HPLC测定不同产地贝母中贝母辛的含量

邹和平，彭腾，寇俊闯，王小琴，禹亚杰

·品种品质·

HPLC测定不同产地贝母中贝母辛的含量

邹和平1，彭腾2，寇俊闯2，王小琴2，禹亚杰2

目的：对8种不同产地贝母中贝母辛的含量进行测定。方法：采用Kromasil C18(4.6 mm×250mm，E76575)色谱柱，流动相为乙腈:0.2%二乙胺水溶液=40:60；流速：1.00mL/min；柱温：27℃；检测波长：205nm。测定了8种不同产地贝母中贝母辛的含量。结果：不同产地贝母中贝母辛含量有一定的差异，其中新疆贝母含量最高为0.02734%，伊犁贝母和康定贝母含量次之，其他5种贝母含量较少。结论：本方法灵敏度高，而且简便、准确、重现性好，可用于贝母的内在质量控制。

贝母；贝母辛；高效液相色谱法

贝母为百合科贝母属（Fritillaria）多种植物的鳞茎，是我国具有悠久使用历史的传统中药，味苦、性寒，有清热润肺、化痰止咳、散结等功能，用于热咳嗽，咯痰带血，瘰疬肿毒[1]。在我国贝母的原植物种类繁多，据《中国植物志》记载，我国产20 种和2变种，全国各省区多有分布，近年来通过调查及分类学研究，我国贝母属植物己超过50种（变种）。但其治疗疾病的用途不一样，价值也有高低之分[2]。

近年来我国对各种贝母化学成分的研究陆续有报道，到目前为止己从贝母属植物中先后分离出97种生物碱，弄清了73 种生物碱的化学结构，其中异构体生物碱就有55 种[3]。同时现代药理学研究表明，贝母生物碱是其止咳、化痰和平喘等作用的有效成分[4]。而贝母辛(Peimisine)，是百合科贝母属贝母中的有效化学成分之一，研究表明它可以作用于M受体，松弛平滑肌以达到平喘的作用[5]；而通过抑制血管紧张素而达到降压的作用[6]。此外贝母辛还具有预防肝纤维化作用[7]。因此，贝母辛的含量测定对于评价药材质量、保证用药安全及控制制剂质量都有着重要意义。经文献检索发现针对贝母辛的研究领域多在结构的确定[8,9]。而对贝母辛的含量测定尚未见报道。本实验采用高效液相色谱法，针对不同产地的贝母进行含量测定。结果表明，本方法灵敏度高，而且简便、准确、重现性好。

1 试药与仪器

1.1 实验样品

贝母样品来源见表1。

表1 8种贝母及其产地

1.2 实验试剂

贝母辛对照品（购于Sigma公司）；乙腈（色谱纯）；氨水、甲醇、乙腈、二乙胺等试剂均为分析纯。

1.3 实验仪器

高效液相色谱仪（北京清博华科技有限公司，LC2000型，P1010 10 mL分析输液泵，UV1000D双波长紫外可见检测器）；真空干燥箱（BE-ZK-27L，东莞贝尔试验设备有限公司）；数显恒温水浴锅(XMTB-02810207,浙江余姚工业仪表二厂)；电子分析天平(MINQIAO,FA2004N)。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱：Kromasil C18(4.6 mm×250mm，E76575)；HS2000色谱工作站；流动相：乙腈:0.2%二乙胺水溶液=40:60；流速：1.00mL﹒min-1；柱温：27 ℃；检测波长：205 nm；按贝母辛峰计算，理论塔板数在3000以上。

2.2 对照品溶液的制备

精密称取贝母辛对照品适量于10 mL棕色容量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度，得0.25 mg﹒mL-1的贝母素辛对照品溶液，备用(4℃下保存)。

2.3 供试品溶液的制备

精密称取贝母样品粉末(过四号筛) 2 g，置烧瓶中，加浓氨试液4 mL浸润1小时，精密加入甲醇溶液40 mL，混匀，置85℃水浴中加热回流2小时，放冷，滤过，置250 mL烧瓶中用旋转蒸发仪蒸干，残渣加甲醇溶液溶解，定容至5 mL，0.22 μm滤膜滤过，备用。

2.4 标准曲线的制备

精密量取贝母辛对照品溶液2.0 μl、4 μl、6 μl、8 μl、10 μl、12 μl依次测定，以峰面积积分值自然对数为纵坐标，进样量自然对数为横坐标绘制标准曲线，得回归方程Y=16779X-6695.8，R2=0.9993。

图1 贝母辛的标准曲线

2.5 方法学考察

2.5.1精密度试验 取贝母辛对照品溶液进样10 μl，按上述条件进行测定，重复6次，贝母辛峰面积积分值计算RSD=0.74%(n=6)，表明该方法精密度良好。2.5.2 重复性试验 同批样品，照供试品制备方法制备5份，各进10 μl，进样检测，结果RSD=1.8%，表明该方法重现性良好。

