复方三黄酊薄层色谱鉴别与乙醇量测定的研究

丁长玲，赵永德，高 华，崔俊凤

（1.青岛大学，山东青岛266021；2.滨州医学院附属医院，山东滨州256603；3.滨州市食品药品检验检测中心，山东滨州256605）

复方三黄酊薄层色谱鉴别与乙醇量测定的研究

丁长玲1，2，赵永德2，高 华1，崔俊凤3

（1.青岛大学，山东青岛266021；2.滨州医学院附属医院，山东滨州256603；3.滨州市食品药品检验检测中心，山东滨州256605）

目的建立复方三黄酊的薄层色谱鉴别及乙醇量检查方法。方法用硅胶G薄层板，分别以甲苯－异丙醇－乙酸乙酯－甲醇－水（6∶1.5∶3∶1.5∶0.3）、三氯甲烷－甲醇－水（30∶15∶4）、苯－乙酸乙酯（19∶1）为展开剂，温度26℃、相对湿度62%的条件下，鉴别3种黄连、黄柏和冰片药材，同时用Agilent 6890N气相色谱仪，测乙醇含量。结果供试品色谱中，在与对照品色谱或对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色斑点，测得乙醇量为48.0%～50.0%。结论本法简单易行，可用于复方三黄酊的薄层鉴别和乙醇量测定。

复方三黄酊；薄层色谱法；乙醇量

急性创伤感染、慢性皮肤溃疡、褥疮、烧烫伤是外科常见的疾病，传统的治疗方法是采取清洁换药，即使用抗菌消毒剂（碘制剂、乙醇、醋酸氯己定等）处理创面，然后无菌包扎。治疗慢性皮肤溃疡即在上述治疗的基础上配合红外线照射。由于抗菌消毒药没有直接抗炎消肿作用，对改善创面红肿、渗出等效果较差。复方三黄酊是一种将黄连、黄柏、黄芩粗粉，采用48%～50%乙醇溶液用渗漉法进行处理，滤液中加入冰片后制得的用于治疗褥疮和外科创伤感染的酊剂。黄芩具有清热解毒的作用，黄连有较强的清热泻火解毒的功效，黄柏有独特的清热燥湿解毒疗创的效果［1］，三药合用，消炎祛腐效果较好［2］。冰片具有去腐生肌、凉血止痛功效，既能刺激肉芽组织生长，又能减轻病人痛苦［3］。采用复方三黄酊局部湿敷治疗，使药物直接持续地作用于患部，药物以透皮给药的方式迅速渗透，可快速发挥其抗菌消炎、止痛消肿、祛腐生肌功效，并及时缓解了分泌物对组织的损害，使患部组织有了体液连续性更新的条件。且随着辅料的更换，将细菌及坏死组织清除，避免了细菌内、外毒素和代谢产物对组织的滞留性破坏，为创面创造了一个清洁、无菌的良性环境。具有清热、解毒、抗菌消炎，消肿、祛腐生肌、清凉止痛作用，以加速创面的愈合，具有很好的临床疗效。

近年来，随着医药卫生体制改革、制药工艺快速发展、医院制剂配制准入标准提高，使得医院制剂的发展面临严峻挑战［4～6］。鉴于该药物制备周期长，难以控制提取溶媒乙醇的含量，原标准中只有黄芩的薄层鉴别方法，无黄连、黄柏和冰片中有效成分的薄层鉴别和乙醇量测定等指标。本文主要对黄连、黄柏、冰片进行鉴别，用气相色谱法对乙醇量进行测定，能切实保证制剂的质量，从而确保患者用药安全、有效。

1 材料

1.1 仪器 高速中药粉碎机（武义县屹立工具有限公司），渗滤桶、硅胶G薄层板（TLC Silica gel 60，50 Glass plates10×20 cm，德国默克公司提供）；Agilent6890N气相色谱仪，Agilent 7693A自动液体进样器；火焰离子化检测器，色谱柱：HP－INNOWax Polyethlene Glycol（产品号：19091N－133内径：250.00μm，长度：30.0 m，液膜厚度：0.25μm）。

1.2 试药 乙醇和正丙醇为色谱纯（国药集团，批号分别为20130506和20130912）。实验中所用中药材（黄连、黄芩、黄柏、冰片）均购于山东同济堂医药有限公司，均经山东中医药大学鉴定教研室周凤琴教授鉴定和山东省滨州市药品检验检测中心检验，符合《中国药典》2010年版标准；黄连对照药材（中国食品药品检定研究院，批号：120913－200407），盐酸小檗碱对照品（中国食品药品检定研究院，批号：110713－200208）、黄柏对照药材（中国食品药品检定研究院，批号：121510－200702）、冰片对照品（中国食品药品检定研究院，批号：110743－200905）；所用试剂均为分析纯。

