HPLC法同时测定疏血通脉胶囊中3种皂苷的含量

兰保强，刘 泰，伍小燕，但旭辉，曹 斌，吴玉强，张青萍，何乾超

（1.广西中医药研究院，广西南宁530022；2.广西中医药大学第一附属医院，广西南宁530023；3.广西中医药大学制药厂，广西南宁530023）

HPLC法同时测定疏血通脉胶囊中3种皂苷的含量

兰保强1，刘 泰2，伍小燕2，但旭辉3，曹 斌1，吴玉强2，张青萍2，何乾超2

（1.广西中医药研究院，广西南宁530022；2.广西中医药大学第一附属医院，广西南宁530023；3.广西中医药大学制药厂，广西南宁530023）

目的建立测定疏血通脉胶囊中三七有效成分含量的方法。方法采用高效液相色谱法，以Kromasil C18（4.6 mm×250 mm，5μm）为色谱柱，以乙腈－水为流动相进行梯度洗脱，流速1.0 mL·min－1，检测波长203 nm。结果人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1和三七皂苷R1进样量分别在1.02～10.20μg、0.95～9.50μg和0.35～3.50μg范围内与各自峰面积积分值呈良好线性关系（r＝0.999 9），平均回收率分别为100.40%、98.90%和99.61%，RSD分别为1.71%、1.98%和1.69%（n＝6）。结论所采用的方法操作简单，可靠，准确，可作为疏血通脉胶囊的质量控制方法。

疏血通脉胶囊；高效液相色谱法；人参皂苷Rg1；人参皂苷Rb1；三七皂苷R1

疏血通脉胶囊是广西名中医刘泰主任医师根据前人的经验，立足中医中风痰淤致病理论而拟定的缺血性脑中风的药物验方。由三七、薤白、地龙等药味组成，多年来临床观察表明其对老年脑梗死的神经功能缺损评分、中医证候疗效等方面均有改善，对缺血性中风急性期有很好的疗效，且不良反应小［1～3］。三七为方中名贵药材，三七总皂苷是其主要有效成分之一，可明显降低血清胆固醇和甘油三酯的含量，显著提高血清高密度脂蛋白胆固醇与胆固醇的比值［4］是反映本制剂功能主治的重要组分，因此选择三七主要皂苷活性成分作为本制剂的主要质量控制指标，本研究采用反向HPLC法，同时测定疏血通脉胶囊中的人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1和三七皂苷R13种主要活性成分的含量，为本制剂的质量控制奠定基础。

1 仪器与试药

1.1 仪器 LC－20A高效液相色谱仪，SPD－20A紫外检测器（日本岛津公司）；威玛龙色谱工作站。

1.2 试药 人参皂苷Rg1对照品（批号：110703－201027）、人参皂苷Rb1对照品（批号：110704－201122）、三七皂苷R1对照品（批号：110745－200617）均由中国药品生物制品检定所提供，供含量测定用。乙腈、甲醇为色谱纯，水为重蒸水。疏血通脉胶囊及缺三七的阴性对照样品由广西中医药研究院提供。

2 方法与结果

2.1 混合对照品溶液的制备 精密称取人参皂苷Rg1对照品、人参皂苷Rb1对照品及三七皂苷R1对照品适量，加甲醇制成每1 mL含人参皂苷Rg10.390 mg、人参皂苷Rb10.394 mg、三七皂苷R10.097 mg的混合溶液，即得。

2.2 供试品溶液的制备 取装量差异项下的本品内容物，研细，取1.0 g，精密称定，精密加入甲醇50 mL，称定重量，超声处理（功率250W，频率40 kHz）60 min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.3 阴性样品溶液的制备 按疏血通脉胶囊制备方法制取缺三七的阴性样品，按“2.2”项下方法制得阴性样品溶液。

2.4 色谱条件与系统适用性试验 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，以水为流动相B，按表1中的规定进行梯度洗脱；检测波长为203 nm。理论板数按三七皂苷R1峰计算应不低于4 000。

表1 流动相梯度表

2.5 色谱行为 分别取混合对照品溶液、供试品溶液及阴性样品溶液各10μL注入高效色谱仪中，测定，结果3种皂苷分离度均大于1.5，阴性样品在人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1及三七皂苷R1出峰位置均无吸收峰，表明处方中其他成分对测定无干扰。色谱图见图1。

