紫外－可见分光光度法测定米非司酮阴道环含量

段雪艳 王介东 宁美英

国家人口计生委科学技术研究所（北京，100081）

米非司酮是孕激素受体拮抗剂。临床上广泛应用于紧急避孕，以及肿瘤、子宫肌瘤、乳腺癌的治疗［1］等。目前市售均为口服制剂，其缺点是具有显著的“首过效应”［2］，且若需要长期用药，则患者的顺应性较差。为了提高药物的生物利用度和患者的依从性［3－4］，扩大临床用药范围，本实验室制备了缓释长效的米非司酮阴道避孕环［5］（简称阴道环），即以硅橡胶弹性体为药物载体，先将药物研细过筛，再和硅橡胶颗粒充分混匀，通过模具压制和高温硫化，药物均一分布于阴道环内。米非司酮阴道环的硬度为60HA，外径为50mm，横截面直径为4.6mm。为了对米非司酮阴道环的质量进行控制，本文建立了米非司酮阴道环含量测定的紫外－可见分光光度法。

1 材料与方法

1.1 仪器与材料

Lambder 35紫外－可见分光光度计（美国Perkin Elmer公司）；米非司酮阴道环（自制，3批批号：20111102，20111117，20111122）；米非司酮对照品（北京紫竹天工科技有限公司，批号：20100701，含量99.2%，高效液相色谱法测定）；甲醇为色谱纯。

1.2 试验方法

1.2.1 溶液制备方法 对照品溶液制备：精密称取米非司酮对照品25mg于50ml量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得浓度为0.5mg／ml的米非司酮对照品溶液。精密量取2ml于100ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，即得浓度为10μg／ml的米非司酮对照品溶液。供试品溶液制备：取米非司酮阴道环，切碎（厚度约0.5mm），精密称取1.0g（相当于米非司酮12.5mg），置于100ml锥形中，加入25ml甲醇，室温下磁力搅拌12h，滤过，取续滤液1ml于50ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。阴性对照为不含米非司酮的阴道环，阴性供试品溶液制备同供试品溶液。

1.2.2 最大吸收波长及线性范围 分别取米非司酮对照品溶液、供试品溶液和阴性供试品溶液，以甲醇为空白，在200～400nm波长范围内扫描，根据吸光度曲线判断最大吸收波长。分别精密量取0.5 mg／ml米非司酮对照品溶液1.0、1.6、2.0、2.4、3.0 ml于100ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，在310nm波长处测吸收度，以吸收度（A）对浓度（C）计算线性回归方程，考察米非司酮的线性范围。

1.2.3 精密度及稳定性试验 分别精密量取0.5 mg／ml米非司酮对照品溶液适量，配制高、中、低浓度溶液（5.0、10.0和15.0μg／ml），每个浓度平行3份样品，分别进样，考察日内和日间精密度。取10.0μg／ml米非司酮对照品溶液，分别于0、1、2、4、8、24h测定其吸光度，考察米非司酮溶液的稳定性，即相对标准偏差［RSD%＝（标准偏差／平均测定值）×100%］。

1.2.4 回收率 每批称取3份1.0g米非司酮阴道环碎片，置于100ml锥形瓶中，加入米非司酮对照品7.5、12.5和17.5mg，研磨均匀，加25ml甲醇，密封，室温下磁力搅拌提取12h。滤过，取续滤液1 ml于100ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，在310nm波长处进行测定，计算回收率。

1.3 含量测定

制备米非司酮对照品溶液和3批供试品溶液，每批平行3份样品，分别在310nm波长处测定吸收度，采用外标一点法计算米非司酮阴道环含量。

2 结果

2.1 最大吸收波长

对照品溶液和供试品溶液均在310nm波长处有最大吸收，而空白辅料（PVP和空白硅橡胶载体）在此波长下无吸收，故选择310nm作为检测波长。

2.2 线性范围

米非司酮在5.0～15.0μg／ml的浓度范围内时吸光度与浓度有良好的线性关系。回归方程为A＝0.0523C－0.0231，r＝0.9999。米非司酮的最低检测限（LOD）为2μg／ml，最低定量限（LOQ）为5μg／ml。

