重组溶葡萄球菌酶对奶牛隐性乳房炎的治疗试验

关文怡 李桂伶 （北京农业职业学院 北京 房山 102442）

郭海龙 （北京市房山区农业局）

奶牛乳房炎是奶牛群体中常见的高发病症之一，其直接影响着奶牛的泌乳量及乳汁的质量。在奶牛乳房炎病例中，隐性乳房炎更加普遍，占发病总数的75%～ 95%，由于患隐性乳房炎的牛乳房并不表现明显的临床症状，乳汁肉眼观察也很难发现明显的异常，因此，奶牛隐性乳房炎在临床上不易发现，只能通过检测才能确诊，因而不能引起畜主的足够重视，给奶牛生产带来较大经济损失。引起奶牛乳房炎的主要致病菌是葡萄球菌和链球菌，两种细菌相加占的比例最高可达80%以上[1～3]，以往临床用于治疗葡萄球菌的药物多为抗生素，而抗生素产生的耐药性、药残等问题一直困扰奶业生产。溶葡萄球菌酶(Lysostaphin，LSP)是1964年Schindler等[2]首次从Staphylococcus simulans 培养基中发现的一种生物酶制剂，它与抗生素、化学药物有着完全不同的杀菌机理。它可切断葡萄球菌细胞壁肽聚糖中的五甘氨酸肽键桥结构，从而达到快速杀死细菌的目的，其独特的杀菌机制不易诱导产生耐药菌株[3]，特别适用于治疗由甲氧西林耐药性金黄色葡萄球菌(mRSA)引起的感染[4]。并且不会残留在动物体内[5]，对机体正常组织无刺激、无致突变性[6－7]。黄青山等[8]研究了rLSP对奶牛乳房炎和子宫内膜炎常见病原菌的体外杀菌试验，结果表明，rLSP对试验分离的金黄色葡萄球菌和表皮葡萄球菌具有良好抑杀效 果。因此，溶葡萄球菌酶可以做为一种新型、安全的治疗奶牛乳房炎的药物。本试验在临床采用重组溶葡萄球菌酶粉和头孢噻肟唑治疗奶牛隐性乳房炎，对其疗效进行对比，试验显示，用重组溶葡萄球菌酶粉治疗奶牛隐性乳房炎疗效优于头孢噻肟唑。

1 材料和方法

1.1 试验药物与对照药物

试验药物：重组溶葡萄球菌酶粉，规格为400U(0.4 mg)/支，10支/盒，昆山博青生物科技有限公司生产，生产批号20110623。对照药物：注射用头孢噻呋钠，规格为0.5g/瓶×2瓶/盒。石家庄市光华药业有限公司生产，生产批号20110906。

1.2 试验动物

本试验用牛选自北京某牛场24头经BLT检测为阳性的隐型乳房炎患牛。

1.3 试验方法

1.3.1 患牛乳区分组 24头患隐性乳房炎的受试牛在用BLT试剂检测过程中共发现有32个患病乳区，将24头牛分成4个组，每组6头(8个患病乳区)。

1.3.2 试验过程 前3组为重组溶葡萄球菌酶粉试验组，第1组为低剂量组以200U/乳区给药，第2组为中剂量组以400U/乳区给药，第3组为高剂量组以600U/乳区给药，将重组溶葡萄球菌酶粉用注射用水稀释至20ml患病乳区内注入，每天早、晚挤奶后各用药1次，连用4d；第4组为药物对照组，以注射用头孢噻呋钠0.25g/乳区给药，将头孢噻呋钠粉用注射用水稀释至20ml患病乳区内注入，每天早、晚挤奶后各用药1次，连用4d。各组牛以耳标号做为标记。