2.5.3稳定性试验 取供试品溶液于0、2、4、6、8 h测定，结果表明供试品溶液在8 h内稳定性良好，RSD为2.3%。

2.5.4加样回收率试验 取已测得质量分数的贝母样品0.2～0.3g，精密称定，分别加入一定量的贝母辛对照品溶液，同供试品溶液的制备项下操作，制备供试溶液并测定，计算回收率，得贝母辛平均回收率为104.04%，RSD为4.04%(n=5)。

2.6 样品的测定

按供试品溶液项下制备样品溶液，取10 μl进样，测定贝母辛的含量见表2。

表2 不同品种和不同产地贝母中贝母辛的含量

结果表明: 不同产地贝母中贝母辛含量有一定的差异，其中新疆贝母含量最高为0.02734%，伊犁贝母和康定贝母含量次之，其他5种贝母含量较少，其中梭砂贝母中贝母辛含量最低。

3 讨论

从色谱图上看，8种不同产地的贝母在此分离条件下，不仅贝母辛能够很好地被指认，色谱图上的其他成分的色谱峰也很好，因此，这种方法有待于继续研究考察，进一步来确认其他的色谱峰，从而为贝母的成分研究及定量分析方法提供新的依据。

本实验对10个不同产地平贝母样品进行了测定，结果表明，不同产地贝母中贝母辛含量存在较大差异，因此应当注意产地与药材质量的关系。此外，本实验的测定结果为贝母辛的进一步提取分离研究也提供了可靠的依据。

[1] 徐荐琦,徐荐玮.贝母的研究综述[J].求医问药,2013,11(2): 319.

[2] 翟荣红.贝母的品种区别与性状鉴别[J].甘肃中医,2009,22 (6):62.

[3] 韩静.中药贝母多样性研究及质量考察[D].甘肃:兰州大学, 2009.

[4] 张鹏,徐仿周,吴继洲.贝母及其复方制剂中生物碱含量测定方法[J].医药导报,2004,23(4):261.

[5] 赵益,朱卫丰,刘红宁,等.贝母辛平喘作用及机制研究 [J].中草药,2009,40(4):597.

[6] Ping Li, Jing-Jing An. Puqienine E:An angiotensin converting enzyme inhibitory steroidal alkaloid from Fritillaria puqiensis[J]. Fitoterapia,2010,81:149.

[7] 刘琚,徐选福,郭传勇,等.贝母辛对肝纤维化大鼠肝组织α—SMA表达的影响[J].中国中医急症,2013,22(8):1274.

[8] R.Shakirow,R.N.Nuriddinov.Alkaloid of Petilium Edumdi[J]. KSimiya Primdnykh Soedinenii,1965,l(6):384．

[9] 王锋鹏,张格,唐心曜,等.贝母辛的结构修正[J].药学学报, 1992,27(4):273．

（责任编辑： 胡慧玲）

Determination of peimisine in Beimu from different growing areas by HPLC

ZOU He-ping1, PENG Teng2, KOU Junchuang2, WANG Xiao-qin2, YU Ya-jie2//(1. Chongqing Taiji Group, Chongqing 401147;2. Pharmacy College, Chengdu University of Traditional Chinese Medicine; The Ministry of Education Key Laboratory of Standardization of Chinese Herbal Medicine; State Key Laboratory Breeding Base of Systematic Research, Development and Utilization of Chinese Medicine Resources Co-founded by Sichuan Province and MOST, Chengdu 611137, China)

Objective:To determine the content of peimisine in 8 kinds of Beimu from different growing areas.Method:The separation was performed on a Kromasil C18(4．6 mm×250mm) column，and the mobile phase was consisted of methanol and 0.2% diethylamine solution. The fow rate was 1.00 mL﹒min-1.Temperature was 27 ℃.The UV detection wavelength was 205 nm.Result:Peimisine contents were different in different Beimu. Beimu from Xinjiang had the highest content of peimisine (0.02734%). The content of peimisine in Beimu from Yili and Kangding took the second place. The other 5 kinds of Beimu had less peimisine.Conclusion:The method is simple，accurate and can be used to control the internal quality of Beimu.

Beimu；Peimisine；HPLC

R 284

A

1674-926X(2014)03-002-02

1.太极集团有限公司，重庆 401147；2.成都中医药大学药学院 教育部中药材标准化重点实验室中药资源系统研究与开发利用省部共建国家重点实验室培育基地，四川 成都 611137

邹和平，长期从事药品生产与质量管理工作Tel:18602394688 Email:zouheping2008@126.com

彭腾，男，博士，副教授，主要从事中药活性成分的筛选及物质基础研究Tel:13880376673 Email:pengteng1973@sina.com

2013-11-27