参芪生血颗粒的制备及质量研究

徐晓艳，梁永广，贾光伟

（聊城市人民医院，山东聊城252000）

参芪生血颗粒的制备及质量研究

徐晓艳，梁永广，贾光伟

（聊城市人民医院，山东聊城252000）

目的制备参芪生血颗粒并进行质量标准研究。方法采用正交试验法对影响提取分离的关键因素进行考察，并参照《中国药典》2010年版进行质量研究。结果以挥发油得量为主要考核指标，确立最优提取工艺为：药材以10倍量水蒸馏4 h。在水提工艺中，以黄芪甲苷含量为主要考察指标确立最佳提取工艺为：药物残渣加10倍水，提取3次，每次时间为1.5 h。结论该制备参芪生血颗粒的工艺可行，质量符合要求。

参芪生血颗粒；制备；质量研究

参芪生血颗粒是在我院自制生血汤的基础上改造而成［1］。方中含有当归、地黄、人参、黄芪、川芎、仙茅、淫羊藿、茯苓等。临床上用于治疗血虚等症，目前主要用于治疗再生障碍性贫血。

本文对其工艺条件进一步改进，主要研究其提取工艺、制备方法、定性鉴别、定量研究等。采用多种指标对制剂提取工艺进行考察，明确提取工艺中的关键工艺参数。对浓缩干燥工艺进行研究，确定干燥温度、方式、相对密度等工艺参数。对成型工艺进行研究考察，明确辅料种类和加入量；考察颗粒度的堆密度、吸湿性等成型工艺参数。在制剂质量标准研究中拟对黄芪、当归、人参、地黄、川芎、淫羊藿进行薄层鉴别，采用HLPC法测定黄芪中黄芪甲苷的含量，提供方法学考察。通过优化各制备过程的有关参数使制备工艺更加规范合理，制备过程更加明确细化，为该药能够更好地发挥疗效提供理论依据。

1 生血颗粒的制备

1.1 仪器与试剂

1.1.1 仪器 挥发油提取器（泰安市阳光亮化工程有限公司）；高效液相色谱仪Agilent 1100系列高效液相色谱仪；ELSD－Alltech蒸发光散射检测器，TSP－AS3000自动进样器；超声清洗仪HIV－1006（华南超声设备）；电子分析天平MettlerAE 240；0.45μm微孔滤膜（上海半岛实业有限公司）；色谱柱：Kromasil C18柱（4.6 mm×250 mm，5μm）；多功能提取罐；1 000 L三效减压浓缩罐；喷雾干燥器；颗粒自动填充器。

1.1.2 试剂 淀粉、糊精、乳糖甘露醇、乙醇、正丁醇、甲醇（GR），黄芪甲苷对照品（批号：0781－200311，中国药品生物制品检定所），生血颗粒（本院制剂室制备），其他试剂均为分析纯。

1.2 生血颗粒的提取分离 首先将当归、川芎在挥发油提取器中提取得挥发油，所得挥发油与β－环状糊精（β－CD）包合。提取挥发油后的当归、川芎与黄芪等共九味药材回流提取，合并滤液，减压浓缩得稠浸膏。

1.2.1 挥发油提取工艺研究 为了选择合理的当归、川芎中挥发油的提取工艺，我们设计了正交试验，选用L9（34）正交表，对影响提取效果的浸泡时间、蒸馏时间、溶剂倍数主要因素进行考察，正交试验的因素水平见表1。

表1 挥发油提取因素水平表

表2 挥发油提取正交试验条件排列组合表

表3 挥发油提取正交试验方差及分析结果表

从上述方差分析结果可以看出，正交试验考察的3个因素中，加水量影响最大，其次为蒸馏时间，最后为浸泡时间。C因素有显著差异（P＜0.05），C因素中C3＞C2＞C1，因此选择显著因素最好的水平C3；A、B两因素差异不明显（P＞0.05），因此A、B两个因素为次要因素，根据节能省时、降低成本的原则，选择A1B1C3为最佳提取工艺路线。即药材用10倍水蒸馏4 h。并经工艺验证证实所选的工艺条件为较优工艺。

1.2.2 挥发油的β－CD包合工艺研究 结合实际生产情况，挥发油的β－CD包合工艺采用饱和水溶液法。同样采用正交实验法对包合工艺进行优选，选用L9（34）正交表，对影响包合的β－CD与挥发油的配比、包合温度及搅拌时间进行研究。

由正交实验结果可知，影响挥发油包合率的主要因素为β－CD与挥发油的配比，并从节约能源，缩短生产时间，降低成本的角度考虑，最后确定的包合工艺条件：β－CD与挥发油的比为10∶1，40℃搅拌1 h。

1.2.3 药材水提工艺研究 将提取了挥发油后的当归、川芎与处方中的其余药物合并，然后进行水提。我们对水提工艺的优化作了三因素三水平的考察，选用L9（34）正交表，对提取时间、加水倍数及提取次数三个主要因素进行考察。

