密环菌多糖对小鼠急性肝损伤的保护作用

沈明花，金梅花

（延边大学基础医学院，吉林延吉133000）

密环菌多糖对小鼠急性肝损伤的保护作用

沈明花，金梅花

（延边大学基础医学院，吉林延吉133000）

研究密环菌多糖对D-氨基半乳糖致肝细胞损伤的影响。D-氨基半乳糖诱导小鼠急性肝损伤，比色法测定血清丙氨酸氨基转移酶（ALT）、天冬氨酸氨基转移酶（AST）、白蛋白（Alb）、谷胱甘肽S转移酶（GST）活力和肝组织超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）的活性以及丙二醛（MDA）含量。密环菌多糖抑制急性肝损伤小鼠ALT、AST和GST活性的升高，并提高SOD、GSH-Px活力和ALB，同时显著降低MDA含量。密环菌多糖具有一定的肝保护作用，其机制可能与抗氧化作用有关。

密环菌多糖；D-氨基半乳糖；保肝

密环菌（Armillariella mellea），又名榛蘑，属担子菌亚门、白蘑科、蜜环菌属，主要分布于我国的吉林、黑龙江、四川、云南等地。作为一种食药兼用的真菌，它具有舒风活络、强筋壮骨、明目的功效，民间常被用于治疗癫痫、腰腿疼痛、佝偻病等。随着对蜜环菌的生物活性的深入研究，相继出现了密环菌的抗炎[1]、抗氧化[2]、抗肿瘤[3]、溶栓[4]、免疫调节[5]等报道。但有关密环菌的肝保护作用的研究甚少。本研究利用D-氨基半乳糖致肝损伤模型，探讨密环菌多糖的肝保护作用，并初步探讨其机理。

1 材料与试剂

1.1 药材与试剂

野生密环菌采自吉林省长白山地区。D-氨基半乳糖购置Sigma公司；联苯双酯滴丸（DDB）：北京协和药厂；ALT、AST、ALB、MDA、GSH-PX、SOD、GST、蛋白质测定试剂盒购于南京建成科技有限公司。

1.2 实验动物

昆明种小鼠，18 g～22 g，雌雄各半，由延边大学医学院动物科提供。

1.3 仪器

722型分光光度计：上海精密科学仪器有限公司；RT-2100型酶标仪：深圳雷杜公司；SHZ-2000型双配套循环水式多用真空泵：河南省巩义市英峪予华仪器厂；DGF30型电热鼓风干燥箱：南京实验仪器厂；5308型全自动离心机：Sigma公司产品。

2 方法

2.1 密环菌多糖

水提醇沉法提取多糖，其得率为2.2%。

2.2 实验动物分组及处理

将60只小鼠随机分为6组，设正常组、模型组、联苯双酯组、用药低、中、高剂量组（50、100、200mg/kg）。每日灌胃给药1次，连续7d，联苯双酯组为150mg/kg体质量；用药组灌胃剂量分别为50、100、200mg/kg；正常组和模型组灌等量的生理盐水。末次给药1 h后，除正常组小鼠腹腔注射等体积生理盐水外，其余各组按500mg/kg体质量腹腔注射D-GalN，造成肝损害模型。禁食，不禁水条件下，20 h后摘眼球取血，分离血清测转氨酶、GST、白蛋白，取肝脏测定各种抗氧化指标。

2.3 测定方法

均按试剂盒说明书操作。

2.4 统计学处理

用SPSS统计软件处理，数据以均数±标准差（x·s）表示，组间均数比较行单因素方差分析。

3 结果

3.1 密环菌多糖对ALT、AST、GST及Alb的影响

由表1可知，模型组AST、ALT和GST活性均显著高于正常组，而ALB含量显著低于正常组，表明肝损伤模型制备成功。联苯双酯组和中、高剂量用药组对D-GalN诱发的肝损伤小鼠ALT、AST及GST活性的升高均有明显的降低作用，并显著提高血清白蛋白水平。

表1 榛蘑多糖对ALT、AST、GST及Alb的影响Table1 Effect of Armillariella mellea polysaccharides on serum ALT，AST，GST and albumin

3.2 密环菌多糖对SOD、GSH-Px及MDA的影响

结果见表2。模型组与正常组比较，肝组织SOD和GSH-Px活性显著降低，而MDA含量显著高于正常组。联苯双酯组和各剂量用药组SOD和GSH-Px活性高于模型组，而MDA含量显著低于模型组。

表2 榛蘑多糖对SOD、GSH-Px及MDA的影响Table2 Effect of Armillariella mellea polysaccharides on SOD，GSH-PX and MDA

