甲状腺微小乳头状癌的临床病理特征及诊断标志物的应用

王士娜，王星，王翠芳

（沈阳医学院附属中心医院病理科，沈阳110024）

甲状腺微小乳头状癌的临床病理特征及诊断标志物的应用

王士娜，王星，王翠芳

（沈阳医学院附属中心医院病理科，沈阳110024）

Clinicalpathologic FeaturesofPapillary Thyroid Microcarcinoma and Application of Biomarkersin the Disease Diagnosis

应用免疫组织化学方法检测24例甲状腺微小乳头状癌、30例甲状腺良性病变中半乳糖凝集素3（Galectin-3）、细胞角蛋白19（CK19）、间皮细胞（MC）及甲状腺过氧化物酶（TPO）的表达情况，探讨甲状腺微小乳头状癌的临床病理特征。联合应用Galectin-3、CK19、MC及TPO对甲状腺微小乳头状癌的诊断与鉴别诊断具有重要参考价值。

甲状腺微小乳头状癌；半乳糖凝集素3；细胞角蛋白19；间皮细胞；甲状腺过氧化物酶；免疫组织化学

甲状腺乳头状癌是本世纪全球范围内发病率增长最快的实体恶性肿瘤［1］，其发病率占甲状腺癌的60%～70%，且大小变异很大，通常根据肿瘤的大小和浸润范围可将甲状腺乳头状癌分为隐性癌、甲状腺内及甲状腺外3种类型。其中隐性癌亦称甲状腺微小乳头状癌或隐性硬化性癌，直径小于1 cm，平均5～7 mm。常在因与甲状腺乳头状癌无关的疾病而行甲状腺手术切除的标本中检出［2］。近年来，甲状腺微小乳头状癌的发病率有增高趋势。但由于其表现形式多样，除可表现为经典甲状腺乳头状癌的核特征以及乳头状生长方式外，多数病例也可无典型甲状腺乳头状癌的特征。因此对那些形态学特征不很典型的甲状腺微小乳头状癌，在作出临床病理诊断前需要借助一些辅助性手段进行鉴别，以避免不必要的误诊。

本实验通过联合检测半乳糖凝集素3（Galectin-3）、细胞角蛋白19（cytokeratin 19，CK19）、间皮细胞（mesothelial cell，MC）及甲状腺过氧化物酶（thyroid peroxidase，TPO）在甲状腺微小乳头状癌及甲状腺良性病变中的表达情况，分析其在甲状腺微小乳头状癌鉴别诊断中的意义。

1 材料与方法

1.1 临床病理资料

按照病理诊断标准选取本院2007至2013年诊断为甲状腺微小乳头状癌的病理标本24例，瘤组织直径0.1～0.8 cm；其中男1例，女16例；年龄25～73岁，平均50岁。同时选取甲状腺良性病变标本30例，其中结节性甲状腺肿25例，甲状腺腺瘤5例。标本均经10%甲醛固定，石蜡包埋。连续切片，切片厚4～5 μm，常规HE染色。

1.2 免疫组织化学染色及结果判定

免疫组化采用SP法，按说明书步骤进行操作，所用Galectin-3、CK19、MC及TPO鼠抗人单克隆抗体、SP试剂盒及AEC显色剂均购自福州迈新生物技术有限公司，用诊断明确的甲状腺乳头状癌作为阳性对照，用PBS缓冲液代替一抗作为阴性对照。其中Galectin-3的阳性部位为细胞质或细胞核，CK19的阳性部位主要为细胞膜及细胞质，MC的阳性部位为细胞膜，TPO的阳性部位为细胞质。结果判断采用阳性细胞半定量法［3］：先根据阳性细胞个数占整个肿瘤细胞的百分率计分，＜5%为0分，5%～25%为1分，26%～50%为2分，51%～75%为3分，＞75%为4分；再根据阳性细胞染色强度计分，不着色为0分，淡棕黄色为1分，棕黄色为2分，深黄色为3分；最后将两者分数相加，≤2分为阴性，＞2分为阳性。

1.3 统计学分析

抗体诊断指标按下列公式计算：敏感性（%）=真阳性/（真阳性+假阴性）×100，特异性（%）=真阴性/（真阴性+假阳性）×100。数据处理采用SPSS 13.0统计分析软件，甲状腺微小乳头状癌与良性病变中各种分子标志物表达阳性率的比较采用χ2检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 甲状腺微小乳头状癌的临床及组织学特征