2 复方三黄酊的制备

2.1 处方 黄连100 g，黄柏100 g，黄芩100 g，冰片5 g，50%乙醇至1 000 mL。

2.2 制备方法 以上四味（除冰片外），粉碎成粗粉，混匀，照《中国药典》2010年版（一部）附录ⅠO流浸膏剂与浸膏剂项下的渗漉法［7］，用约300 mL 50%乙醇作溶剂，搅拌均匀，湿润，使其充分膨胀。装入渗漉筒内，缓缓加入50%的乙醇溶液350～400 mL，待排出药粉粉粒之间的空气，并有提取溶剂流出约20 mL左右时，关闭放料阀，盖上漉筒、浸渍48 h，用渗漉法缓慢渗漉，收集初漉液和续漉液，静置，滤过，加入冰片，调整至规定量，搅拌均匀，分装，即得。

3 复方三黄酊的定性鉴别

3.1 黄连的鉴别 取本品10 mL，滤过，滤液挥干，残渣加甲醇1 mL使溶解，作为供试品溶液。取黄连对照药材0.1 g，加甲醇10 mL，超声处理30 min，滤过，滤液浓缩至约2 mL，作为对照药材溶液。取盐酸小檗碱对照品5.0 mg，加甲醇10 mL使其溶解，制成每1 mL含0.5 mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法试验，吸取上述溶液各2μL，分别点样于同一硅胶G薄层板（105℃加热活化30 min）上，以甲苯－异丙醇－乙酸乙酯－甲醇－水（6∶1.5∶3∶1.5∶0.3）为展开剂，置氨蒸气饱和的展开缸中展开，温度：26℃、相对湿度：62%上行展开，取出，晾干，置紫外灯（365 nm）下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱和对照药材色谱相应的位置上，显相同的黄色荧光斑点。缺黄连的阴性对照同样品处理方法，无干扰，见图1。

图1 黄连的鉴别图谱1、2、3为供试品；4.为盐酸小檗碱；5.为黄连对照药材；6.为阴性对照

3.2 黄柏的鉴别 取本品10 mL，滤过，滤液挥干，残渣加1%醋酸甲醇1 mL使溶解，作为供试品溶液。取黄柏对照药材0.2 g，加1%醋酸甲醇20 mL，超声处理20 min，滤过，滤液浓缩至约2 mL，作为对照药材溶液。照薄层色谱法试验，吸取上述溶液各2μL，分别点样于同一硅胶G薄层板（105℃加热活化30 min）上，以三氯甲烷－甲醇－水（30∶15∶4）下层溶液为展开剂，置氨蒸气饱和的展开缸中（温度：26℃相对湿度：62%）上行展开，取出，晾干，置紫外灯（365 nm）下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的黄色荧光斑点。缺黄柏的阴性对照同样品处理方法，无干扰，见图2。

图2 黄柏的鉴别图谱1、2.为供试品；3.为黄柏对照药材；4.阴性对照

3.3 冰片的鉴别 取本品10 mL，滤过，滤液挥干，残渣加乙酸乙酯1mL使溶解，作为供试品溶液。取冰片对照品5 mg，加乙酸乙酯10 mL制成每1 mL含0.5 mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法试验，吸取上述溶液各2μL，分别点样于同一硅胶G薄层板（105℃加热活化30 min）上，以苯－乙酸乙酯（19∶1）为展开剂，展开，取出，晾干。喷以1%香草醛硫酸溶液，105℃加热至斑点显色清晰。日光下检测，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同的暗红色斑点。缺冰片的阴性对照同样品处理方法，无干扰，见图3。

图3 冰片的鉴别图谱

4 乙醇量检查

4.1 色谱条件与系统适用性试验 火焰离子化检测器，色谱柱：HP－INNOWax Polyethlene Glycol，起始温度为80℃，维持5 min，再以每分钟10℃的速率升温至110℃；进样口温度：190℃；检测器温度：220℃，理论板数按正丙醇峰计算应不低于8 000，乙醇峰与正丙醇峰的分离度应大于2.0，分流比：20∶1。按此色谱条件进行试验，色谱峰分离条件好，见图4。

图4 供试品溶液 1.乙醇；2.正丙醇

4.2 校正因子的测定［7］精密量取恒温至20℃的无水乙醇4、5、6 mL，分别置100 mL量瓶中，分别精密加入恒温至20℃的正丙醇（内标物质）5 mL，用水稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。取上述3种溶液1μL，注入气相色谱仪，分别连续进样3次，测定峰面积。计算校正因子，见表1。

表1 对照品溶液的峰面积及校正因子

4.3 供试品溶液的制备 精密量取恒温至20℃的供试品10 mL，置100 mL量瓶中，精密加入恒温至20℃的正丙醇5 mL，用水稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液，取1μL注入气相色谱仪，按乙醇量测定方法测定，即得。

