老年慢性心力衰竭患者辅助性T细胞17及白介素⁃17的检测及临床意义

尹冬华 谭明娟 周辰 潘晓东 赵慧娟

老年慢性心力衰竭患者辅助性T细胞17及白介素⁃17的检测及临床意义

尹冬华 谭明娟 周辰 潘晓东 赵慧娟

目的研究老年慢性心力衰竭（chronic heart failure，CHF）患者外周血中辅助性T细胞17（Th17）的比例及白介素⁃17（IL⁃17）的变化及临床意义。方法选择老年CHF住院患者作为CHF组（n＝30），同时设置对照组（n＝30），利用流式细胞技术和ELISA法分别检测2组患者外周血中Th17细胞比例和IL⁃17的水平。结果CHF组外周血中Th17／CD4＋T细胞比例显著高于对照组［（3.83±1.04）%比（2.25±0.78）%，P＜0.05］；CHF组患者外周血中IL⁃17水平显著高于对照组［（8.97±3.06）ng／L比（6.12±2.34）ng／L，P＜0.05］。结论老年CHF患者外周血中Th17细胞比例及IL⁃17水平升高，调节Th17细胞的治疗可能为CHF治疗提供新思路。

老年人；慢性心力衰竭；Th17细胞；白介素⁃17；流式细胞学

慢性心力衰竭（chronic heart failure，CHF）是常见的老年病之一，基本机制是心脏重构。近年来心力衰竭与炎症、免疫相互关系的研究，进一步深化了对心力衰竭发病机制的理解。辅助性T细胞17（Th17）在炎症发生发展过程中的作用逐渐引起人们重视［1］，白介素⁃17（IL⁃17）是Th17细胞的主要效应因子，具有较强的致炎作用。新近动物实验发现［2⁃3］：IL⁃17通过OPG／RANK／RANKL和MMP／TIMP系统参与自身免疫性心脏疾病和非自身免疫性心脏疾病引起的心力衰竭心脏重构病理过程，可能是各种心力衰竭心脏重构的共同致病因子。因此，研究IL⁃17在心力衰竭中的意义可能为心力衰竭治疗带来新的启示。目前国内外关于Th17细胞在心血管疾病方面的研究较少，且仅有少量的关于＜65岁人群的临床研究［4］。

本研究通过对老年CHF患者外周血Th17细胞及IL⁃17水平的检测，探讨Th17细胞及IL⁃17是否与CHF有关，为CHF的治疗以及进一步的研究提供理论依据。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取江苏省省级机关医院干部保健科病房2009年1月至2013年8月慢性充血性心力衰竭住院患者30例，为CHF组，CHF的诊断标准参照慢性充血性心力衰竭诊治指南，排除以下情况：（1）急、慢性感染；（2）肝肾功能严重损害；（3）急性冠脉综合征；（4）风湿性疾病；（5）甲状腺功能亢进症；（6）自身免疫性疾病；（7）恶性肿瘤。其中男28例，女2例，年龄65～95岁，平均（80.90±9.62）岁。同时设置对照组30例，其中，男27例，女3例，为江苏省省机关医院干部保健科体检患者，年龄65～90岁，平均（78.12±8.74）岁，均无CHF。2组患者在年龄、糖化血红蛋白、高密度脂蛋白、低密度脂蛋白、血肌酐、收缩压、舒张压等一般资料间差异无统计学意义（P＞0.05），2组具有可比性。

1.2 实验方法

1.2.1 标本采集：入院第2天清晨从研究对象前臂周围静脉抽取空腹血标本10 ml两管，标本置入肝素钠抗凝管内，离心后留取血清，置于－80℃冰箱保存。

1.2.2 观察2组外周血中Th17／CD4＋T细胞比例：采用流式细胞术检测外周血中Th17比例。（1）淋巴细胞的刺激培养：实验前4～6 h加PMA（50μg／ml）、Ion⁃omyein（1μg／ml）、BFA（1μg／ml）；（2）收获细胞，细胞膜表面染色：用FITC标记的抗人CD4抗体2μl／样本染色30 min（冰上孵育或4℃冰箱）；（3）3%FCS洗涤液洗涤，按细胞内染色试剂盒说明书进行后续细胞内染色；（4）固定透膜：固定透膜剂4℃孵育20min或过夜；（5）3%FCS洗涤液洗涤3次；（6）加PE标记的抗人IL⁃17，4℃避光孵育30 min，洗涤后上机；（7）同时选用FITC⁃Mouse IgG1作为同型对照。检测Th17细胞占外周血CD4＋细胞的比率。

1.2.3 采用ELISA法测定外周血中IL⁃17水平：具体实验步骤按照试剂盒说明书操作，试剂盒购自上海邦亦商贸（biswamp）。

1.2.4 心功能检测：采用GE公司的Vivid 7彩色超声仪，探头频率为2.0～4.0 MHz。于左心长轴切面腱索水平取M型超声测得左室射血分数、短轴缩短率。1.3 统计学处理 采用SPSS 16.0统计软件包进行数据处理，数据均以均数±标准差（s）表示，在方差齐性的基础上，两两比较采用成组t检验。P＜0.05表示差异有统计学意义。

