OLYMPUS AU640型全自动生化分析仪性能验证

冯洋，徐上放，鲁静

(上海市闵行区梅陇社区卫生服务中心，上海 200237)

目前，全自动生化分析仪已经成为临床生化检验的常用仪器之一。仪器的性能优劣直接关系到检验质量，同时对仪器的性能进行验证也是《医学实验室质量和能力的专用要求》[1]和《医学实验室质量和能力认可准则》[2]的要求。为了保证检验质量，验证仪器性能，本文选取了几个常用生化项目对本实验室OLYMPUSAU640型全自动生化分析仪的性能进行验证，以对其目前的性能有一个较为客观的评价。

1 材料与方法

1.1 仪器 OLYMPUS AU640型全自动生化分析仪。

1.2 试剂、校准品及质控品 试剂、校准品为原装配套产品；质控品为美国BECKMAN-COULTER公司产品，质控品批号分别为高值：M1303；低值：M1301。

1.3 样本来源 BECKMAN-COULTER质控血清；本院就诊患者或正常体检者无溶血、无黄疸、无脂血的新鲜血清；生理盐水。

1.4 精密度验证实验 参考美国临床实验室标准化协会(CLSI)EP5-A2[3]文件，选择2个水平的质控血清作为批内和批间精密度的待测标本。批内精密度：在室内质控均在控的前提下，将两个浓度水平的质控品随机插入病人样本中进行检测，一批内连续测定20次。批间精密度测定：在室内质控均在控的前提下，每天将两水平浓度的质控品随机插入病人样本中检测两次，每次至少间隔两小时，共测定20d。将以上检测结果进行统计分析，计算批内、批间精密度和标准差。批内精密度以小于CLIA’88允许误差的1/4为标准；批间精密度以小于CLIA’88允许误差的1/3为标准。

1.5 正确度验证实验 参考CLSIEP15-A2[4]文件。对上海市临床检验中心2013年第一次室间质评发放的5个不同批号的室间质控品进行检测，计算检测值和“靶值”的相对偏倚(SE%)。SE%≤1/2CLIA’88允许总误差(TEa)为可接受。

1.6 线性范围验证实验 参考CLSIEP6-A2[5]文件。以患者样本为高值样本(H)，生理盐水为低值样本(L)，其中高值检测物质含量尽量接近说明书线性范围的上限，在没有高浓度临床样本的情况下，通过在仪器上设置增加样本量来完成。按1L、0.2H+0.8L、0.4H+0.6L、0.6H+0.4L、0.8H+0.2L、1H将H和L配制成6个系列浓度样本，用OLYMPUS AU640型全自动生化分析仪对系列血清进行检测，在最短的时间内每个标本重复测定2次。记录检测结果，求出每个浓度2次测定的均值，记录结果。观察收集到的数据有无明显的离群点，如有，应查找原因。若有明了原因，纠正后修正数据，如果没有明显原因，则应重新检测全部数据。对测量数据作精密度检验：计算CVr，将CVr与设定的不精密度目标进行比较，本文设定不精密度目标为CLIA’88允许误差的1/4。如果CVr超过设定目标，则可能是精密度太低，表明测量数据的精确度不符合线性判断的要求。反之，则表示符合。以理论值为横坐标，以实测值的均值为纵坐标进行回归分析，计算一阶、二阶、三阶回归方程及回归标准误。对二阶(b2)三阶(b2、b3)回归系数作t检验，如果三个回归系数与0比较均无显著性差异，即差异无统计学意义(P>0.05)，判断为一级线性，否则判断为统计学标准的非线性。当存在非线性时，根据回归分析的标准误大小，以最小者确定为最适多项式。当数据线性模型为非一次多项式时，则需计算最适多项式在每个实测点上的线性偏差，与设定目标比较，以评价每个点的非线性程度。

1.7 参考区间验证实验 参考CLSIC28-A2[6]文件。选择2O名健康体检合格者为第一组实验对象，第一组实验对象的测定值如果有95%以上在所选的参考值范围内，所选用的参考区间便可以接受。假如有2名或2名以上检测结果在参考区间以外，则必须重新收集第2组数据重新检测，第2组检测数据不超过2名结果在参考区间以外，可以认为验证有效；假如第2组检测数据超过2名结果在参考区间以外，先检查检测系统性能、检测程序的正确，然后考虑该项目是否具有人群生物特性，做进一步调查，重新选择合适的生物参考区间，必要时自建生物参考区间。

1.8 统计学处理 检测所得的数据采用SPSS16.0和Excel 2003进行统计学处理。

2 结果

2.1 精密度验证结果 OLYMPUSAU640型全自动生化分析仪对质控血清各验证项目进行测定，计算批内、批间精密度结果显示，各检测项目的批内精密度均小于CLIA’88允许误差的1/4；批间精密度均小于CLIA’88允许误差的1/3。精密度验证结果见表1。

