柴胡桂枝颗粒质量标准研究

王婵,林广,黄志权,周永强,粟华生

·炮制制剂·

柴胡桂枝颗粒质量标准研究

王婵,林广,黄志权,周永强,粟华生

目的：建立柴胡桂枝颗粒质量标准。方法：采用薄层色谱法对处方中的君药柴胡进行定性鉴别；采用高效液相色谱法，色谱柱为Welch Ultimate XB-C18(250×4.6 mm，5 μm)，流动相为甲醇-0.1%磷酸（47:53），流速1.0 mL．min-1，检测波长280 nm，柱温25℃，对处方中黄芩的有效成分黄芩苷进行含量测定。结果：本品中柴胡定性鉴别薄层色谱特征明显，专属性强；有效成分黄芩苷含量测定专属性强，稳定性、重复性好，平均回收率为100.15%，RSD为1.22%（n=6）。结论：该方法简便、准确、重复性好，可作为柴胡桂枝颗粒的质量控制。

柴胡桂枝颗粒；质量标准；薄层色谱法；含量测定

柴胡桂枝颗粒由柴胡、桂枝、黄芩、白芍、人参等九味中药组成，具有和解少阳，发散表邪的功能。主治少阳证兼有太阳表证，症见发热微恶寒、肢节烦痛，微呕，心下支结，外证未去者，亦可用肝胃不和之胃疼[1]。中药配方颗粒是应用现代制药技术将传统中药饮片经过提取、浓缩、干燥、制粒、包装而成的颗粒状剂型，具有应用灵活、携带方便、质量可控、不需煎煮等优点[2]。随着生活水平的日益提高，人们对中药免煎颗粒的需求量不断增长，因此提高对中药配方颗粒的质量控制至关重要。有关柴胡桂枝颗粒药理作用研究的报道较多，但对其质量控制方面的报道较少。为了保证药品的安全性、有效性及质量可控性，本研究对处方中的君药柴胡进行了薄层色谱鉴别，并采用高效液相色谱法对黄芩中的黄芩苷进行了含量测定。结果表明，本法操作简便，稳定性、重现性好，精密度高，测定结果准确，可作为柴胡桂枝颗粒的质量控制。

1 仪器与试药

Agilent 1260高效液相色谱仪（美国Agilent公司）；GR-202分析天平(日本)；昆山KQ-500DE超声波清洗仪（昆山市超声仪器有限公司）；卡玛薄层摄像系统（Reportstar-5）；预制硅胶G薄层板（青岛海洋化工有限公司）。

黄芩苷对照品（批号：MUST-11101403，含量测定用，成都曼思特生物科技有限公司）；柴胡对照药材（批号：120992-201108，中国食品药品检定研究院）；甲醇（FIRSH）为色谱纯，水为超纯水，其他试剂均为分析纯；柴胡桂枝颗粒（批号：A090283-01、A091015-01、A100364-02和A101035-01，培力（南宁）药业有限公司）。

2 方法与结果

2.1 柴胡鉴别

取本品5.0 g，加热水30 mL使溶解，放冷，用水饱和正丁醇振摇提取2次，每次25 mL，合并正丁醇液，用氨试液洗涤2次，每次30 mL，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇1 mL使溶解，作为供试品溶液。另取柴胡对照药材0.5 g，加水50 mL，加热回流1 h，滤过，滤液置水浴上蒸至约30 mL，放冷，自“用水饱和正丁醇振摇提取2次”起同供试品溶液方法制成对照药材溶液。再取缺柴胡药材的阴性样品5.0 g，同供试品溶液方法制成阴性样品溶液。照薄层色谱法（中国药典2010年版一部附录Ⅵ B）试验，吸取上述供试品溶液及阴性样品溶液各5 μL，对照药材溶液10 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-乙醇-水（8：2：1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以2 %对二甲氨基苯甲醛的40 %硫酸溶液，60℃加热至斑点显色清晰，日光及紫外光灯（365 nm）下检视。供试品色谱中，在与柴胡对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的主斑点，结果见图1。

