硫酸香茅醛显色法测定莪术油微囊载药量与包封率

吴继龙，张立华，陈欢，杨丽娜，代英辉，王东，刘东春，b※

(1．沈阳药科大学a．中药学院；b．中韩分子生药学研究室，沈阳110016；2．大连华立金港药业有限公司，辽宁大连116100)

中药莪术是姜科植物广西莪术(CurcumakwangsiensisS.G.Lee et C.F.Liang)、蓬莪术(C.phaeocaulisVal.)或温郁金(C.wenyujinY.H.Chen et C.Ling)的干燥根茎。中医理论认为，莪术性温，味辛、苦。有行气破血、消积止疼之功效。莪术油为莪术中提取的挥发油，含有多种倍半萜类化合物，其中，主要有榄香烯、莪术醇、莪术酮、莪术二酮等，具有抗肿瘤、抗菌、抗病毒等作用[1]。莪术油容易氧化和挥散，莪术油微囊化后可防止其挥散并降低氧化速度，提高稳定性。将新型的包衣材料聚乙烯醇·丙烯酸·甲基丙烯酸甲酯共聚物(Povacoat)加入麦芽糊精中作为囊材，采用喷雾干燥法研究制备了一种莪术油微囊，可以提高药物的包封率和微囊的稳定性。为了评价莪术油/(麦芽糊精-Povacoat)微囊的质量，本试验研究开发了一种简单方便的莪术油微囊载药量及包封率的测定方法。

1 仪器与试剂

ZNCL-BS智能数显磁力加热板(巩义市予华仪器有限责任公司)；T18 basic分散机(IKA公司)；L-117实验室微型喷雾干燥机(北京来亨科学仪器公司)；电子分析天平ESJ182-4(沈阳龙腾电子有限公司)；CT14RD冷冻离心机(上海天美科学仪器有限公司)；紫外-可见分光光度计UV-1700(日本岛津公司)；Olympus Bx51(日本奥林巴斯有限公司)。

莪术油(大连华立金港药业有限公司)；麦芽糊精(上海运宏化工制剂辅料技术有限公司)；Povacoat(F型，日本大同化工业株式会社)；香茅醛(AR级，天津市博迪化工有限公司)；其它试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 莪术油微囊的制备

麦芽糊精与水溶性新型辅料Povacoat F型作为水相囊材，莪术油及少量磷脂为油相，高速分散混合均匀后经喷雾干燥，即得微囊。空白微囊的制备过程中不加入莪术油，其余方法同上。

2.2 莪术油微囊载药量的测定

2.2.1显色机制及分光光度法测定波长的选择莪术油中的倍半萜类化合物可以与香茅醛硫酸试液产生多种鲜艳的颜色反应，灵敏度高，检测限为12ng，此法常用于莪术油的定性及定量检查[2]。

测定波长的选择：精密移取一定浓度莪术油乙醇溶液1.0mL，置于10mL容量瓶中，加入新制备的0.2%香茅醛硫酸溶液(称取香茅醛0.2g于100mL容量瓶中，加1.0mL无水乙醇使其溶解，加入冷硫酸溶液(1+2)至刻度，摇匀即得)定容至刻度。将上述溶液摇匀，室温下避光保存30min后于400～800nm波长范围内扫描测定吸光度，结果显示，莪术油乙醇溶液经香茅醛硫酸显色后在508nm处有一最大吸收峰，而空白微囊经超声振荡破囊后的提取液经香茅醛硫酸显色后在508nm处无干扰，见图1。

a.莪术油；b.空白微囊 a.Zedoary turmeric oil;b.Microcapsule without drug

2.2.2显色稳定性精密配制一定浓度的莪术油乙醇溶液(18.7μg/mL)，精密移取1.0mL置于10mL容量瓶中，按“2.2.1”项下方法显色后，于508nm处每隔30min测定吸光度值。结果显示，在150min内吸光度值稳定，结果见表1。

表1显色稳定性

Table 1 Results of color stability test (n=6)

2.2.3标准曲线的绘制精密称取49.8mg莪术油置于25mL容量瓶中，以无水乙醇定容至刻度，得莪术油储备液。精密移取上述储备液5.0mL，置于50mL容量瓶中，用无水乙醇定容至刻度，即得工作液(199.2μg/mL)。精密移取工作液10μL、50μL、100μL、200μL、300μL、400μL、500μL分别置于10mL容量瓶中，另取1.0mL无水乙醇于10mL容量瓶中作为空白对照液。将上述溶液以0.2%香茅醛硫酸溶液定容至刻度，摇匀，室温下避光保存30min，于508nm处测定吸光度[3，4]。以浓度C为横轴、吸光度A为纵轴作标准曲线，采用最小二乘法计算得标准曲线回归方程为A=0.094 7C-0.001 2，r=0.999 3，线性范围为0.199 2μg/mL～9.960 0μg/mL。

2.2.4精密度试验精密称取30mg微囊，置于50mL带盖离心管中，精密加入蒸馏水2.0mL，旋紧密封盖后超声振荡20min，精密加入18.0mL无水乙醇，精密称定离心管重量，涡旋混匀，超声提取15min后精密称定离心管重量，补加乙醇至原来重量，然后在4 000r/min下离心6min，精密移取上清液各1.0mL分别置于6个10mL容量瓶中，按“2.2.1”项下方法显色后，于508nm处测定吸光度。RSD为0.5%，结果显示方法的精密度良好。