表1 批内、批间精密度测定结果

2.2 正确度验证结果 正确度验证结果见表2，验证结果显示，各项目不论是平均偏移还是在各个不同的医学决定水平上的偏移，偏倚结果均明显低于上海市临检中心允许的偏倚范围。

表2 正确度验证结果(%)

2.3 线性范围验证结果 由于高值临床样本较难获得，TP、GLU以及磷采用了将样本量增加一倍的方法进行验证。经实验，没有发现明显的离群值，各项目的不精密度均符合线性评价要求。多项式回归分析结果显示(见表 3)，对二阶(b2)、三阶(b2、b3)回归系数作t检验，三个回归系数差异都无统计学意义(P>0.05)，判断各项目均为一级线性，可直接判断呈线性。线性范围验证结果见表4。

2.4 参考区间验证结果 AST、CHOL、P各有一名实验对象的验证结果超过现行参考区间上限，TP有一名实验对象的检测结果低于现行参考区间下限，其余各项目均在现行参考区间内，因此可判定各项目的参考区间有效。结果见表5。

表3 线性范围验证多项式回归分析结果

表4 线性范围验证结果

表5 生物参考区间验证结果(n=20)

3 讨论

精密度是指分析方法对同一样本产生重复测量相同值的能力[7]，从测量误差的角度来说，精密度所反映的是测得值的随机误差，通常用不精密度表示。因为临床上在通常情况下仅对标本作一次检测就发出报告，因此检测系统的精密度就显得非常重要。实验结果表明，批内精密度和批间精密度分别小于1/4CLIA’88的允许范围和1/3 CLIA’88的允许范围。

正确度是指大批检测结果的均值与真值的一致程度[8]。从测量误差的角度来说，正确度所反映的是测得值的系统误差，通常用偏移表示。根据上海市临床检验中心室间质评进行的正确度比对试验显示，正确度符合临床要求。

线性范围评价是观察一种检测方法或一个检测系统的检测范围[7]。因此，线性范围是评价试剂盒性能的重要指标之一，在某种意义上，线性范围越宽，该试剂盒就越适用于临床[9]。但由于任何方法的线性范围都是有限的，所以对一个检验项目而言，其线性范围起码应该覆盖本项目的医学决定水平和常见疾病的检测值。基于此，对线性范围进行验证是性能验证的重要指标，这将有助于在检测系统应用到临床前，帮助工作人员发现线性问题，以使得检测结果准确和可靠。线性范围验证实验结果显示，各项目在验证范围内均呈一级线性，相关系数(r)均大于0.975,b在0.97~1.030范围内，截距较小。说明各项目线性范围验证实验结果好，标本在本实验的高、低值范围内的线性理想。

生物参考区间是指某项检查结果在正常人群中的分布范围，是解释检验结果分析检验信息的一个基本尺度和依据，临床实验室无论开展什么项目都必须首先制定合理的生物参考区间。CLSI C28-A2文件认为每个实验室、不同检测系统在检测同一检测项目时都建立各自的生物参考区间不现实，同时阐明可以使用试剂说明书和权威书刊推荐的生物参考区间或转移其他实验室的生物参考区间，并推荐一个简便的验证方法可以确定引用的生物参考区间是否合适。结果显示，各验证结果均符合实验要求，因此认为本实验室所使用的参考区间符合临床要求。

综上所述，本实验室OLYMPUSAU640型全自动生化分析仪性能良好，可以满足临床的质量要求。

[1]北京市医疗器械检验所.中国合格评定国家认可委员会.GB／T22576-2008医学实验室质量和能力的专用要求[S].北京:中国标准出版社,2008:1-36.

[2]中国合格评定国家认可委员会.CNAS-CL02医学实验室质量和能力认可准则[S].北京:中国合格评定国家认可委员会,2008:1-36.

[3]Clinical and Laboratory Standards Institute.Evaluation of precision performance of quantitative measurement methods[S].EP5-A2,CLSI,2004:1-28．

[4]Clinical and Laboratory Standards Institute.User demonstration of performance for prevision and accuracy[S].EP15-A2,CLSI,2004:1-15.

[5]Clinical and Laboratory Standards Institute.Evaluation of the linearity of quantitative measurement procedures[S].EP6-A2,CLSI,2003:1-47.

[6]Clinical and Laboratory Standards Institute.How to define and determine reference intervals in the clinical laboratory[S].C28-A2,CLSI,2000:1-31.

[7]中华人民共和国卫生部医政司.全国临床检验操作规程 [M].第3版.南京:东南大学出版社,2006:59-62.

[8]冯仁丰.临床检验质量管理技术基础[M].第2版.上海:上海科学技术文献出版社,2007:78.

[9]吕赛平,刘琴,邹学森.应用EP6-A2方法验证血糖试剂盒的线性范围[J].实验与检验医学,2011,29(1):45-46.