取6批样品乙醇量测定结果分别为：49.0%、48.2%、48.6%、49.2%、48.8%、49.6%，平均含量为48.9%。根据配方及工艺流程，6批样品乙醇含量测定在48.2%～49.6%范围内，因此制定乙醇量标准为48.0%～50.0%。

5 讨论

5.1 在制备复方三黄酊时，要把握重点环节，注意装渗漉桶前，一定先将药材用溶剂充分膨胀、渗漉桶中的药材松紧度要适当、渗漉速度不能过快。一般每公斤药材流速1～3 mL·min－1、收集滤液至量时，一定要将药液充分静置。

5.2 冰片不要提前溶解到乙醇中进行渗漉，要在接好渗漉液后再加入，否则滤液中产生的沉淀较多。

5.3 对于中药复方制剂的鉴别，应根据其特点，寻找简便、快速并具有较强专属性的方法，才能起到有效控制质量的目的。采用薄层色谱鉴别的方法对复方三黄酊中的黄连、黄柏、冰片进行鉴别，其方法简便易行，层析分离清晰，斑点集中，阴性对照无干扰，重复性好，专属性强，可完善复方三黄酊的质量标准，从而更好的控制该药品的质量，保证临床疗效。

5.4 在展开剂的选择上，经过多次筛选，最后选用分别以甲苯－异丙醇－乙酸乙酯－甲醇－水、三氯甲烷－甲醇－水、苯－乙酸乙酯为黄连、黄柏、冰片的展开系统，分离效果较理想，斑点清晰无干扰，故可作为复方三黄酊中黄连、黄柏、冰片的薄层色谱鉴别方法。

5.5 本文建立用气相色谱法测定乙醇含量，控制范围为48.0%～50.0%，能有效去除无效成分［8］，方法简便、灵敏，能更有效地控制药品质量。

［1］商学敏.中药学［M］.北京：中国中医药出版社，2002：568.

［2］王玉，赵淑梅，张静，等.复方三黄酊与芩连搽剂联合治疗慢性皮肤溃疡102例［J］.中国药业，2006，15（3）：67.

［3］程玲，王珍，曲明芬.复方三黄酊联合湿润烧伤膏治疗压疮的效果及护理［J］.全科护理，2013，11（6）：1540－1541.

［4］电红，杨建森，陈燕铭，等.我院2007～2011年医院制剂的应用情况分析［J］.中国药房，2012，23（46）：4347－4349.

［5］申国庆.医院皮肤外用制剂的临床优势与未来趋向浅析［J］.药学与临床研究，2011，19（1）：10－12.

［6］国文，赵剑.探讨医院制剂的管理现状与发展［J］.中国当代医院，2011，18（3）：135.

［7］国家药典委员会.中华人民共和国药典2010年版（二部）［S］.北京：中国医药科技出版社，2010：附录.

［8］徐维玲，李俊，李博.中药液含乙醇量的计算与酒精计实测度数的关系［J］.科技创新导报，2010，31：212.

Study on identification of Compound Sanhuang Tincture by TLC and determ ination of ethanol

DING Chang-ling1，2，ZHAO Yong-de2，GAO Hua1，CUIJun-feng3
（1.Qingdao University，Qingdao 266021，China；2.Affiliated Hospital of Binzhou Medical College，Binzhou 256603，China；3.Binzhou Center for Food and Drug Control，Binzhou 256605，China）

ObjectiveTo establish an advanced TLC identification method of Compound Sanhuang Tincture，and a method for the determination of ethanol.M ethodsThe Rhizoma coptidis，Cortex phellodendri and Synthetic borneol were identified withmobile phase ofmicroemulsion form incacid by silica gel G thin layer plate.The consis ofmicroem ulsion was toluene：toluene－isopropanol－ethyl acetate－methanol－H2O＝6∶1.5：3∶1.5∶0.3，chloroform－methanol－H2O（30∶15∶4），benzene－ethyl acetate（19∶1）.The temperature was 26℃，and the relative humidity 62%.The determination of ethanol was carried outwith Agilent6890N gas liquid chromatography.ResultsThe spots in the chromatogram of the test solution corresponding to the position of each reference substance had the same color.The content of alcoholwas48.0%～50.0%.ConclusionThemethod was simple and can he used for the thin layer identification of Compound Sanhuang Tincture and the determination of ethanol.

Compound Sanhuang Tincture；TLC；Ethanol content

R927.11

A

2095－5375（2014）10－0585－004

滨州医学院科技计划项目（No.BY2010KJ20）

丁长玲，女，副主任药师，研究方向：医院新制剂的研发和临床药学，E－mail：dingling256603＠163.com

高华，男，教授，硕士生导师，研究方向：天然活性物质的提取、结构改造和应用，Tel：18661801816，E－mail：gaohuaqy＠126.com