘦素在调节免疫应答方面扮演重要的角色，瘦素调节T细胞、B细胞、单核－巨噬细胞的功能，对NK细胞的功能和活性也同样重要。8瘦素是类似于IL－2功能的细胞因子，可促进天然T细胞和记忆T的增殖，促进Th1型细胞的细胞活性及产生的细胞因子、抑制Th2亚群的细胞活性及产生的细胞因子、诱导CD4＋T细胞高表达细胞间黏附分子和缓慢抗原，通过调节炎症反应，参与免疫功能的发挥，9导致Th1/Th2细胞失衡，这可能是瘦素影响银屑病发病的机制。减少TNF－α和瘦素，有利于银屑病的改善，10从侧面反映了瘦素与银屑病的关系。瘦素及受体是否还有其他机制影响银屑病发生发展还需作进一步研究。

1Martin－Romero C，Santos－Alvarez J，Goberna R，et al.Human leptin enhances activation and proliferation of human circulating T lymphocytes.Cell Immunol，2000，199(1):15－24.

2王岩，赵玉铭，毕桂姣.血清瘦素水平与寻常型银屑病的相关性研究.中华微生物学和免疫学杂志，2005，25(4):255－256.

3 Zhang Y，Proenca R，MaffeiM，et al.Positional cloning of the mouse obese gene and its human homologue.Nature，1994，372 (6505):425－432.

4Chen SC，Cunningham JJ，Smeyne RJ，et al.Expression of OB receptor splice variants during prenatal development of the mouse.JRecept Signal Transduct Res，2000，20(1):87－103.

5王刚.银屑病研究热点.中华皮肤科杂志，2013，46(3):153－156.

6Coimbra S，Figueiredo A，Castro E，etal.The roles of cells and cytokines in the pathogenesis of psoriasis.Int JDermatol，2012，51(4):389－395.

7 Cai Y，Fleming C，Yan J.New insights of cells in the pathogenesis of psoriasis.Cell Mol Immunol，2012，9(4):302－309.

8 Tian Z，Sun R，Wei H，et al.Impaired natural killer(NK)cell activityin leptin receptor deficientmice:leptin as a critical regulator inNK cell development and ctivation.Biochem Biophys Res Commun，2002，298(3):297－302.

9 Landman RE，Puder JJ，Xiao E.Endotoxin stimulates leptin in the human and nonhuman primate.J Clin Endocrinol Metab，2003，88:1285－1291.

10Hamminga EA，van der Lely AJ，Neumann HA.Chronic inflammation in psoriasis and obesity:implications for therapy. Med Hypotheses，2006，67(4):768－773.

(收稿:2013－05－21 修回:2013－09－11)

The expression of lep tin and its receptor in the lesions of psoriasis

HUANG Chao-wei，YANG Yang，LIU Xin-ting.Department ofDermatology，the Central Hospital of Huang Shi City(Puai District)，435001

Objective:To detect the expression of leptin and its receptor in psoriastic lesions.Methods: The expression of leptin and its receptor in paraffin－embedded tissues from 40 patientswith progressive psoriasis and 18 healthy controlswere detected using streptavidin－peroxidase immunohistochemistrymethods and enzyme－linked immunosorbentassay(ELISA).Results:Theexpressions of leptin was significantly higher in patientswith psoriasis than that in controls(P＜0.01).Leptin receptor levelwas significantly higher in patients with psoriasis than that in controls(P＜0.05).Conclusion:Leptin and its receptormay be involved in the pathogenesis of psoriasis.

psoriasis；leptin；leptin receptor

黄石市中心医院普爱院区，435001