紫外-可见分光光度法动态分析承德地区山楂叶总黄酮的含量

杨少冉，高 菁，陈艳昆，潘海峰，赵胜男

(1．承德医学院中药学系2011级，河北承德 067000;2．指导教师)

学生园地

紫外-可见分光光度法动态分析承德地区山楂叶总黄酮的含量

杨少冉1，高 菁1，陈艳昆1，潘海峰2，赵胜男2

(1．承德医学院中药学系2011级，河北承德 067000;2．指导教师)

山楂叶;紫外-可见分光光度法;采收期;总黄酮

山楂叶为蔷薇科植物山里红(Crataegus pinnatifida Bge. Var. Major N. E. Br.)或山楂(Crataegus pinnatifida Bge.)的干燥叶，夏、秋二季采收[1]。山楂叶中所含的黄酮类成分具有降压、降糖、降脂、强心等多种药理作用，尤其对缺血性心肌损伤有明显的保护作用[2]。山楂叶早在东晋时代就有入药治病的记载，本草纲目谓山楂叶煮汁治漆疮，现在已经被2010版《中华人民共和国药典》收载[3]。山楂叶主产于河北承德、兴隆以及辽宁、山东和山西等地[4]。不同产地、不同采收期的中药材，所含有的化学组分以及含量可能会有所不同，因此，考察山楂叶的最佳采集期对提高山楂叶的利用具有重要的科学意义。本研究应用楂叶的紫外-可见分光光度法测定不同采收期承德产山楂叶中总黄酮的含量，同时进行动态分析，并确定了最佳采收期，为山楂叶的质量评价提供了科学依据。

1 仪器与试剂

8453 紫外-可见分光光度仪，美国惠普公司;AG-245电子分析天平，瑞士梅特勒公司;KQ-700型超声波清洗器，昆山市超声仪器有限公司。芦丁对照品(批号:100080-200707)，中国药品生物制品检定所;供试品山楂叶采自承德(5-11月每月采集一次，采摘后立即暴晒、晾干)由河北民族师范学院董建新教授鉴定为蔷薇科山楂属植物山楂(Crataegus pinnatifida Bge.)的干燥叶;其余试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 对照品溶液的制备 精密称量在120℃干燥至恒重的芦丁对照品25mg，置50ml量瓶中，加无水乙醇适量，超声溶解，放冷，加无水乙醇至刻度，摇匀。精密量取上述溶液20ml，置50ml量瓶中，加纯净水稀释至刻度，摇匀，即得对照品溶液(每1ml含无水芦丁0.2mg)。

2.2 供试品溶液的制备[1]精密称量山楂叶粉末(过60目筛)1g，置索氏提取器中，加三氯甲烷45ml水浴回流提取至提取液无色(约6h)，弃去三氯甲烷，药渣在通风橱中挥去三氯甲烷，加甲醇45ml继续提取至溶液无色(约4h)，把提取液置于蒸发皿中蒸干，残渣加50.0%稀乙醇溶解，所得溶液转移至50ml量瓶中，加50.0%稀乙醇稀释至刻度，摇匀、滤过、取续滤液。精密量取续滤液5ml，移置25ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀。所得溶液精密量取2ml，置25ml量瓶中，作为供试品溶液。

2.3 标准曲线的制备[1]精密量2.1中的对照品溶液0ml、1ml、2ml、3ml、4ml、5ml、6ml，分别置于25ml量瓶中，分别加纯净水至6ml;加5%亚硝酸钠溶液1ml，摇匀，放置6min;加10%硝酸铝溶液1ml，摇匀，放置6min;再加氢氧化钠试液10ml，加水稀释至刻度，摇匀后放置15min。以不加对照品溶液为空白液，采用紫外-可见分光光度法，在波长500nm处测定吸光度，以吸光度值为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线方程，Y=9.7083X-0.0082，r=0.9999。