本研究选用的24例标本均为结节性甲状腺肿手术伴发病例，根据性别及年龄分布情况可以看出，本肿瘤好发于中老年女性。组织学上6例不具有甲状腺乳头状癌的特征性核，而表现为增大的核，呈不规则腺样或条索样在纤维化或硬化性间质内浸润性生长（如图1A），其余18例则以乳头状或腺样结构生长，伴有毛玻璃样核、核沟或核内包涵体形成，有或无间质的硬化，但都存在间质的纤维化改变（如图1B）。

图1 甲状腺微小乳头状癌的形态学特点HE×200

2.2 Galectin-3、CK19、MC、TPO在甲状腺微小乳头状癌中的表达情况

在本研究的甲状腺病变中，甲状腺微小乳头状癌与甲状腺良性病变比较Galectin-3、CK19、MC和TPO表达的差异均有统计学意义（均P＜0.01）。见表1。

表1 Galectin⁃3、CK19、MC和TPO在甲状腺微小乳头状癌与甲状腺良性病变中的表达情况

2.2.1 Galectin-3的表达情况：Galectin-3在甲状腺微小乳头状癌中多为弥漫性中重度强阳性表达（++～+++，图2A），仅少数病例有弱阳性（+），3例为阴性表达（-）；在甲状腺良性病变中几乎都是阴性，仅1例呈轻微阳性着色；Galectin-3诊断的敏感性为87.50%，特异性为96.67%。

2.2.2 CK19的表达情况：CK19在甲状腺微小乳头状癌中有17例呈中重度强阳性表达（图2B），少数为弱阳性，2例为阴性；在甲状腺良性病变中，仅有2例呈弱阳性而大多数呈阴性；CK19诊断的敏感性为91.67%，特异性为93.33%。

2.2.3 MC的表达情况：在甲状腺微小乳头状癌中，MC为中重度强阳性表达（图2C），有7例为弱阳性表达，少数呈阴性；而在甲状腺良性病变中多为阴性或弱阳性表达，仅2例呈中等强度表达；MC诊断的敏感性为79.17%，特异性为80.00%。

2.2.4 TPO的表达情况：在本研究的24例甲状腺微小乳头状癌中，TPO均呈阴性（图2D）；而在30例甲状腺良性病变中呈中重度强阳性表达；TPO诊断的敏感性及特异性均为100%。

2.3 甲状腺病变中Galectin-3、CK19、MC的共同表达及伴TPO表达检测

24例甲状腺微小乳头状癌中有19例同时表达Galectin-3、CK19、MC，阳性表达率为79.17%，而这19例中均未检测到TPO的表达；在30例甲状腺良性病变中，仅1例3种标志物同时呈弱阳性表达，24例均呈阴性表达，2组相比TPO与其他3种标志物在甲状腺良恶性病变中表达的差异有统计学意义（χ2=32.880，P＜0.05）。

3 讨论

甲状腺癌是最常见的内分泌恶性肿瘤，其中甲状腺乳头状癌是最常见的病理类型［4］。近年来随着健康体检工作的广泛开展，作为甲状腺乳头状癌常见亚型的甲状腺微小乳头状癌的检出率逐渐提高。在实际工作中，具有明显或纯乳头状结构的微小癌较少见，有些即使具有典型癌性乳头状结构的良性病变中，也易因缺乏典型的甲状腺乳头状癌的核特征而出现鉴别的困扰。所以免疫组织化学方法对甲状腺微小乳头状癌的鉴别诊断有很重要价值。

