链霉亲和素-生物素放大免疫酶法在鼻咽癌诊断中的临床应用

2014-03-27周珣，吴皖

医学综述 2014年3期

周珣，吴皖

(孝感市中心医院检验科，湖北孝感 432000)

鼻咽癌是临床常见的头颈部恶性肿瘤性疾病，鼻咽癌在全球大多数地区和国家并不呈现高发态势，主要的发病地区集中于亚洲，其中中国是鼻咽癌的高发国家，鼻咽癌在我国广东地区的发病率已经达到20/10万[1]，而在上海地区发病率为4.7/10万[2]，由于我国人口基数较大的原因，每年新增的鼻咽癌患者人数在10万人次之上，发病情况在恶性肿瘤性疾病中不容乐观，晚期鼻咽癌可侵犯患者的脑神经、三叉神经并且可以影响患者正常的视力和听力，远处转移可造成患者死亡。目前针对鼻咽癌的治疗以放射治疗为主，早期鼻咽癌的放射治疗效果较好，调强放疗可以有效地提高鼻咽癌的区域控制率，增强患者的远期疗效，从而达到改善预后的目的[3]，因此早期对鼻咽癌做出诊断对于鼻咽癌患者的预后具有十分重要的意义，因此本研究分析链霉亲和素-生物素放大免疫酶法在鼻咽癌检测当中的临床价值。

1 资料与方法

1.1一般资料选取2009年3月至2013年1月在孝感市中心医院就诊具有高度鼻咽癌危险的患者326例作为研究对象，其中男219例、女107例，年龄31～75(48.29±4.86)岁，在入组的326例患者中，有鼻咽癌家族史者201例，吸烟者198例，EB病毒(Epstein-Barr virus)感染者162例，居住地环境污染严重者157例，患者职业有接触有害物质危险者135例。排除存在严重肝、肾功能不全，严重血液系统疾病，自身免疫性疾病和临床资料不全的患者。在进行血清学检测后，通过酶联免疫吸附测定法检测EB病毒抗体，经过病理学确诊为鼻咽癌者117例，无鼻咽癌的高危患者209例。

1.2方法链霉亲和素-生物素放大免疫酶法：将患者血清和磷酸缓冲液(phosphate buffered solution，PBS)按照1∶5的比例进行稀释，之后将10 μL血清置于六孔板中，在37 ℃的条件下孵育50 min，再用PBS进行冲洗，在充分清洗之后将生物素化学抗人IgA按照10 mL/L放入孔中，在孵育50 min之后，继续用PBS进行冲洗，在充分清洗之后将链霉亲和素(浓度为20 mL/L)放入孔中，再孵育50 min，之后用PBS进行冲洗，最后加入二氨基联苯胺溶液，显色5 min后采用显微镜观察。常规免疫酶法：具体参照潘少霞等[4]的免疫酶法。

1.3观察指标对链霉亲和素-生物素放大免疫酶法与常规免疫酶法在鼻咽癌患者与鼻咽癌高危人群但无鼻咽癌患者的IgA/病毒壳体抗原(viral capsid antigen，VCA)和IgA/早期抗原(early antigen，EA)的检出率进行观察。

1.4统计学方法应用SPSS 13.0统计学分析软件对数据进行分析，计数资料采用χ2检验和确切概率法，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1两种方法对确诊鼻咽癌患者IgA/VCA和IgA/EA的检验结果链霉亲和素-生物素放大免疫酶法的IgA/VCA和IgA/EA检出阳性率显著高于常规免疫酶法的检出阳性率，比较差异均有统计学意义(P<0.05)(表1)。

表1 两种方法对确诊鼻咽癌患者IgA/VCA和IgA/EA的检验结果比较 [例(%)]

IgA：免疫球蛋白A；VCA：EB病毒壳抗原；EA：早期抗原

2.2两种方法对鼻咽癌高危人群但无鼻咽癌患者IgA/VCA和IgA/EA的检验结果链霉亲和素-生物素放大免疫酶法的IgA/VCA和IgA/EA检出阳性率与常规免疫酶法的检出阳性率比较，差异无统计学意义(χ2=0.179，P>0.05)(表2)。

表2 两种方法对鼻咽癌高危人群IgA/VCA和IgA/EA的检验结果比较 [例(%)]

IgA：免疫球蛋白A；VCA：EB病毒壳抗原；EA：早期抗原

3 讨论

鼻咽癌是一种高发于我国南部地区的恶性肿瘤，目前对于鼻咽癌的发病机制还不清楚，但是早期诊断可以明显改善鼻咽癌患者的预后，放射是目前治疗鼻咽癌最为有效的方式之一，调强放疗的出现更是在减少了放疗并发症的基础上提高了鼻咽癌的治疗效果[5]，虽然鼻咽癌的放疗敏感性较强，但是鼻咽癌的远处转移仍然是放疗失败和患者死亡的主要原因[6]。因此，在早期对鼻咽癌进行诊断和及时治疗是对鼻咽癌患者预后改善的关键。EB病毒人类疱疹病毒，在大量研究中被证实为鼻咽癌发病高度相关的危险因素[7-8]。有研究发现，在鼻咽癌患者的血清当中EA和VCA水平较高[9]。免疫酶法对于IgA/VCA和IgA/EA的检测是临床上常用的早期诊断鼻咽癌的血清学检测方法，免疫酶法虽然能够在一定程度上对鼻咽癌进行早期筛查，但是免疫酶法仍然存在缺乏客观性和精确性的缺点；而在临床检验学发展中出现的酶联免疫吸附测定法，对鼻咽癌进行早期筛查，其阳性率不高，限制了其使用[10]。因此，如何寻找一种新的检验方法就显得尤为必要。

链霉亲和素是一种在链霉菌中分泌的蛋白质，链霉亲和素所拥有的特点包括其相对分子质量较小(65×103)，等电点显示其表现为酸性；同时，链霉亲和素并不附带糖基，这可以促使链霉亲和素表现为更高的特异性吸附，1个链霉亲和素分子可以同时特异性吸附4个生物素分子，并且彼此之间结合稳定，而与此同时生物素分子又可以与特异性的抗体进行结合，在此过程中便形成了一个生物反应抗体的有机系统。吴在荣等[11]利用链霉亲和素-生物素免疫分析法对人胰岛素进行分析后发现，其回收率、灵敏度、线性范围和批间变异系数均理想地符合临床要求，同时操作也较为简便。王金龙等[12]发现，链霉亲和素-生物素免疫分析法测量人甲胎蛋白的回收率、灵敏度、线性范围和批间变异系数较为理想。本研究发现，采用链霉亲和素-生物素放大免疫酶法对117例鼻咽癌患者的IgA/VCA以及IgA/EA检出率均高于常规免疫酶法在209例未患鼻咽癌患者当中，链霉亲和素-生物素放大免疫酶法的IgA/VCA检出率与常规免疫酶法无差别，IgA/EA的检出率则稍高于常规免疫酶法，这可能与此时为非鼻咽癌患者有关。

综上所述，链霉亲和素-生物素放大免疫酶法能够较常规免疫酶法更为灵敏地诊断鼻咽癌。

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