图1 柴胡薄层鉴别色谱图

2.2 黄芩苷含量测定

2.2.1 色谱条件 色谱柱为Welch Ultimate XB-C18，250×4.6 mm，5 μm；以甲醇-0.1%磷酸（47:53）为流动相；检测波长为280 nm；流速1.0 mL．min-1；柱温25℃。理论塔板数按黄芩苷峰计算应不低于3000。

2.2.2 对照品溶液的制备 取黄芩苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1 mL含30 mg的溶液，即得。2.2.3 供试品溶液的制备 取本品适量，研细，取约0.2 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入70%乙醇50 mL，称定重量，超声处理（功率500 W，频率40 kHz）30 min，取出，放冷，称重，用70 %乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.2.4 阴性样品溶液的制备 取缺黄芩药材的柴胡桂枝汤配方颗粒阴性样品，研细，取约0.2 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入70 %乙醇50 mL，称定重量，超声处理（功率500 W，频率40 kHz）30 min，取出，放冷，称重，用70 %乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.2.5 专属性考察 分别吸取对照品溶液、供试品溶液、阴性样品溶液各10 μL进样。在“2.2.1色谱条件”下，供试品中黄芩苷色谱峰与对照品色谱峰保留时间一致，并与其他共存成分最小分离度为1.76（大于1.5），理论塔板数为10258（大于3000），主峰与杂质峰达到基线分离，且阴性样品在相应的位置没有色谱峰干扰，说明本方法专属性良好。色谱图见图2、图3、图4。

图2 黄芩苷对照品色谱图

图3 供试品色谱图

图4 阴性样品色谱图

2.2.6 线性关系考察 取黄芩苷对照品7.62 mg，置25 mL的量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得（浓度为0.3048 mg．mL-1)，精密量取上述对照品溶液0.20、0.50、1.0、2.0、4.0 mL分别置10 mL的量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，作为线1～线5，取0.3048 mg．mL-1的对照品溶液作为线6。分别精密吸取上述对照品溶液各10 μL，注入液相色谱仪进行测定。按上述色谱条件测得峰面积积分值，以进样量(μg)为横坐标，峰面积积分值为纵坐标，黄芩苷对照品的回归方程：Y=2615.5136X+21.6848， R² = 0.9999。结果表明：黄芩苷在0.06096～3.048 μg范围内时，黄芩苷进样量与峰面积呈良好的线性关系。

2.2.7 精密度试验 精密吸取黄芩苷对照品溶液(浓度为60.96 μg．mL-1)10 μL，重复进样6次，测定峰面积，结果表明，黄芩苷峰面积的RSD(%)值为0.07 %，小于2.0 %，说明仪器精密度良好。

2.2.8 稳定性试验 取同一供试品溶液，分别于0 h、3 h、5 h、7 h、9 h进样，依法测定，结果黄芩苷峰面积的RSD(%)值为0.20 %，说明供试品溶液在9 h稳定。

2.2.9 重复性试验 取同一批样品，研细，取6份，每份约0.2 g，精密称定，按“2.2.3供试品溶液的制备”项方法制得供试品溶液，精密吸取供试品溶液各10 μL进样，测定峰面积并计算黄芩苷含量。结果黄芩苷的平均含量为6.4194 mg．g-1，含量的RSD(%)值为0.39 %，说明重复性良好。

2.2.10 中间精密度试验 取同一批样品，研细，取12份，每份约0.2 g，精密称定，按“2.2.3供试品溶液的制备”项方法制得供试品溶液，精密吸取供试品溶液各10 μL分别在不同时间注入两台不同液相色谱仪（每台测6份），测定峰面积并计算黄芩苷含量。结果黄芩苷的平均含量为6.32 mg．g-1，黄芩苷含量的RSD(%)值为1.83%，说明中间精密度良好。