4 讨论

肝炎是由病毒、药物、酒精等多种因素引起的以肝细胞损伤为主的病理变化过程。D-GalN引起的动物肝损伤在病理学改变和生化指标的变化均与人类病毒性肝炎极为相似[6]，因此它所致的肝损伤模型是公认的实验动物模型。D-GalN致肝损伤的机制较复杂。其一，它作为肝细胞磷酸尿苷的干扰剂，使磷酸尿苷耗竭，导致糖原、核酸、蛋白质等物质代谢发生障碍，引起肝细胞损伤甚至坏死。当D-GalN进入体内诱发肝细胞损伤或坏死时，酶迅速释放入血，故检测血清中的ALT、AST和GST活性可反映肝细胞的损伤程度。实验结果显示，密环菌多糖对D-GalN所致的血清ALT、AST和GST活性的升高有抑制作用，并提高肝合成白蛋白的能力。这就提示密环菌拮抗D-GalN诱导的肝细胞的损伤，提高肝功能，具有保肝作用。D-GalN引起细胞损伤的另一机制是由于自由基及其启动的脂质过氧化连锁反应[7]。本实验模型组SOD、GSH-Px活性明显下降，而MDA含量显著高于正常组，这就说明D-GalN引起自由基的增多和脂质过氧化作用加强，导致机体抗氧化酶的消耗和脂质过氧化产物的增多。以不同的剂量处理密环菌多糖后肝组织SOD、GSH-Px活性明显升高，MDA含量显著降低，说明密环菌多糖有抗氧化作用。我们报道过榛蘑多糖的抗氧化作用，它可清除清除·OH和DPPH自由基，提高肝组织SOD、GSH-Px、CAT活性并抑制肝组织MDA的生成[8]，这与本实验结果一致。至于本实验中密环菌多糖的量效关系不明显的问题，可解释为有可能所设定的药物的浓度范围过小而引起的。虽然密环菌多糖的量效关系不明显，但中、高剂量组的保肝作用和抗氧化能力达到或超过阳性对照组联苯双酯的水平。

此外，我们曾研究过密环菌多糖对CCl4所致小鼠急性肝损伤具有保护作用[9]。CCl4诱导的肝损伤小鼠以榛蘑多糖灌胃时，可降低由CCl4所致的血清ALT和AST活性的升高，并提高肝组织GSH-Px活性和GSH含量，同时抑制MDA的生成。D-GalN和CCI4均可作为肝损伤诱导剂，它们的作用机制虽然不同，但以密环菌多糖处理时发现具有类同的效果，即保肝作用。再结合密环菌多糖的抗脂质过氧化作用，我们初步认为此种抗氧化作用有可能作为密环菌多糖保肝机制之一。

[1]Wu SJ,Tsai J Y,Lai M N,et al.Armillariella mellea shows anti-inflammatory activity by inhibiting the expression of NO,iNOS,COX-2 and cytokines in THP-1 cells[J].Am J Chin Med,2007,35(3): 507-516

[2]Ng L T,Wu S J,Tsai JY,et al.Antioxidant activities of cultured Armillariella mellea[J].Prikl Biokhim Mikrobiol,2007,43(4):495-500

[3]Sang Beom Kim,Gun Woo Lee,Hye Young Kim,et al.Inhibitive Effect of Mouse Sarcoma180 by Crude Polysaccharide Extracted from Fruiting Body of Ammillaria mettea[J].The Korean Journal of Mycology,2006,34(2):98-104

[4]Lee SY,Kim JS,Kim JE,et al.Purification and characterization of fibrinolytic enzyme from cultured mycelia of Armillaria mellea[J]. Protein Expr Purif,2005,43(1):10-17

[5]Sun Y,Liang H,Zhang X,et al.Structural elucidation and immunological activity of a polysaccharide from the fruiting body of Armillaria mellea[J].Bioresour Technol,2009,100(5):1860-1863

[6]KEPPLER D,LESCH R,REUTTER W,et al.Experimental hepatitis induced by D-galactosamine[J].Exp Mol Pathol,1968(9):279-290

[7]魏静元,张馨木,赵荣梅,等．抑肽酶对D-氨基半乳糖大鼠急性肝损伤的保护作用[J].分子科学学报,2007,23(3):194-197

[8]沈明花,崔海丹,王欣彤.榛蘑多糖的抗氧化作用研究[J].食品科技,2010,35(5):77-79

[9]崔海丹,沈明花.榛蘑多糖对小鼠急性肝损伤的保护作用[J]食品科技,2011,36(10):170-172

Protective Effects of Armillariella mellea Polysaccharides on Injured Liver Induced by D-galactosamine

SHEN Ming-hua，JIN Mei-hua
（Medical College，Yanbian University，Yanji133000，Jilin，China）

To investigate the protective effects of polysaccharides from Armillariella mellea on injured liver induced by D-galactosamine（D-GalN）.D-GalN was used to induce the liver injury in mice.The levels of ALT，AST，albumin and GST in serum，the activities of SOD，GSH-Px and MDA in liver homogenates were investigated using the colorimetric method.Armillariella mellea polysaccharides could reduce the elevated ALT，AST and GST，increase albumin content in serum of mice with liver injury，inhance the activities of SOD，GSHPx，and decrease the elevated MDA concentration in liver.Armillariella mellea polysaccharides have the protective effects on the acute chemical liver injury in mice.The effects may be due to its antioxidant activity.

Armillariella mellea polysaccharides；D-GalN；hepatoprotective

10.3969/j.issn.1005-6521.2014.03.025

2012-10-22

国家自然科学基金资助项目（No.30760150）

沈明花（1970—），女（朝鲜），副教授，博士，食用菌生物活性研究。