2.6 方法学考察

2.6.1 线性关系考察 分别精密称取人参皂苷Rg1对照品、人参皂苷Rb1对照品及三七皂苷R1对照品适量，加甲醇溶解，分别稀释成系列浓度，并按“2.4”项下的色谱条件分别进样10μL，记录峰面积，以进样量（X，μg）为横坐标，以峰面积值（Y）为纵坐标，绘制标准曲线，结果各组对照品峰面积和浓度呈良好的线性关系，结果见表2。

图1 样品溶液的色谱图

表2 3种皂苷对照品的回归方程

2.6.2 精密度试验 精密吸取“2.1”项下的混合对照品溶液10μL，连续测定6次，6次测定所得人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1及三七皂苷R1峰面积的RSD分别为0.64%、1.01%和0.79%（n＝6）。

2.6.3 稳定性试验 对同一供试品溶液，在24 h内隔一定时间测定一次，共测定8次，结果8次测定供试品溶液中人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1及三七皂苷R1峰面积的RSD分别为0.68%、0.66%、0.71%（n＝8），试验表明，在24 h内，供试品溶液稳定。

2.6.4 重复性试验 对同一批样品，按“2.2”项下方法提取供试品溶液，平行提取6份，进样测定，结果供试品溶液中人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1及三七皂苷R1的平均含量分别为15.88、16.30和4.82 mg·g－1，峰面积的RSD分别为1.61%、0.50%、1.88%（n＝6）。

2.6.5 加样回收率试验 取已知含量的样品约0.5 g，共6份，精密称定，分别精密加入含人参皂苷Rg10.219 mg·mL－1、人参皂苷Rb10.188 mg·mL－1和三七皂苷R10.059 mg·mL－13种对照的混合甲醇溶液50 mL，按“2.2”项下方法处理得供试品溶液，分别进样测定，计算回收率。结果疏血通脉胶囊中人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1及三七皂苷R1的平均回收率分别为100.40%（RSD＝1.71%）、98.90%（RSD＝1.98%）和99.61%（RSD＝1.69%）（n＝6）。

2.7 样品测定 按上文拟订的含量测定方法，测定了本品3批样品的含量，结果见表3。

Sim ultaneous determ ination of three saponins in Shuxue Tongm ai Capsules by HPLC

LAN Bao-qiang1，LIU Tai2，WU Xiao-yan2，DAN Xun-hui3，CAO Bin1，WU Yu-qiang2，ZHANG Qing-ping2，HE Qian-chao2
（1.Guangxi Academy of Traditional Medical and Pharmaceutical Sciences，Nanning 530022，China；2.Guangxi University of Chinese Medicine，Nanning 530023，China；3.Guangxi University of Chinese Medicine Pharmaceutical Factory，Nanning 530023，China）

ObjectiveTo developed amethod for the simultaneous determination of active ingredients in Shuxue Tongmai Capsules.MethodsHPLC was used with Kromasil C18（4.6 mm×250 mm，5μm）Chromatographic column.Mobile phase consisted of acetonitrile－water with gradient elution at a flow rate of1.0 mL·min－1.The detection wavelength was 203 nm.ResultsThe linear range was 1.02～10.20μg for Ginsenoside Rg1，0.95～9.50μg for Ginsenoside Rb1and 0.35～3.50μg for Notoginsenoside R1（r＝0.999 9），the average recovery were 100.40%，98.90%and 99.61%，respectively，with the corresponding RSD of 1.71%，1.98%and 1.69%，respectively.ConclusionThemethod was simple and rapid.Itwas suitable for quality control of Shuxue Tongmai Capsules.

Shuxue Tongmai Capsules；HPLC；Ginsnoside Rg1；Ginsnoside Rb1；Notoginsenoside R1

R927.2

：A

2095－5375（2014）03－0137－003

广西科学研究与技术开发计划项目（桂科攻No.11107009－1－11）、广西自然科学基金项目（No.2011GXNSFA018180）

兰保强，男，助理研究员，研究方向：中药药物及其制剂，E－mail：lanbaoqiang2008＠126.com

刘泰，男，主任医师，研究方向：脑血管疾病的中西医结合临床研究，Tel：0771－5869102，E－mail：liutai590216＠163.com