2.2.11 加样回收率试验 取同一批已知含量的样品（含量为6.4194 mg．g-1），研细，取6份，每份约0.1 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，分别精密加入黄芩苷对照品溶液（浓度为0.3048 mg．mL-1）2.0 mL，水浴蒸干溶剂，按供试品溶液的制备方法制得供试品溶液，进样测定，计算回收率，结果见表1。

表1 黄芩苷加样回收率试验结果

结果表明，黄芩苷回收率在95%～105%之间，RSD(%)值小于2.0%，说明本方法回收率良好。

2.2.12 样品含量测定 取本品三批各约0.2 g，精密称定，照“2.2.3供试品溶液的制备”制得供试品溶液，在“2.2.1色谱条件”下进样测定，结果见表2。

表2 柴胡桂枝颗粒含量测定结果

3 讨论

根据柴胡桂枝颗粒的组方原则与方解，柴胡、桂枝为君药，黄芩、白芍为臣药，本研究按照处方的君臣佐使优先顺序首先对君药“柴胡”进行了薄层鉴别研究，并建立了其薄层色谱定性鉴别方法，结果薄层色谱斑点清晰，阴性无干扰，专属性强，重现性好。

在含量测定研究中，曾对君药“桂枝”中的桂皮醛进行过含量测定的研究，供试品溶液的制备方法采用的是与《中国药典》2010版【桂枝】的含量测定项的方法：用甲醇进行超声处理；流动相为：乙腈-0.1%冰醋酸（33:67），检测波长为290nm。但经计算得到产品中桂皮醛含量约为0.007%，含量较低，不仅进行准确定量难度较大，而且意义不大，因此未选择其作为含测指标。在黄芩苷含量测定中，参考2010版《中国药典》一部【黄芩】含量测定项的流动相[3]，使用甲醇-0.1%磷酸（47:53）作为流动相，结果黄芩苷峰与杂质峰分离效果较好，因此确定选用该流动相。在黄芩苷提取条件的考察中，分别对甲醇、70%甲醇、50%甲醇、乙醇、70%乙醇、稀乙醇等提取溶剂进行了比较，结果用70%甲醇和70%乙醇作为提取溶剂时，测得含量较高且无明显差异，但考虑到甲醇的毒性，因此选择70%乙醇作为提取溶剂。除此之外，还考察了提取方式（超声处理、加热回流、浸泡处理），超声处理时间（15 min、30 min、45 min），溶剂用量（25 mL、50 mL、100 mL）对黄芩苷含量的影响，结果以50 mL超声处理30 min提取的黄芩苷含量较高。文中建立的定性、定量方法准确、可行，可有效控制柴胡桂枝颗粒的质量。

[1] 段富津主编.方剂学[M].上海:上海科技出版社,1995.

[2] 刘志勤.中药配方颗粒利弊浅析[J].实用中医药杂志,2007, 28(8):722.

[3] 国家药典委员会.中国药典一部[S].北京:中国医药科技出版社,2010 :282.

（责任编辑：陈思敏）

Study on the quality standard of Chaihuguizhi Granules

WANG Chan, LING Guang, HUANG Zhi-quan, ZHOU Yongqiang, LI Hua-sheng//(Pura (Nanning) Pharmaceutical Co., Ltd., Nannin 530000, Guangxi)

Objective:To establish the quality standard of Chaihuguizhi Granules．Method:TLC was used to identify Chaihu in the prescription. HPLC method was used to carry out the determination. Welch Ultimate XB-C18column(250×4.6mm，5 μm) was used, and mobile phase was methanol-0.1% phosphoric acid(47:53). The fow rate was 1.0 mL．min-1,and detection wavelength was 280 nm. The column temperature was set at 25℃.Result:TLC Chromatogram were clear without the interference of the blank control. The average recovery of Baicalin in Scutellariae Radix were 100.15% with RSD of 1.22% ( n=6).Conclusion:The methods of identifcation and quantifcation are convenient, accurate and reproducibility. They can be used effectively for the quality control of Chaihuguizhi Granules．

ChaihuguizhiGranules; quality standard; TLC; content determination

R 283

A

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2013-05-02