表4 水提工艺因素水平表

表5 药材水提正交试验结果表

表6 药材水提正交试验方差及分析结果表

上述方差分析结果得出，对水提工艺中黄芪甲苷含量的影响大小顺序是：提取次数＞加水量＞提取时间，提取次数对结果有显著性影响。最后确定最佳提取工艺路线为：A2B3C1，即加入的水量为10倍，提取次数为3次，提取时间为1 h。

1.2.4 浓缩工艺研究 药材经过水提取后，提取液需要继续浓缩成稠膏才能进行干燥。为了更好的保留有效成分，我们确定采用减压浓缩的方法。结合生产实际，控制减压浓缩的条件为：65～75℃，－0.08 Mpa。

1.2.5 干燥工艺研究 目前生产中用到的干燥方法主要有常压干燥、减压干燥、喷雾干燥3种。比较3种干燥方法，喷雾干燥的干燥时间短、温度低、有效成分破坏少，在实际生产中已经得到了广泛应用。因此为了更好的保留制剂中的有效成分，保证制剂的疗效，我们确定采用喷雾干燥的方法进行干燥［2］。

通过实验确定浸膏相对密度为1.05～1.10（60℃），进料速度为20～24 kg·h－1，进风温度为185～200℃、出风温度为80～90℃，塔体温度选择为130～135℃，雾化压力高于0.3 Mpa。在此条件下可得到最优的干燥效果。为了确保制剂的质量，需要对药粉进行灭菌，确定采用钴－60照射灭菌，灭菌的条件控制为：6～8 kGy。

1.3 生血颗粒制备工艺的研究

1.3.1 成型工艺的研究 采用已经确定的工艺条件，对药材提取的得膏率进行测定，实验结果表明，工艺的出膏率基本稳定在14%左右。

根据上述结果，1倍处方量药材经过提取后所得干膏量为：2 300 g×14%＝322 g，可以加入适量的淀粉调整药粉的总量为5.0 g，为了便于服用颗粒的装量定为5.0 g／袋。

1.3.2 辅料种类及用量的筛选 常用稀释剂有淀粉、糊精、乳糖、甘露醇等，采用吸湿性试验法筛选。试验中分别以30%的量混入干浸膏粉中，放置在75%相对湿度中（25℃）84 h。考察浸膏的吸湿率可知糊精、乳糖吸湿率基本一致，从降低成本的角度考虑，确定选择糊精。

取一定量药粉，按不同量加入糊精后，考察药粉吸湿性的变化情况。称取混合粉末2 g，平铺于干燥至恒重的称量瓶中，干燥至恒重，精密称定，置盛有硫酸溶液溶液的干燥器中（相对湿度75%）于25℃恒温箱中保存84 h，称重，计算吸湿率，结果表明，糊精加入量是干膏的0.3～0.5倍较好。但辅料越多，服用量越大，成本越高，故选择量为0.3倍为好。

2 处方的确定及制备

2.1 处方 黄芪5 000 g、当归3 000 g、人参1 500 g、地黄3 000 g、白芍3 000 g、川芎3 000 g、仙茅1 500 g、茯苓1 500 g、淫羊藿1 500 g。

2.2 制备 当归、川芎在挥发油提取器中以10倍水蒸馏提取4 h，得挥发油6.1 mL。所得挥发油6.1 mL与61 gβ－CD在40℃搅拌1 h，包合物备用。提取挥发油后的当归、川芎与黄芪等共九味药材，加10倍量水，加热回流提取3次，每次1 h，滤过，合并滤液，减压浓缩至相对密度为1.05～1.10（60℃）的稠浸膏。喷雾干燥，灭菌，加入适量糊精，与包合物混匀，用85%乙醇制颗粒，过20目筛，60℃干燥，整粒，包装，共制1 000袋，即得。

2.3 颗粒理化性质研究

2.3.1 性状 本品为颗粒剂，外观为棕褐色或黑褐色的颗粒或粉末，气香，味微苦。

2.3.2 堆密度 称取一定量的合格颗粒，装入10 mL量筒中，以一定高度落下数次，使松紧适度，以重量除以容积得堆密度，平均堆密度为0.631 6 g·mL－1。

2.3.3 流动性 采用固定漏斗法，计算出休止角为33.7°（tga＝H／R），颗粒的流动性较好。

2.3.4 吸湿性 取样品4份，各2 g，精密称定，分别置于4个已干燥至恒重的称量瓶中，再分别置于恒湿（不同浓硫酸造成的湿度环境）的干燥器中，室温为26℃，1 h后，取出，称重，计算吸湿量。结果显示RH＞65%时吸湿性强，在RH 58%以下时吸湿性不强，因此生产环境的相对湿度应控制在55%以下。

