miR-26a在结肠癌组织中的表达及其临床意义

贺利恒，李 燕，黄小都，黄 俊，曾 希*

(1.南华大学 肿瘤研究所，湖南 衡阳 421001；2.耒阳市人民医院 消化内科，湖南 耒阳 421800；3.娄底市中心医院，湖南 娄底 417000)



miR-26a在结肠癌组织中的表达及其临床意义

贺利恒1,2，李 燕1,3，黄小都2，黄 俊1，曾 希1*

(1.南华大学 肿瘤研究所，湖南 衡阳 421001；2.耒阳市人民医院 消化内科，湖南 耒阳 421800；3.娄底市中心医院，湖南 娄底 417000)

目的：探讨miR-26a(Homo sapiens miR-26a)在人结肠癌组织中的表达改变情况及其临床意义。方法：运用qRT-PCR检测72例患者结肠癌组织及对应癌旁正常组织中miR-26a的表达情况。结果：qRT-PCR结果显示，miR-26a在结肠癌组织中较癌旁组织表达显著下调，miR-26a的表达随着结肠癌临床分期的演进和浸润的加深而下调，且有淋巴结转移组织的miR-26a表达显著低于无淋巴结转移组织，差异均有统计学意义(P<0.05)。结论：miR-26a在结肠癌组织中下调，且其下调程度与结肠癌临床分期、浸润深度以及淋巴结转移相关。

miR-26a；结肠癌；临床诊断

最新研究表明，miR-26a在乳腺癌组织和细胞中表达显著下调。miR-26a模拟物转染乳腺癌细胞实验发现，miR-26a可明显抑制乳腺癌细胞增殖[1]。但是目前关于miR-26a在结肠癌发生发展中所扮演的角色没有任何报道。本研究采用qRT-PCR技术，首次分析miR-26a在人结肠癌组织中的表达改变情况及其临床意义，为结肠癌发生发展的分子机制提供实验依据，为其防治提供理论基础。

1 材料与方法

1.1 实验材料

组织标本来源于2010-2013年中南大学湘雅医院及南华大学附属第一医院收治的结肠癌患者，均按照WHO结肠癌组织学分类及分级标准，其中58例为本研究所以前留下来的标本。miProfileTM miRNA qPCR试剂盒(广州复能基因有限公司)；Real-time PCR 96孔板及封口膜(美国ABI 公司)。

1.2 miR-26a表达水平检测

RT反应：反应体系为20μL，包括5×RT缓冲液4μL、25mmol/L镁离子3μL、10mmol/L三磷酸脱氧核苷0.75μL、40U/μL RNA酶抑制剂0.25μL、1μmol/L miR-200c特异性RT引物1.2μL、200U/μL莫罗尼鼠白血病病毒RT酶0.2μL、RNA 1μg，无酶水加至20μL。反应条件：16℃下30min，42℃下30min，再在85℃下10min灭活RT酶，产物于-20 ℃下冻存备用。

qRT-PCR反应：反应体系为20μL，包括稀释后的RT产物2μL、2×qRT-PCR缓冲液10μL、5μmol/L miR-200c特异性PCR引物0.4μL、5 U/μL耐热DNA聚合酶0.2μL、灭菌双蒸水7.4μL。反应条件：先于95℃下活化Tag酶3min，然后于95℃下12s、62℃下35s，共40个循环。

1.4 统计学分析

2 结果

2.1 结肠癌组织中miR-26a表达水平

本研究运用广州复能基因有限公司推出的miProfile miRNA qPCR Primer，以cDNA为模板的qPCR进行实验验证，检测72例结肠癌患者的肿瘤组织及相应癌旁正常组织中的miR-26a表达水平。结果显示，72例结肠癌组织中miR-26a表达水平是相应癌旁正常组织的0.625倍。笔者选取1例癌旁正常组织的miR-26a值为1，然后分析得到72例结肠癌组织中miR-26a的平均表达水平(2-△△CT)为(0.675±0.046)，癌旁正常组织中miR-26a的平均表达水平(2-△△CT)为(1.080±0.043)，二者比较差异显著，具有统计学意义(P<0.001)。

2.2 miR-26a的表达与结肠癌临床病理参数之间的关系

以miR-26a表达值的中位数为临界值，miR-26a表达值大于等于中位数为高表达，少于中位数为低表达。结果显示，在72例结肠癌组织中有45例低表达，27例高表达。采用软件分析发现，结肠癌组织中miR-26a的表达与患者年龄、性别、大体分型、分化程度等无显著相关性，差异无统计学意义 (P>0.05)；然而miR-26a的表达随着结肠癌临床分期的升高而下调(P=0.006)，肿瘤浸润超过浆膜的结肠癌组织中miR-26a降低更明显(P=0.045)；同时在有淋巴结转移的结肠癌组织中miR-26a的表达显著低于无淋巴结转移组织 (P=0.020)，差异均具有统计学意义。

3 讨论

miR-26a存在于两个染色体位点上，miR-26a-1位于3号染色体CTDSPL基因内含子，miR-26a-2位于12号染色体CTDSP2内含子。目前有关miR-26a在肿瘤发生发展中作用的研究报道很少，发表在国际顶级医学杂志《New England Journal of Medicine》上的一篇报道显示[2]，miR-26a在肝癌中表达下调，且在非癌肝组织中，女性的表达水平显著高于男性。此外，miR-26a的表达水平与肝癌患者的生存时间及其对干扰素治疗的敏感性相关。Lu等[3]报道，miR-26a在鼻咽癌中表达下调，其能通过靶基因EZH2抑制鼻咽癌细胞生长和致瘤性，以上研究均表明miR-26a是一个抑瘤miRNA。

本研究通过qRT-PCR证实miR-26a在结肠癌组织中表达显著下调，其表达随着结肠癌临床分期的演进和浸润深度的加深而下调，且有淋巴结转移组织的miR-26a表达显著低于无淋巴结转移组织，提示miR-26a的下调可能与结肠癌的临床分期、浸润深度以及淋巴结转移相关，这意味着miR-26a有希望成为早期大肠癌患者预后的标志物。目前已有许多miRNA被当作潜在的预后标志物，miR-320和miR-498表达下降均与TNM分期II型结直肠癌患者预后相关[4]。其他研究表明[5-6]，高水平表达的miR-200c、miR-185、miR-215以及低水平表达的miR-133b均与肿瘤预后不良相关。笔者将继续深入研究miR-26a在结肠癌发病中的功能，系统阐明miR-26a参与结肠癌发生发展可能的分子机制，为其防治提供理论依据和实验基础。

[1] GAEDCKE J, GRADE M, CAMPS J, et al. The rectal cancer microRNAome-microRNA expression in rectal cancer and matched normal mucosa[J]. Clin Cancer Res,2012,18(18):4919-4930.

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[3] LU J, HE ML, WANG L, et al. miR-26a inhibits cell growth and tumorigenesis of nasopharyngeal carcinoma through repression of EZH2[J]. Cancer Res,2011(71):225-233.

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(责任编辑：尹晨茹)

2013-12-24

国家自然科学基金(81101643)

贺利恒(1980-)，湖南省耒阳市人民医院主治医师，研究方向为胃癌发病分子机制。

曾希，南华大学肿瘤研究所副教授，硕士生导师，南华大学病理教研室主任，研究方向为胃癌发病分子机制。

R735.3+5

A

1673-2197(2014)09-0006-02