VEGF基因多态性在多囊卵巢综合征中的表达及意义

李 娜 杨倩英 赵曼曼

沈阳市第四人民医院妇产科 辽宁 沈阳 110030

VEGF基因多态性在多囊卵巢综合征中的表达及意义

李 娜 杨倩英 赵曼曼

沈阳市第四人民医院妇产科 辽宁 沈阳 110030

目的探讨血管内皮生长因子（VEGF）的1154G/A位点单核苷酸多态性（SNPs）与多囊卵巢综合征（Polycystic ovarian syndrome，PCOS）的相关性。方法采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态方法检测110例多囊卵巢综合征患者（研究组）及100例正常妇女（对照组）的VEDG基因-1154G/A多态性位点的基因频率分布情况。结果在110例PCOS患者及100例对照组中，VEGF-1154G/A的SNP的AA、GA、GG3种基因频率在PCOS组和对照组中分别为2.6%、26.4%、71.0%和5.0%、30.0%、65.0%。G、A等位基因频率分布在PCOS组和对照组分别是82.3%、17.7%和78.0%、22.0%。两组比较差异有统计学意义（P<0.05）。结论VEGF-1154G/A位点的单核苷酸多态与PCOS的发生、发展相关。

多囊卵巢综合征；血管内皮生长因子（VEGF）；单核苷酸多态

多囊卵巢综合征（Polycystic ovarian syndrome，PCOS）是育龄妇女中常见的内分泌代谢紊乱疾病[1]。近年来研究表明，血管内皮生长因子（VEGF）是目前发现的活性和特异性最强的血管生成因子[2]。在目前，血管内皮生长因子（VEGF）被认为可能参与了多囊卵巢综合征的发生、发展[5]。为对VEGF与PCOS的发生、发展风险相关性进行研究，选取2008年1月-2010年12月生育年龄妇女110例为研究对象，现报道如下。

1 对象与方法

1.1 研究对象

在沈阳市第四人民医院就诊，符合PCOS诊断标准的生育年龄妇女110例。110例生育年龄妇女均为就诊于沈阳市第四人民医院妇科门诊的患者，女性，年龄18～38岁，平均（25.67±4.18）岁。符合PCOS的诊断标准。PCOS的诊断标准参照美国生殖医学学会（ASRM）鹿特丹修正的诊断标准。按此标准至少符合其中2项：①稀发排卵或无排卵；②临床和（或）生化有高雄激素表现；③超声检查发现卵巢多囊性变。选择同期月经正常的育龄期妇女100例，年龄20～38岁，平均（24.55±4.65）岁作为对照组。两组患者3个月内均无激素治疗史，无内外科及其他疾病史。

1.2 研究方法

1.2.1 DNA提取 抽取门诊就诊的PCOS患者及因其他妇科疾病如功血，流产，盆腔炎症等排除PCOS患者的外周静脉血5 mL，以枸橼酸钠抗凝，采用蛋白酶K-氯化钠盐析法提取白细胞DNA。

1.2.2 基因多态性监测 VEGF-1154G/A基因型检测均采用PCR-限制性片段长度多态性（PCR-RELP）方法。PCR反应体系：PCR反应体积 20 μL，其中模板 DNA100 ng，PCR缓冲液1.6 μL×10 倍。耐热 DNA 聚合酶 1 U，10 mmol/L dNTPs 0.4 μL。5 μmol/l上、下游引物（上海生物技术有限公司）各1μL.上游：5′-TCCTGCTCCCTCCTCGCCAATG-3′(F)；下游：5′-GGCGGGGACAGGCGAGCATC-3′(R)。退火温度为60℃。产物长度为 206C，内切酶：mnlI bp。 酶切片段长度为：上游：185（188）+22（20）（A）；下游：151（154）+36+24（20）（G）。 酶切产物于 4%的琼脂糖凝胶电泳分析基因型。通电，稳压100 V。电泳时间分别为30 min。

1.3 统计方法

采用SPSS11.5统计学分析软件中t检验和χ2检验分别对计量资料和计数资料进行数据分析。以非条件Logistic回归方法计算表示相对风险度的比值比（OR）及其95%可信区间（CI）。

2 结果

两组患者 VEGF-1154G/A的SNP的AA、GA、GG3种基因频率及等位基因比较，见表1。

表1 VEGF-1154G/A SNPs的基因型和等位基因比较[n/(%)]

3 讨论

多囊卵巢综合征近年有明显升高趋势，但其发病机制至今尚未完全阐明。有关VEGF在PCOS疾病中高表达的机制研究较少。基因启动子区单核苷酸多态可能通过改变基因的转录活性导致蛋白表达的异常。本研究结果表明，VEGF-1154G/A的SNP的AA、GA、GG3种基因频率在PCOS组和对照组中表达情况比较差异有统计学意义（P<0.05）。G、A等位基因频率分布在PCOS组和对照组比较差异有统计学意义（P<0.05）。说明携带GG基因型可明显增加PCOS的发病风险，VEGF-1154G/A多态性位点与多囊卵巢综合征的发生、发展的风险相关。

VEGF-1154G/A SNP位于基因启动子区，体外实验表明-1154G等位基因与VEGF蛋白高表达有关[6]。但该等位基因在PCOS疾病中表达情况，至今未有此方面的报道。本研究结果显示，-1154G等位基因在研究组及对照组中表达有差异，说明该等位基因的表达增加了PCOS的发生，可大胆推测，该等位基因的存在可能与卵巢多囊的形成密切相关。

目前，多囊卵巢综合征由于环境、遗传及压力等原因，患者发病率越来越高，越来越年轻化，越来越受到重视。因此，探讨该疾病的发病机制、相关基因的多态性与PCOS的发病的关系，越来越重要。

[1]徐兴华.多囊卵巢综合征临床表型资料分析和基于家系INSR基因多态性研究[J].山东大学,2011.

[2]Hsueh C,Lin JD,Wu IC,et al.Vascular endothelial drowth factors and angiopoieyinsinpresentationsandprognosisofpapillarythyroid carcinoma[J].Journal of Surgical Oncology,2011,103(5):395-399.

[3]胡蓉,田春花 ,田进石.抗苗勒管激素及其Ⅱ型受体基因多态性在多囊卵巢综合征患者表达的研究[J].实用妇产科杂志,201(9):739-742.

[4]Rodrigues P,Furriol J,Tormo E,et al.The single-nucleotide polymorphisms+936C/T VEGF and-710 C/T VEGFR1 are associated with breast cancer protection in a Spanish population[J].Breast Candcer Research and Treatment,2012,132(2):769-778.

[5]杨露.微粒体环氧化物水解酶的基因多态性与PCOS易感性关系的研究[D].安徽医科大学,2011.

[6]刘贞.CYP17基因，INS基因，LHβ基因多态性与多囊卵巢综合征的相关研究[D].广州医学院,2011.

[7]林川.重庆地区汉族人群Fetuin-A基因多态性与多囊卵巢综合征的易感性研究[D].重庆医科大学,2013.

[8]高玲玲.SET在多囊卵巢综合征高雄激素血症中的作用机制研究[D].南京医科大学,2013.

R713

A

1674-0742（2014）05（b）－0094-02

李娜（1978-），女，，辽宁沈阳市，硕士，主治医师，主要研究方向为妇科肿瘤，邮箱：291419435@qq.com。

2014-01-24）