1.3.3 评定方法 试验通过测定用药前及用药后患牛的乳汁体细胞数(SCC)变化，评定3个剂量重组溶葡萄球菌酶粉和对照头孢噻呋钠粉对隐性乳房炎的疗效。计数方法为：在各试验组第一次用药前的早上和4d用药后的次日早上分别用灭菌试管采集治疗乳区的乳样，每份10ml，做好标记，用保温冰盒保存运送至实验室采用Nucleocounter SCC-100体细胞测定仪进行测定。若用药乳区乳汁体细胞数(SCC少于50万个/ml，表明病原菌几乎全部消除，可视为治愈；若用药乳区乳汁体细胞数(SCC)在50～100万个/ml之间，表明主要病原菌消除，可视为有效；若用药乳区乳汁体细胞数(SCC)仍多于100万/ml，表明病原菌未被消除，既为无效。

2 结果

对24头隐性乳房炎患病乳区用药前后乳汁体细胞数(SCC)进行检测结果如附表所示。

使用SPSS7.0软件统计分析组内用药前后和组间用药后的乳汁体细胞数(SCC)数值(±SD)。

首次用药时采奶检测，各组奶牛隐性乳房炎乳区所泌乳汁的体细胞数差异不显著(P>0.05)；用药4d后，各组奶牛隐性乳房炎乳区所泌乳汁的体细胞数均较用药前显著减少(P<0.01)；200U剂量组与400U剂量组和600U剂量组之间用药效果差异显著(P<0.01)；200U、400U、600U剂量重组溶葡萄球菌治疗组的体细胞数均显著低于头孢噻呋钠粉治疗组(P<0.05或 P<0.01)；3个剂量组与对照组之间均存在极显著差异(P<0.01)。

附表 用药前后乳汁体细胞检测结果(SCC) (万个/ml)

3 讨论

（1）重组溶葡萄球菌酶对奶牛隐性乳房炎有明显治疗效果。与头孢菌素类治疗相比，重组溶葡萄球菌酶能够显著降低治疗乳区泌乳的体细胞数，并能够很好的解决抗生素治疗牛乳房炎过程中出现的易产生耐药菌株、牛奶中抗生素残留过高、治疗效果不稳定易复发等问题，从而提高产奶量及牛奶的品质，最终达到减轻隐性乳房炎对养牛业造成的损失。（2）建议奶牛场在夏季的每月对全部泌乳牛进行一次隐性乳房炎监测，既定期进行牛奶体细胞计数检查，对阳性患牛采用重组溶葡萄球菌酶(400U以上剂量)治疗4d，以减低隐性乳房炎向临床型乳房炎的转化，在隐性阶段进行有效治疗，从而收到较理想的效果。（3）由于重组溶葡萄球菌酶对葡萄球菌等革兰氏阳性菌有效，但对大肠杆菌等革兰氏阴性菌引起的乳房炎并不十分有效，建议奶牛场在使用重组溶葡萄球菌酶的同时可辅助使用其他杆菌肽或酶类制剂，起到协同作用。

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[2]刘朝, 王京仁, 张成栋等.湖北地区奶牛乳房炎病原菌的分离鉴定与耐药性分析[J].中国奶牛, 2007, 7:35-38.

[3]倪春霞, 蒲万霞, 胡永浩等.奶牛乳房炎病原菌的分离鉴定及耐药性分析[J].西北农业学报, 2010, 19(2): 20-24.

[4]Schindler C A, Schuhardt V T.Lysostaphin:a New Bacterio lyticAgent for the Staphylococcus[J]． Proc Natl Acad Sci，1964，51:414-421.

[5]汤仲明, 刘秀文, 宋海峰.生物技术药物药代动力学[m].北京: 化学工业出版社, 2004.

[6]张继恩, 莫云杰, 张永容等.重组溶葡萄球菌酶的刺激性和皮肤变态反应试验研究[J].实验动物与比较医学, 2008, 28(4): 255-258.

[7]张继恩, 吴聪明, 沈建忠等.重组溶葡萄球菌酶致突变实验研究[J].上海交通大学学报(农业科学版), 2008, 26(4): 296-299.

[8]黄青山, 贾敏, 吴聪明等, 重组溶葡萄球菌酶对奶牛乳房炎和子宫内膜炎常见病原菌的体外杀菌试验[J].中国兽药杂志, 2007, 41(8): 41-47.