图2 Galectin⁃3、CK19、MC、TPO在甲状腺微小乳头状癌中的表达×100

Galectin-3是半乳糖凝集素家族β-半乳糖苷结合蛋白，参与细胞生长和凋亡、细胞黏附、新生血管形成和肿瘤浸润与转移等，并在肿瘤的发生、发展及转移中起重要作用［5］。研究发现，Galectin-3在甲状腺肿瘤的鉴别中具有很高诊断价值。陈云新等［6］的研究显示，10例甲状腺微小乳头状癌中9例Galectin-3呈中重度阳性着色，在结节性甲状腺肿中多为阴性或弱表达，我们的研究结果与陈云新等的结果基本一致。细胞角蛋白是细胞骨架中间丝的一种，是上皮细胞特征性的标志物，目前已发现22种亚型，以CK1～CK22命名，且不同亚型的细胞角蛋白存在于不同类型的细胞中。正常情况下CK19主要分布于肠、胰腺导管及胆管等的上皮细胞中，而越来越多的研究表明CK19在甲状腺乳头状癌中呈弥漫一致的强阳性表达，而在良性甲状腺病变中表达弱或呈阴性［7］。陈云新等［6］的研究提示，10例甲状腺微小乳头状癌CK19均呈中重度阳性着色，在结节性甲状腺肿中主要为轻度阳性着色。本研究显示，在甲状腺微小乳头状癌中22例CK19为阳性表达，且14例为弥漫阳性表达，而在甲状腺良性病变中28例为阴性表达，2例为弱阳性表达，与陈云新等［6］的结果一致。MC为间皮细胞微绒毛表面特异性标志物，在肿瘤血管的形成、肿瘤的生长及转移中发挥重要作用。Nechifor等［8］的研究则表明，在甲状腺乳头状癌中MC的阳性表达率为63.6%，部分良性滤泡性病变也有MC阳性表达。本研究中甲状腺微小乳头状癌MC的阳性率为79.17%，甲状腺良性病变中MC的阳性率为22.58%，7例为阳性表达，3例为中度阳性，4例为弱阳性，与已有报道接近。TPO是甲状腺激素合成过程中的特异性酶，其存在于正常甲状腺滤泡上皮细胞顶缘细胞膜表面，可以催化碘离子与甲状腺球蛋白酪氨酸残基的加成反应，以此合成甲状腺素或三碘甲状腺原氨酸等甲状腺激素。它反映了正常甲状腺的功能，因此在甲状腺恶性病变中不表达。杨清绪等［9］的研究显示，TPO在良性甲状腺病变中的表达率为100%，在甲状腺癌中极少表达或小灶性表达，表达率为3.2%，而其中的甲状腺乳头状癌均呈阴性表达，仅2例甲状腺滤泡癌呈阳性。在本研究中，所选的24例甲状腺微小乳头状癌均呈TPO阴性，而30例甲状腺良性病变中TPO阳性表达率为100%。

综上，Galectin-3、CK19、MC和TPO的单项检测在甲状腺微小乳头状癌及甲状腺良性病变的鉴别诊断都具有一定的作用。但本研究也显示，MC在甲状腺良性病变中也有弱至中等强度表达，因而特异性不高，故单独使用时的鉴别意义较小。此外，虽然本研究显示TPO在甲状腺微小乳头状癌中的敏感性与特异性均为100%，但不排除是所选样本的局限性导致这种情况。因为已有文献报道［13］甲状腺乳头状癌中也存在着TPO的表达，说明任何指标的单独使用都有一定的局限性，不能作为甲状腺微小乳头状癌的诊断标准。所以，建议上述4种抗体联合应用，取长补短，对于提高甲状腺微小乳头状癌诊断的准确性具有重要价值。

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［5］Weber KB，Shroyer KR，Heinz DE，et al.The use of a combination of galectin-3 and thyroid peroxidase for the diagnosis and prognosis of thyroid cancer［J］.Am J Clin Pathol，2004，122（4）：524-531.

［6］陈云新，沈丹华，孙昆昆，等.甲状腺微小乳头状癌中Galectin-3、CK19、MC和CD56的表达及意义［J］.临床与实验病理学杂志，2010，26（4）：425-428.

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［8］Nechifor-Boil A，Cǎtanǎ R，Loghin A，et al.Diagnostic value of HBME-1，CD56，Galectin-3 and cytokeratin-19 in papillary thyroid carcinomas and thyroid tumors of uncertain malignant potential［J］. Rom J Morphol Embryol，2014，55（1）：49-56.

［9］杨清绪，邵春奎，冯智英，等.CK19和甲状腺过氧化物酶表达在甲状腺疾病诊断中的作用［J］.第一军医大学学报，2005，25（6）：678-681.

（编辑 陈姜）

R736.1

B

0258-4646（2014）11-1051-03

王士娜（1979-），女，主治医师，硕士.

王翠芳，E-mail：sywcf321@sohu.com

2014-06-13

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