2.4 精密度试验 精密量2.1中对照品溶液2ml，6份，按2.3标准曲线制备项下的方法，自“加水至6ml”起测定吸光度值，RSD值为1.9%，表明本方法精密度良好。

2.5 重复性试验 取山楂叶粉末6份，按照2.2的方法制备供试品溶液，按2.3的方法，自“加水至6ml”起测定吸光度，RSD值为1.2%，表明本方法重复性较好。

2.6 稳定性试验 取同一批山楂叶粉末，按2.2的方法制备供试品溶液，按2.3的方法，自“加水至6ml”起依法处理。分别于显色后15、30、45、60min时测定吸光度值，RSD值为0.98%，表明样品溶液在60min内稳定性良好。

2.7 不同采收期山楂叶中总黄酮的含量 分别取承德产不同采收期的山楂叶粉末1g，每期山楂叶取3个样本，按2.2的方法制备供试品溶液，按2.3的方法，自“加水至6ml”起测定吸光度，根据标准曲线计算山楂叶中总黄酮的含量。5月-11月山楂叶中总黄酮的含量分别为6.28%、7.79%、6.93%、7.11%、5.77%、7.40%、6.69%。表明，总黄酮含量随采收期的不同而变化，6月份的含量最高。

3 讨论

目前，从山楂叶中分离出了多种黄酮类化合物、有机酸类化合物、微量元素、含氮化合物等。山楂叶总黄酮(又称益心酮)是从山楂叶中提取的黄酮类化合物的总称，是山楂叶中主要的有效成分，山楂叶总黄酮含有如槲皮素、芦丁、金丝桃苷、金丝桃素、牡荆素、牡荆素鼠李糖苷、葡荆牡黄酮、山楂纳新和去乙酰山楂纳酰等[5]。黄酮类化合物是一类具有C6-C3-C6基本母核的天然有色成分，广泛存在于中药、天然产物和食物中，通过连接一些糖基以黄酮苷的形式存在，被称为天然前体药物[6-7]。

本研究所用山楂叶采集后立即暴晒、晾干，及时杀酶，防止黄酮酶解，保证了黄酮类成分的稳定，且每次采样都选取同一批山楂树，使实验结果具有可比性。本研究结果表明，不同采收期的山楂叶总黄酮含量有明显不同，以承德6月产的山楂叶总黄酮含量为最高。因此，如果以提取山楂叶中的总黄酮类化合物为目的，应该选择6月的山楂叶。目前，关于不同采收期山楂叶的研究较少，有的研究认为山楂叶最佳采收期为10月，可能原因是所选山楂叶的产地不同[8]。不同的产地，生长环境、海拔、温度等因素都会对山楂叶中的成分及含量产生一定影响。

本研究以承德产不同采收期山楂叶中总黄酮含量为指标，为山楂叶的合理的采收、利用以及深入研究提供了理论依据。

[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[S].北京:中国医药科技出版社，2010.30，372.

[2]李永杰,马秀琴,冷爱晶,等.不同采收期山楂叶中总黄酮含量测定[J].辽宁中医药大学学报,2011,13(1):54-55.

[3]许正斌,高奎斌,许双贵.山楂叶综述[J].中医药学报, 1985,(4):49-51.

[4]中国科学院.中国植物志(第36卷)[M].北京:科学出版社，1997.189.

[5]耿慧春,满盈,赵志勇.山楂叶化学成分和药理作用研究进展[J].中国现代医生，2009,47(26):12-13.

[6]马国.山楂叶总黄酮吸收机理与吸收调控研究[D].成都:四川大学，2007.

[7]Nikolov N,Seligmann O,Wagner H,et al. New flavonoidglycosides from Crataegus monogyna and Crataegus pentagyna[J].Planta Med,1982,44(1):50-53.

[8]周元芬,刘江.山楂叶不同采集时间对总黄酮含量影响的研究[J].实用中医内科杂志，2008,22(1):63.

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