3 有关质量研究

3.1 鉴别研究 按《中国药典》2010年版（一部）中有关规定对处方中黄芪、当归、人参、川芎、地黄、白芍和淫羊藿分别采用薄层色谱进行鉴别研究［3］，检测结果一致，可收入质量标准。

3.2 检查 按《中国药典》2010年版（一部）附录ⅠC颗粒剂项下的有关规定［3］，对本制剂进行了水分、装量差异、溶化性、粒度和微生物限度等的检查，各项指标都符合要求。

3.3 黄芪甲苷含量测定 取3批样品，平行制备2份供试品溶液，分别测定黄芪甲苷的含量［4］，结果见表7。

表7 稳定性考察含量测定结果

根据3批样品测定结果，并结合药典中有关规定，暂规定本品每袋含黄芪以黄芪甲苷计算，不得少于7.4 mg。

4 讨论

4.1 生血汤原处方为《医宗金鉴》中的圣愈汤，临床应用取得满意效果。制成颗粒剂具有易于溶解，分剂量准确，性质稳定，服用、携带、储存方便等特点，为较理想的剂型选择。

4.2 从制剂的处方可见，黄芪为方中的君药，其主要成分为黄芪甲苷，因此选择了黄芪甲苷作为水提效果的考察指标。

4.3 处方中的当归、川芎含有大量的挥发油，长时间煎煮容易挥发。为了更好的保留有效成分，我们确定先提取挥发油并对其进行包合。通过正交实验对影响提取效果的浸泡时间、蒸馏时间、溶剂用量及影响包合的β－CD与挥发油的配比、包合温度及搅拌时间等主要因素进行考察，确立最佳提取工艺为：10倍水蒸馏4 h。确立最佳包合工艺为：β－CD与挥发油的比为10∶1，40℃搅拌1 h。

4.4 在水提工艺研究中，通过正交实验对影响提取效果的提取时间、溶剂倍数及提取次数等主要因素进行考察，确立最佳提取工艺为：药材各以10倍量水提取3次，每次1 h。

4.5 以吸湿率为考察指标，对辅料的种类和用量进行筛选，确立最佳稀释剂为糊精，用量为浸膏量的0.3倍为佳。

4.6 通过对颗粒的理化性质考察，结果显示堆密度为0.631 6 g·mL－1，平均休止角为33.7°，结果表明颗粒的流动性良好，为确保产品的质量，环境的相对湿度控制应在55%以下。

4.7 在制剂质量标准研究中，对方中黄芪、当归、人参、白芍、川芎、地黄、仙茅、淫羊藿等进行薄层鉴别，并规定黄芪甲苷含量限度为不少于7.4 mg／袋。

4.8 当归也是本品的君药，目前，多以测定阿魏酸制含当归类样品的质量，但阿魏酸纯品不易得到，且经试验用HPLC法测阿魏酸含量，重现性不理想，故未将其纳入质量标准。

5 总结

生血颗粒是在生血汤的基础上改进而来，本文对其提取分离制备工艺进行研究，并得到最优的工艺路线。可大大降低生产成本，创造更多的产业价值，并能增强患者的顺应性。通过对质量标准的考察，可以为进一步应用于大生产提供理论依据。下一步将对其药理药效进行深入研究，为更好的应用于临床提供基础。

［1］张雪花，梁永广，崔淑云.生血汤的制备、质量控制及临床观察［J］.中国药师，2006，9（10）：940－941.

［2］韩俊，张明伟，张长弓.喷雾干燥与沸腾造粒法制备热咳停颗粒［J］.医药导报，2006，25（2）：146－147.

［3］国家药典委员会.中华人民共和国药典2010年版（一部）［M］.北京：中国医药科技出版社，2010：6.

［4］代磊，戚继红.HPLC－ELSD法测定复方石韦胶囊中黄芪甲苷的含量［J］.药学研究，2013，32（7）：391－393.

The preparation and quality research of Shenqi Shengxue Granules

XU Xiao-yan，LIANG Yong-guang，JIAGuang-wei
（Liaocheng People′s Hospital，Liaocheng 252000，China）

ObjectiveTo prepare Shenqi Shengxue Granules and evaluate its quality.MethodsThe orthogonal experiment was used to screen the key factors affecting the extraction and separation.The quality was investigated according to the Chinese pharmacopoeia 2010.ResultsWith volatile oil quantity as themain evaluation indexes，the optimal extraction conditionswere：10 times water for stilling four hours.In the water extraction process，with astragalusmembranaceusmethyl glucoside content as themain investigation indexes，the optimal extraction technology were：the drug residue with 10 times water，extracted three times，each time for1.5 hours.ConclusionThe preparation technology of Shenqi Shengxue Granules was feasible，and the quality conformed to the requirements.

Shenqi Shengxue Granules；Preparation；Quality research

R927.1

：A

2095－5375（2014）03－0158－004

徐晓艳，女，主管药师，研究方向：医院药学及药剂学，E－mail：1435570293＠qq.com