2.2.5载药量测定回收率试验精密移取莪术油标准溶液适量，加于约30mg空白微囊中，其余步骤按“2.2.4”项下的方法操作，于508nm处测定吸光度，记录吸光度值，按公式：回收率=实测量/加入量×100%，计算回收率，结果见表2。

表2载药量测定加样回收率实验结果(n=6)

Table2Resultsofrecoverytestofdrugloadingcapacity

加入量(μg)Added实测量(μg)Measured回收率(%)Recovery平均回收(%)AveragerecoveryRSD(%)15301547101.11530152199.41530150198.199.61.51530151599.015301557101.81530150398.3

2.2.6莪术油微囊载药量的测定结果精密称取30mg微囊，其余步骤按“2.2.4”项下的方法操作，于508nm处测定吸光度，记录吸光度值[5～7]，并按公式：载药量=微囊中挥发油的总质量/微囊的质量，计算莪术油载药量。结果见表3。

表3载药量测定结果

Table 3 Results of drug loading (n=3)

2.3 莪术油微囊包封率的测定

2.3.1洗脱液的选择分别选用无水乙醇、乙醚、石油醚作为洗脱液，对同一批微囊进行玻璃小柱洗脱。精密称取100mg微囊，填装到玻璃小柱中，分别用上述3种洗脱液洗脱，收集洗脱液50mL。分别吸取上清液1.0mL置于10mL容量瓶中，以香茅醛硫酸溶液定容。结果显示，石油醚洗脱液不能与显色剂互溶，有分层现象；乙醚作为洗脱液极易挥发，容易造成较大误差；无水乙醇作为洗脱液有较好的流速，且显微观察结果表明微囊浸泡于无水乙醇30min后未发现破囊(图2)，因此选择无水乙醇作为洗脱液。

2.3.2洗脱液用量的确定精密称取100mg莪术油微囊置于上述玻璃小柱中，用无水乙醇洗脱，以5.0mL作为1个流份，分别收集。每组流份各移取1.0mL，分别置于不同的10mL容量瓶中，按“2.2.1”项下方法显色后，记录508nm处吸光度值，并计算累积莪术油未包封药量。结果显示(图3)，洗脱液用量达到40mL时基本可将微囊壁外残留药物洗脱完全，最终确定洗脱液用量为50mL。

图2 莪术油微囊浸泡于无水乙醇30min

图3 洗脱体积的确定

2.3.3包封率测定回收率试验精密称取100mg空白微囊置于自制的玻璃小柱，精密加入莪术油标准溶液，以无水乙醇洗脱，收集洗脱液50mL。精密移取洗脱液1.0mL置于10mL容量瓶中，按“2.2.1”项下方法显色后，于508nm处测定吸光度，

记录吸光度值，按公式：回收率=实测量/加入量×100%，计算回收率，结果见表4。

2.3.4包封率的测定结果精密称取100mg微囊置于自制的玻璃小柱，其余步骤按“2.3.3”项下方法操作，于508nm处测定吸光度，并计算未包封的莪术

表4包封率测定加样回收率实验结果(n=6)

Table4Resultsofrecoverytestofencapsulationefficiency

加入量(μg)Added实测量(μg)Measured回收率(%)Recovery平均回收(%)AveragerecoveryRSD(%)516.2521.8101.1516.2497.496.4516.2512.299.299.12.9516.2499.696.8516.2502.197.3516.2534.9103.6

油量，每批样品重复测定3次。包封率=(载药量-未包封药量)/载药量×100%[6]。3批莪术油微囊未包封药量及包封率测定结果见表5。

表5包封率测定结果(n=3)

Table 5 Encapsulation efficiency of microcapsules

3 讨论

准确测定莪术油微囊包封率的关键在于能否准确对微囊表面未包封莪术油进行定量。有文献报道类似的其它含挥发油微囊包封率测定方法，有采用洗涤-离心法[8，9]及烘干称重法[10]清洗微囊表面的挥发油后定量。但通过我们研究发现振荡及离心易造成囊壁破损；烘干时微囊内部挥发油容易散失，造成结果不准确。采用柱洗脱法可避免微囊受到较强外力而破裂。莪术油易溶于无水乙醇，本研究的微囊囊材中麦芽糊精及Povacoat均不溶于无水乙醇，处方中磷脂可以溶于无水乙醇，有造成微囊在乙醇中破裂、泄露的可能，但研究显示，此微囊在无水乙醇中30min内无破囊现象发生，原因可能为处方中磷脂含量不高，且基本上和莪术油一起被包裹在微囊内，并没有大量存在于囊膜中。同时，包封率测定实验中较高的回收率也表明，短时间内此微囊的药物透过性也没有发生改变。所以本研究选用无水乙醇洗脱微囊表面莪术油。

4 结论

本研究建立的莪术油/(麦芽糊精-Povacoat)微囊载药量及包封率测定方法简便易行、结果准确可靠，为以麦芽糊精-Povacoat作为复合囊材的莪术油微囊质量控制奠定了基础。

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