2.3 精密度

日内、日间精密度均＜2%，说明本方法在低、中、高3个浓度的精密度良好。见表1。

2.4 稳定性

米非司酮在24h内稳定，RSD为0.72%。

2.5 回收率

结果见表2，其平均回收率为（100.23±0.38）%。表明本方法的回收率符合要求，即RSD＜2%。

表1 样品的日内和日间精密度

表2 米非司酮的加样回收率

表2 米非司酮的加样回收率

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2.6 含量测定

3批阴道环的米非司酮含量分别为（90.67±0.50）%、（91.78±0.72）%和（93.17±0.34）%，平均含量为（91.87±1.25）%，均符合要求（药审中心制定的药品研发标准为90%～110%）。

3 讨论

米非司酮不仅具有避孕作用，同时也可以治疗其他妇科疾病，如子宫肌瘤和子宫内膜异位症等，其口服制剂具有严重的“首过效应”，生物利用度低，且患者长期使用的耐受性较差，因此本课题组开发了一种低剂量的缓释或控释米非司酮阴道环，预防女性非意愿妊娠和治疗妇科疾病等。米非司酮阴道环是以硅橡胶为载体的一种长效缓释制剂，它能够缓慢、长期、近恒速地释放药物，从而避免了肝脏的“首过效应”，并维持了血药浓度的相对稳定，具有安全、可靠、有效、依从性好等特点。

为了对米非司酮阴道环的质量进行控制，本文建立了紫外－可见分光光度法（对照品法）。经过线性范围、精密度、稳定性和回收率等的考察，结果证实本方法可以用于米非司酮阴道环的含量测定。文献中报道的米非司酮含量测定方法包括非水滴定法、高效液相色谱法、旋光法和紫外－可见分光光度法（吸收系数法）［6－10］。与这些方法相比较，本文建立的紫外－可见分光光度法（对照品法）具有经济环保、操作简便、测定快速和结果准确的特点，可用于米非司酮阴道环的快速质量检验，尤其适用于基层检验所与制药厂，可以用于米非司酮阴道环的质量控制与检验，以及米非司酮阴道环生产过程的质量监督。

［1］ Spitz IM.Progesterone antagonists and progesterone receptor modulators［J］.Steroids，2003，12（10）：1693－1707.

［2］ Quereux C，Raimond E，Graesslin O.Oral contraceptives and non－oral contraceptives：realities［J］.J Fynecol Obstet Biol Reprod（Paris），2009，5（38）：69－83.

［3］ 周菊贤，刘晓瑷.新型非口服激素避孕方式的研究进展［J］.国际生殖健康／计划生育杂志，2009，28（4）：245－248.

［4］ Fine PM，Tryqqestad J，Meyers NJ，et al.Safety and acceptability with the use of a contraceptive vaginal ring after surgical or medical abortion［J］.Contraception，2007，5（75）：367－371.

［5］ 陈凯，段雪艳，刘颖，等.米非司酮阴道环的制备及体外释放度研究［J］.中国新药杂志，2013，22（2）：110－114.

［6］ 国家药典委员会.中华人民共和国药典（二部）［S］.北京：中国医药出版社，2010：284.

［7］ 鄂立勋，魏强，朱晶，等.应用HPLC测定米非司酮的含量［J］.中国医药指南，2010，8（25）：51.

［8］ 段雪艳，张莹，陈凯，等.米非司酮阴道环的含量及有关物质检测方法的研究［J］.中国新药杂志，2013，22（5）：598－601.

［9］ 国家药典委员会.中华人民共和国药典（二部）［S］.北京：化学工业出版社，2005：209.

［10］ 吴翠芳.旋光法测定米非司酮胶囊的含量［J］.医学临床研究，2007，24（5）：817－818.