免疫比浊法测定尿微量白蛋白的分析

李彧敏，张晓霞

（灵台县人民医院，甘肃 灵台 744400）

免疫比浊法测定尿微量白蛋白（UmALB）是近年来检测肾脏病变的早期指标，并能在某种程度上反映病变的严重程度，因此越来越受到临床的重视。笔者对免疫比浊法测定尿微量白蛋白进行了探索，现将结果报告如下。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 标本 2013年5月10日在我院门诊进行健康体检的小学六年级一班学生和我院儿科住院患儿的新鲜随机尿液。

1.1.2 仪器 CS800全自动生化分析仪。

1.1.3 试剂 采用宁波瑞源生物科技有限公司生产的试剂。

1.2 方法

1.2.1 标本处理 新鲜随机尿液标本离心取上清液测定：稳定性试验取新鲜尿液离心后上清液分装于4℃和-20℃保存，测定时取出平衡至室温后，离心取上清液测定。

1.2.2 测定条件设置 采用免疫比浊法，用试剂盒提供的标准品及试剂，按照试剂盒的要求设置参数：双波长，两点终点法，定标方式为logit log 5p，定标液浓度分别为0.0，12.0，22.2，49.5，103.5，205.5mg/L，批号1335F。

1.3 统计方法

线性试验数据经SPSS1.0统计软件抛物线拟合处理。

2 结果

2.1 线性试验

定标后以标准物浓度为自变量X，吸光度为因变量Y（吸光度值×104），通过抛物线拟合尿微量白蛋白标准曲线，并与实际标准曲线比较。曲线方程为Y=1 052.10+124.639X-0.114 3X2，确定系数R2=1.000，P=0.000。因此可认为拟合曲线与实际曲线符合性很好，检出限为0～200mg/L。

2.2 重复性试验

2.2.1 批内重复试验 取一新鲜尿液标本连续测定尿微量白蛋白20次，计算变异系数，结果见表1。

2.2.2 批间重复试验 取一新鲜尿液标本分装成10份，同日分3批次测定（第一批3份，第二批3份，第三批4份），每份标本均测定尿微量白蛋白两次，取平均值计算变异系数，结果见表1。

表1 尿微量白蛋白重复性试验结果（mg/L）

2.3 回收试验

取一新鲜尿液标本连续测定3次尿微量白蛋白，计算平均值作为基础浓度，分别加入3份不同浓度微量白蛋白标准物（49.5，103.9，205.5 mg/L）混匀后，测定混合物尿微量白蛋白浓度，计算回收率，结果见表2。

表2 尿微量白蛋白回收试验结果（mg/L）

2.4 干扰试验

2.4.1 血红蛋白干扰试验 取一肝素抗凝全血标本，3 000 r/min离心3分钟弃去血浆，剩余的红细胞以生理盐水洗涤4次，通过机械搅拌和加入蒸馏水使其溶血，制成血红蛋白液，测定其血红蛋白浓度。将已知尿微量白蛋白量的尿液与血红蛋白液以不同比例混匀，测定混合物尿微量白蛋白含量，计算干扰率，结果见表3。

表3 尿微量白蛋白血红蛋白干扰试验结果

2.4.2 胆红素干扰试验 取一胆红素定位阳性，尿蛋白定性为阴性的新鲜尿液标本，以此标本作为胆红素干扰液。另取一胆红素定性为阴性的新鲜尿液标本，测定其尿微量白蛋白含量，以此标本作为基础液。将基础液与胆红素干扰液以不同比例混匀，测定混合物尿微量白蛋白含量，计算干扰率，结果见表4。

表4 尿微量白蛋白胆红素干扰试验结果

3 讨论

正常人的肾小球滤液中存在小分子的蛋白质，在通过近曲小管时绝大部分被重吸收，因此终尿中总蛋白含量很少，仅为30～130mg/24 h。当尿中白蛋白排出量在3.2～22.6mg/mmol·Cr（30～200 mg/Cr）或排除率在20～200μg/min这一范围内即为微量白蛋白尿[1]。尿微量白蛋白不仅对糖尿病、肾病的早期诊断、治疗和预后具有重要意义，而且在高血压、心血管疾病、肾小球疾病等所致的肾损伤中具有举足轻重的作用[1]。

尿微量白蛋白用磺基水杨酸法、加热乙酸法及试带法基本不能查出[2]。故国内外多采用免疫化学技术进行测定。本试验采用免疫比浊法测定尿微量白蛋白，检出限为0～200mg/L，批内CV为0.55%，平均CV为1.18%，平均回收率为101.9%，与文献[3]报道的检出限10～160mg/L，批内CV6.3%，批间CV 6.47%，平均回收率96.2%比较，结果较为理想，该试验方法有良好的精密度和准确性。

干扰试验结果表明，血红蛋白和胆红素均会对尿微量白蛋白的测定产生负干扰，并且干扰物浓度越高，负干扰率也越大。从血红蛋白干扰试验结果分析，当血红蛋白浓度在0.61 g/L以下时，对尿微量白蛋白的测定影响可以忽略（干扰率<-2.60%）；当血红蛋白浓度超过2.59 g/L时，干扰率高达-15.61%，这时测定的尿微量白蛋白结果是不可以接受的，临床上测定无意义。胆红素干扰试验表明，胆红素浓度<1.03μmol/L时，对尿微量白蛋白的测定影响较小（干扰率<-1.99%），可以忽略；胆红素浓度上升到5.18μmol/L时，干扰率为-7.19%，对尿微量白蛋白的测定影响较大；胆红素浓度达12.97μmol/L时，干扰率高达-14.44%，这时测定的尿微量白蛋白结果不可以接受，临床上测定无意义。

由于本试验检出限制为0～200mg/L，测定前可先将标本离心，取上清液做蛋白定性试验，若阴性或弱阳性可直接测定尿微量白蛋白，若阳性以上需以生理盐水适当稀释后测定，以免造成尿微量白蛋白试剂不必要的浪费。

关于尿微量白蛋白测定结果的表示现在尚无统一单位。目前文献所采用的表示方法有两种：一是对定时尿样品的测定结果根据分泌的蛋白以μg/min表示；二是对不定时尿样品常用尿微量白蛋白/尿肌酐表示。

总之，应用免疫比浊法测定尿微量白蛋白准确性高、精密度好，适于常规实验室采用。

[1]齐志宏，刘振元.尿微量白蛋白测定的临床意义[J].现代诊断与治疗，1999,10（6）：351-352.

[2]寇丽筠.临床基础检验学[M].北京：人民卫生出版社，1997.

[3]冯葛苓，王兆成，刘晨梅.免疫浊度终点法检测尿微量白蛋白[J].河北医药，1999（4）：295-297.■