2 结果

2.1 CHF组患者与对照组心功能比较 CHF组左室射血分数及短轴缩短率均低于对照组（P＜0.05），提示2组心脏收缩功能存在明显差异。见表1。

表1 2组射血分数和短轴缩短率比较（s，%，n＝30）

表1 2组射血分数和短轴缩短率比较（s，%，n＝30）

注：与对照组比较，∗P＜0.05

组别左室射血分数短轴缩短率CHF组45.7±5.9∗20.8±2.6∗对照组62.5±7.1 35.1±3.6

2.2 2组患者外周血中IL⁃17水平及Th17／CD4＋细胞比例比较 CHF组患者外周血中IL⁃17水平较对照组高（P＜0.05）；流式细胞检测中，CHF患者外周血中Thl7／CD4＋T细胞比例明显高于对照组（P＜0.05）。见表2。

表2 2组Th17细胞比例及IL⁃17水平比较（s，n＝30）

表2 2组Th17细胞比例及IL⁃17水平比较（s，n＝30）

注：与对照组比较，∗P＜0.05

组别Th17／CD4＋细胞比例（%）IL⁃17（ng／L）CHF组3.83±1.04∗8.97±3.06∗对照组2.25±0.78 6.12±2.34

3 讨论

3.1 Th17细胞与IL⁃17 Th17细胞是新近发现的CD4＋细胞中新的成员，因为能够分泌大量的IL⁃17而被命名为Th17细胞，IL⁃17是Th17主要效应因子，不仅有较强的致炎作用，同时也可以调节炎症反应，可刺激内皮细胞、上皮细胞及成纤维细胞等释放IL⁃6、IL⁃8、金属蛋白酶⁃1、单核细胞化学趋化蛋白（MCP）⁃1和粒细胞集落刺激因子（G⁃CSF）等细胞因子［1，5⁃6］。体外研究发现，IL⁃17与TNF⁃α产生协同作用促进粒⁃巨噬细胞集落刺激因子（GM⁃csv）、IL⁃8、IL⁃6的作用，远大于各自的作用［7⁃9］。

3.2 CD4＋T细胞与CHF 大部分情况下，CHF是指心肌收缩力下降使心排出量不能满足机体代谢需要，器官、组织灌流不足，同时出现体循环和（或）肺循环淤血表现，在快速老龄化的今天，CHF是很多老年心脏病患者死亡的重要原因。神经体液机制、氧化应激和心肌细胞凋亡在CHF发病机制中发挥不同的作用［11⁃13］。近年来关于心力衰竭与炎症和免疫失调关系的研究，尤其是CD4＋T细胞、Th17细胞与CHF的关系日渐受到关注。有研究提示Th1／Th2平衡失调及Treg细胞功能异常促进了CHF的发生发展及恶化［7］。3.3 Th17细胞、IL⁃17在老年CHF患者外周血中的变化 本研究中我们观察到，流式细胞仪检测老年CHF患者外周血Th17／CD4＋比例以及ELISA法检测IL⁃17水平均显著高于对照组，推测由于Th17细胞比例的增加，通过释放效应因子IL⁃17调节致炎因子的水平，放大炎症反应，从而引起心肌细胞损害。至于Th17细胞比例以及IL⁃17是否与老年患者心功能恶化的程度相关有待我们进一步加大样本量研究。关于Th17细胞比例以及IL⁃17水平在老年CHF发病中的具体机制有待于进一步研究。

本研究认为Th17细胞及其分泌的IL⁃17可能在老年CHF发生发展过程中发挥重要作用，对于CHF的发病机制是一个较好的补充，完善了关于Th1／Th2平衡失调在CHF发病中理论上的不足。通过对Th17细胞与老年CHF关系的深入研究，能够为CHF的治疗提供新的思路和策略。

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Significance of the detection of Th17 and IL⁃17 in the elderly patients with chronic heart failure．

YIN Dong⁃hua，TAN Ming⁃juan，ZHOU Chen，PAN Xiao⁃dong，ZHAO Hui⁃juan．Department of Cardre Health，Jiangsu Provincial Official Hospital，Nanjing 210046，China

ObjectiveTo study the significance of the detection of Th17 and IL⁃17 in the peripheral blood of the elderly patients with chronic heart failure（CHF）.M ethods30 hospitalized patients with CHF（80.90±9.62 years old）were selected as study group，and 30 patients（78.12±8.74 years old）without CHF were selected as control group.The number of Th17 cells and IL⁃17 levelwere detected by flow cytometermethod and ELISA.ResultsThe ratio of Thl7／CD4＋T in peripheral blood of patients with CHF were higher than that of normal controls［（3.83±1.04）%vs（2.25± 0.78）%，P＜0.05］.The IL⁃17 level in peripheral blood of patients with CHF was higher than that of normal controls［（8.97±3.06 ng／L）vs（6.12±2.34 ng／L），P＜0.05］.ConclusionsTh17 cell and IL⁃17 level in peripheral blood are increased in the elderly patientswith CHF.It can provide a theoretical and experimental basis for the clinical diagnosis and treatment of CHF.

aged；chronic heart failure；Th17 cell；interleukin⁃17；flow cytometermethod

R 541.6

A

10.3969／j.issn.1003⁃9198.2014.01.016

2013⁃06⁃13）

210024江苏省南京市，江苏省省级机关医院干部保健科